实验五放线菌形态观察

1、放线菌形态的观察放线菌形态的观察目的要求目的要求实验材料实验材料实验程序实验程序思考题思考题目的要求目的要求学习观察放线菌的基本方法学习观察放线菌的基本方法加深理解放线菌的形态特征加深理解放线菌的形态特征实验材料实验材料放线菌培养物：放线菌培养物：费氏链霉菌（费氏链霉菌（Streptomyces fradiae Streptomyces fradiae ）或或“5406”“5406”产生菌（产生菌（St. microflacusSt. microflacus）细黄链霉菌四天培养物。细黄链霉菌四天培养物。显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、酒精灯、镊显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、酒

2、精灯、镊子等。子等。酒精、蒸馏水等。酒精、蒸馏水等。G GGCGC含量高（和另一类阳性菌含量高（和另一类阳性菌厚壁菌门相比）厚壁菌门相比）好氧、少部分寄生兼性厌氧好氧、少部分寄生兼性厌氧放线菌重要的属有：放线菌重要的属有：放线菌属放线菌属( (ActinomycesActinomyces) )节杆菌属节杆菌属( (ArthrobacterArthrobacter) )棒杆菌属棒杆菌属( (CorynebacteriumCorynebacterium) )弗兰克氏菌属弗兰克氏菌属( (FrankiaFrankia) )微球菌属微球菌属( (MicrococcusMicrococcus) )微单孢

3、菌属微单孢菌属( (MicromonosporaMicromonospora) )分枝杆菌属分枝杆菌属( (MycobacteriumMycobacterium) )诺卡氏菌属诺卡氏菌属( (NocardiaNocardia) )丙酸杆菌属丙酸杆菌属( (PropionibacteriumPropionibacterium) )链霉菌属链霉菌属( (StreptomycesStreptomyces) )(1)(1)链霉菌属（链霉菌属（StreptomycesStreptomyces）分枝菌丝分枝菌丝孢子体或气生菌丝孢子体或气生菌丝菌丝无横隔菌丝无横隔好氧好氧原核生物原核生物降解高分子底物降解高

4、分子底物生长条件简单生长条件简单抗生素抗生素(2)(2)棒状杆菌属（棒状杆菌属（CorynrbacteriumCorynrbacterium）谷氨酸棒杆菌（谷氨酸棒杆菌（C. glutamicumC. glutamicum）味精生产菌味精生产菌氨基酸生物合成调节机制氨基酸生物合成调节机制白喉棒状杆菌（白喉棒状杆菌（C.diphtheriaeC.diphtheriae）(3)(3)分枝杆菌属分枝杆菌属( (MycobacteriumMycobacterium) )不规则杆状菌不规则杆状菌抗酸性染色抗酸性染色细胞壁含有大量的脂类和分枝菌酸细胞壁含有大量的脂类和分枝菌酸结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌结核

5、分枝杆菌、麻风分枝杆菌抗生素链霉素链霉素灰色链霉菌（灰色链霉菌（Streptomyces griseusStreptomyces griseus）四环素四环素红霉素红霉素新霉素新霉素庆大霉素庆大霉素Filamentous ActinomycetesTypical appearance of a streptomycete growing on agar slantsThe colors are due to the production of pigmentsFilamentous ActinomycetesAntibiotic action of soil microorganisms on

6、 a crowded platestreptomycetesBacillus插片法插片法1. 1.倒平板倒平板2. 2.接种：划线培养接种：划线培养3. 3.插片：无菌操作将盖玻片以大约插片：无菌操作将盖玻片以大约4545度角插入培养基度角插入培养基4. 4.培养培养 倒置培养倒置培养2828 ，通常，通常4 46 6天天5. 5.镜检镜检插片法插片法2828插片培养插片培养4 4- -6d6d，轻轻取出盖玻，轻轻取出盖玻片，片，直接观察直接观察镜检。镜检。观察菌丝和孢子丝自然生长的性状，观察菌丝和孢子丝自然生长的性状，其中包括气生菌丝（较粗）、基内其中包括气生菌丝（较粗）、基内菌丝（较细）和

7、孢子丝的形状，如菌丝（较细）和孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘图说明图说明（本实验采用本实验采用费氏轮生菌费氏轮生菌接接种后观察种后观察 ）。首先寻找插在培养基的界面分界线，首先寻找插在培养基的界面分界线，观察观察营养菌丝、气生菌丝形态及分营养菌丝、气生菌丝形态及分枝情况。枝情况。调节亮度调节亮度直接镜检直接镜检 Filamentous ActinomycetesStages in the conversion of a streptomycetes(链霉菌链霉菌) aerial hypha into spores (conidia)Various

