超高效液相色谱-串联质谱测定蒜苔中多菌灵和噻菌灵的残留量_图文

1、山东农业科学 2010,4:8991Shandong Agricu ltural Sc iences收稿日期:2010-02-02基金项目:蔬菜、水果中保鲜剂、催熟剂检验技术研究。作者简介:胡 梅(1968-,女,高级工程师,主要从事食品安全、农残分析及研究。E -ma i :l s dz j yhm163 co m *通讯作者:王 骏(1972-,男,高级工程师,主要从事食品安全、农残分析及研究。E -ma i :l sdz j y w j 163 co m超高效液相色谱-串联质谱测定蒜苔中多菌灵和噻菌灵的残留量胡 梅,王 骏*,张 卉,张喜琦,祝建华(山东省产品质量监督检验研究院/国家加工

2、食品质量监督检验中心,山东济南 250100摘 要:建立了用超高效液相色谱-串联质谱测定蒜苔中多菌灵和噻菌灵残留量的方法。用甲醇-盐酸溶液提取试样中的多菌灵和噻菌灵,经固相萃取净化,以ACQU I TY U PLC R BE H C18柱分离、串联质谱测定。多菌灵和噻菌灵的最低检出限均为1 0 g /kg;多菌灵回收率为92 8%103 2%,相对标准偏差为3 57%5 01%;噻菌灵回收率为90 9%102 5%,相对标准偏差为3 44%4 97%。关键词:超高效液相色谱-串联质谱;蒜苔;多菌灵;噻菌灵;残留中图分类号:X 836 02 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2010

3、04-0089-03Deter m i nation of Carbe ndazi m and Thiabendazole Resi duesi n Garlic Sprouts by UPLC -M S /M SHU M e,i WANG Jun *,Z HANG H u,i Z HANG X i-q,i Z HU Jian-hua(Shandon g P rovi ncial Ins titute of P roduct Q ualit y Sup ervision&Ins p ection /N ational Cen tre for Q uality Sup ervis i o

4、nand T esting of Processe d F ood (Shandong ,J inan 250100,China Abst ract A m ethod f o r the deter m i n ation of car bendazi m and t h iabendazole residues in garlic sprou ts w as established by UPLC -M S /M S The sa m ple w as ex tracted w ith m ethano l-HC l aqueous solution ,cleaned up by so l

5、i d -phase extraction after separated on AC QU I T Y UPLC RBE H C18co l u mn,and then detected bytande m m ass spectro m etry The m ini m um detection li m its of car bendazi m and th iabendazo le w ere both 1 0 g /kg The recovery rates o f carbendazi m w ere 92 8%103 2%w ith the RSD o f 3 57%5 01%,

6、wh ile those o f th iabendazo le w ere 90 9%102 5%w ith t h e RSD of 3 44%4 97%K ey w ords UPLC-M S /M S ;Garlic spr outs ;Carbendazi m ;Th iabendazo le ;Resi d ue 蒜苔是我国人民喜食的一种蔬菜,随着蔬菜保鲜技术的应用,蒜苔可储存半年以上而保持品质基本不变。多菌灵和噻菌灵是蒜苔储存中经常使用的保鲜剂,经喷雾或浸蘸后的蒜苔,不但可以延长储存时间,还可保鲜、保绿。我国对多菌灵和噻菌灵在蔬菜中的残留有明确的限量要求,报道的多菌灵和噻菌灵的残

7、留检测方法主要有:分光光度法1,2、液相色谱法36、离子交换色谱等7。采用液相色谱-质谱技术同时测定多菌灵和噻菌灵残留的方法未见报道。本文介绍了超高效液相色谱-串联质谱测定蒜苔中多菌灵和噻菌灵残留量的方法,操作步骤简单,定性、定量准确可靠,灵敏度高,可以满足储藏蒜苔中多菌灵和噻菌灵残留量的检测要求。1 材料与方法1 1 试剂与材料甲醇:色谱纯;乙酸铵:分析纯;冰乙酸:优级纯;超纯水:18 2M ;盐酸:优级纯;2 0%甲酸(分析纯溶液;甲醇-氨水:含5 0%氨水;多菌灵、噻菌灵标样:99 0%,购自国家农药质检中心(沈阳;多菌灵、噻菌灵标样溶液:分别称取10 0m g 多菌灵和噻菌灵标样,加入

8、0 1m o l/L 盐酸0 5m l 溶解,用甲醇定容于同一只100m l 容量瓶中,此溶液中多菌灵、噻菌灵浓度均为100 g /m ,l 作为贮备标准液,于4 避光存储。1 2 仪器超高效液相色谱-串联质谱联用仪:W aters Quattro Pre m ier XE ,配有ESC I 复合电离源;色谱柱:ACQU I T Y UPLC RBE H C18,50mm 2 1mm (,i d,1 7 m;O asis R MCX 固相萃取柱:W aters 公司,60m g /3m ;l 0 22 m 有机样品过滤器;食品粉碎机;均质机;离心机;氮吹仪。1 3 试验条件1 3 1 色谱操作

9、条件 流动相:A 相为甲醇;B 相为0 1%甲酸水溶液。梯度洗脱:00 5m i n ,10%A;0 54 0m i n ,10%A 线性变化至60%A;4 05 0m i n ,60%A 线性变化至90%A;5 05 1m i n ,90%A 线性变化至10%A;5 17 0m in ,10%A 。流速:0 30m l/m in ;柱温:40 ;进样量:10 l。1 3 2 质谱检测条件 ESI 正离子检测模式:毛细管电压为3 2kV;锥孔电压见表1;离子源温度为110 ;脱溶剂气温度为400 。脱溶剂气(N 2流量:600L /h ;锥孔气(N 2流量:50L /h ;碰撞室压力:0 36

10、Pa 。质谱分辨率:单位质量分辨;扫描模式:MR M (多反应监测。多菌灵、噻菌灵定性、定量离子见表1。表1 多菌灵、噻菌灵定性、定量离子及锥孔电压、碰撞能量待测组分监测离子对锥孔电压(V碰撞能量(e V多菌灵192>160192>132*噻菌灵202>175202>131323225 30图1 多菌灵、噻菌灵的M R M 图1 4 测定步骤1 4 1 标准曲线 将多菌灵、噻菌灵混合标准贮备液依次稀释成浓度为1 0、5 0、10 0、50 0、100 0ng /m l 的系列标准溶液,分别进样测定,以定量离子色谱图中的峰面积定量,绘制标准曲线。1 42 样品处理 准确称

11、取5 00g (精确至0 01g充分粉碎并混匀的蒜苔试样匀浆,置于50m l 聚丙烯离心管中,移入甲醇10m l 、0 1m o l/L 盐酸溶液5m ,l 20000r /m in 均质2m in ,超声波提取15m i n ,4000r/m i n 离心5m i n 。全部提取液和固形物通过垫有双层滤纸和5g 助滤剂Ce lite 545的布氏漏斗过滤,滤饼用20m l 甲醇分3次洗涤,滤液全部转移至50m l 容量瓶中,用1+1(体积比的甲醇水溶液定容至刻度,摇匀备用。准确移取此溶液20m l 于100m l 分液漏斗中,分别用20、10m l 正己烷萃取2次,弃去正己烷相,甲醇-水相备

12、用。取一支MCX 固相萃取柱,用5m l 甲醇、5m l90山东农业科学 2010年水活化,将正己烷萃取后的溶液10m l通过小柱,依次用2 0%甲酸溶液5m l、甲醇5m l淋洗固相萃取柱,弃去流出液后抽干小柱。用5m l甲醇-氨水洗脱,收集全部流出液于10m l刻度试管中,在氮吹仪上缓慢吹至近干,加入1 00m l甲醇-0 1%甲酸溶液(体积比1 9,漩涡混合1m i n,摇匀。过0 22 m有机样品过滤器后进样测定,标准曲线定量。2 结果与分析2 1 色谱条件的选择试样中多菌灵和噻菌灵常采用反相色谱分离,由于要采用正离子模式检测,必须使用酸性流动相,以保证两组分充分电离。试验了甲醇+ 0