8、typesof spore-bearingstructures in thestreptomycetesFilamentous ActinomycetesSeveral spore-bearing structures of actinomycetes: Streptomyces浸染法浸染法放线菌形态观察放线菌形态观察插片培养插片培养( (高氏高氏1 1号培养基号培养基) )，取片，取片浸染：浸染： 把盖玻片上把盖玻片上长有放线菌长有放线菌的部分，放入石碳酸复红的部分，放入石碳酸复红染液池中浸染染液池中浸染0.5-1 min0.5-1 min染色液：染色液：A A液：碱性复红液：碱性复红 0.

9、3g, 95%0.3g, 95%乙醇乙醇 10ml10ml；B B液：石碳酸液：石碳酸 5.0g, 5.0g, 蒸馏水蒸馏水95ml95ml。染色时，混合染色时，混合A A液及液及B B液，再将混合液稀释液，再将混合液稀释5 5倍即成。倍即成。干燥：干燥： 染色完毕，用染色完毕，用吸水纸吸水纸吸掉盖玻片上多余的染液，吸掉盖玻片上多余的染液，将盖玻片放于酒精灯火焰上部烘干，将盖玻片放于酒精灯火焰上部烘干，注意温度不宜高注意温度不宜高，以，以免盖玻片碎裂。免盖玻片碎裂。镜检：镜检： 取一洁净载玻片，滴入取一洁净载玻片，滴入适量蒸馏水适量蒸馏水，用镊子将干燥，用镊子将干燥好的盖玻片放在滴有蒸馏水的地

10、方，好的盖玻片放在滴有蒸馏水的地方，有菌的一面朝上有菌的一面朝上，操，操作中尽量避免气泡的产生。盖玻片紧紧地贴附在载玻片上作中尽量避免气泡的产生。盖玻片紧紧地贴附在载玻片上后，切勿随意移动，随即进行显微观察。后，切勿随意移动，随即进行显微观察。插片法放线菌菌丝（插片法放线菌菌丝（ 40 40 ）插片法浸染法插片法浸染法菌丝（菌丝（ 40 ）插片法浸染法插片法浸染法放线菌孢子（放线菌孢子（100 100 ）插片法浸染法插片法浸染法放线菌孢子（放线菌孢子（ 100 100 ）印片染色法印片染色法1. 1.接种培养接种培养 2828培养培养4 47d7d2. 2.印片：印片： 用镊子取一小块菌苔，置

11、于载玻片上，取另用镊子取一小块菌苔，置于载玻片上，取另外一洁净玻片盖在菌苔上，轻轻粘一下菌苔表面，使外一洁净玻片盖在菌苔上，轻轻粘一下菌苔表面，使培养物（气丝、孢子丝、孢子）粘附载玻片中央，过培养物（气丝、孢子丝、孢子）粘附载玻片中央，过火焰火焰2 23 3次固定次固定3. 3.染色：石炭酸复红染色染色：石炭酸复红染色1min1min，水洗，水洗4. 4.镜检（油镜）镜检（油镜）. .印片法放线菌孢子（印片法放线菌孢子（100 100 ）印片法放线菌印片法放线菌菌丝菌丝（100 100 ）印片法放线菌孢子（印片法放线菌孢子（100 100 ）浸染法浸染法放线菌形态观察放线菌形态观察取片石碳酸复

12、红浸染取片石碳酸复红浸染0.5-1 min0.5-1 min 干燥：干燥： 注意温度不宜注意温度不宜高高镜检：镜检： 滴入滴入适量蒸馏水适量蒸馏水，将盖玻片放在滴有蒸馏水的地，将盖玻片放在滴有蒸馏水的地方，方，有菌的一面朝上有菌的一面朝上，显微观察。，显微观察。载玻片印片载玻片印片 固定固定 石炭酸复红染色石炭酸复红染色1 1min min 水水洗晾干油镜洗晾干油镜54065406菌孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲菌孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘图说明。等，并绘图说明。印片染色法印片染色法思考题思考题在用插片法观察气生菌丝和孢子丝的形态时，在用插片法观察气生菌丝和孢子丝的形态时，要注意些什么？要注意些什么？结结 束束实实 验验霉菌的载片培养霉菌的载片培养青霉、黑曲霉青霉、黑曲霉培养小室准备（干热灭菌）培养小室准备（干