13、 1%甲酸溶液以及甲醇+乙酸铵溶液等流动相。经比较,使用含有甲酸溶液的流动相,两组分均以阳离子形式存在,保留时间较短,难以分离;使用甲醇+20mm o l/L乙酸铵溶液为流动相,采用梯度洗脱方式分离试样中的多菌灵和噻菌灵,两组分保留时间适中,峰形良好。2 2 质谱条件的选择用流动注射法(FI A对1m g/L多菌灵、噻菌灵标准溶液直接进行质谱分析,通过母离子扫描和子离子扫描,确定了多菌灵、噻菌灵的监测离子,并优化了毛细管电压、离子源温度、脱溶剂气温度和脱溶剂气流量、锥孔气流量、锥孔电压、碰撞能量等参数。2 3 提取净化方法试样采用甲醇-盐酸溶液提取,目的是将多菌灵和噻菌灵转化为盐酸盐,以保证较

14、好的提取效果。由于甲醇的存在,蒜苔中的脂溶性色素也被部分提取出来,用正己烷萃取2次,可有效去除绝大部分脂溶性色素,多菌灵和噻菌灵由于成为阳离子而保留在甲醇-水相中。采用兼有阳离子交换和反相机理的MCX固相萃取柱再次净化,可以选择性地保留多菌灵和噻菌灵阳离子,而有效去除其它的杂质。经加标回收试验证实,基本无基质效应,净化效果显著。2 4 线性范围和检出限配制系列浓度的多菌灵、噻菌灵混合标准溶液,分别进样测定,以多菌灵(噻菌灵的峰面积(Y对其浓度(X,ng/m l绘制标准曲线,线性方程为Y=1529 4X+416 18(多菌灵,Y=1386 5X+354 21(噻菌灵;R2分别为0 9982 (多

15、菌灵、0 9991(噻菌灵。结果表明,在1 0 100 0ng/m l范围内,具有良好的线性关系,符合定量要求。在本试验选定的最佳检测条件下,当空白试样中多菌灵/噻菌灵的添加量为1 0 g/kg时,定量离子色谱峰的信噪比s/n 10,由此确定方法的最低检出限为1 0 g/kg。2 5 方法精密度与回收率向不含多菌灵、噻菌灵的蒜苔试样中添加1 0、5 0、10 0 g/kg3个浓度水平的多菌灵和噻菌灵标样溶液,分别进行6次平行测定。结果多菌灵回收率为92 8%103 2%,相对标准偏差为3 57%5 01%;噻菌灵回收率为90 9% 102 5%,相对标准偏差为3 44%4 97%。3 结论建立

16、了固相萃取净化、超高效液相色谱-串联质谱联用测定蒜苔中多菌灵和噻菌灵残留量的方法,应用该方法测定了30批市售蒜苔样品,结果有9批样品检出噻菌灵残留,1批检出多菌灵残留,检出量在12 4148 g/kg之间。应用结果表明,该方法测定蒜苔中的多菌灵、噻菌灵残留,操作简单,净化效果明显,定性、定量准确,灵敏度高,尤其在低残留量样品的定性、定量检测中,优势明显。参 考 文 献:1 GB/T5009 188-2003.蔬菜、水果中甲基托布津、多菌灵的测定S2 于彦彬,苗在京,万述伟,等 三波长校正光度法测定水果蔬菜中多菌灵残留量J 理化检验-化学分册,2005,41(5:353-3573 牟仁祥,谢绍军,闵 捷,等 PSA分散固相萃取和离子对液相色谱测定蔬菜中苯并咪唑类残留的研究J 分析测试学报,2008,27(3:280-2834 刘晓松,童张法,郑 玲,等 固相萃取-高效液相色谱法同时测定噻菌灵和多菌灵在浓缩菠萝汁中的残留量J分