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文档简介
1、人膀胱癌抗原(UBC)elisa试剂盒利用说明书Elisakit规格:48孔配置/96孔配置标准品稀释液:L5mlXl瓶酶标试剂:3mlXl瓶(48)/6mlXl瓶(96)【人胎胱癌抗原(UBC)elisa试剂盒】本试剂仅供研究利用计算:以标准物的浓度为横坐标,0D值为纵坐标,在座标纸上绘出标准曲线,依照样品的0D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数:或用标准物的浓度与0D值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的0D值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。试剂盒组成:封板膜:2片(48)/2片(96)说明书:1份密封袋:1个标准品:2700ng/L0.5mlX
2、1瓶0.5mlXl瓶2-8保留酶标包被板:1X481X962-8C保留样品稀释液:3mlXl瓶6 ml义1瓶2-89保留显色剂A液:3mlXl瓶6 ml.义1瓶2-8保留显色剂B液:3mlXl瓶6 ml义1瓶2-8保留终止液:3mlXl瓶6ml X 1 瓶2-8保留浓缩洗涤液:(20ml义20倍)XI瓶(20mlX30倍)XI瓶2-8C保留实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人膀胱癌抗原(UBC)水平。用纯化的人膀胱癌抗原(UBC)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入脐胱癌抗原(UBC),再与HRP标记的膀胱癌抗原(UBC)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,
3、通过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的膀胱癌抗原(UBC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值),通过标准曲线计算样品中人膀胱癌抗原(UBC)浓度。目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中膀胱癌抗原(UBC)的含量0效劳许诺:供货期:款到发货。工作时刻内免费的技术咨询和指导。请来电咨询为客户提供来样检测效劳,最大限度实验结果的有效性(免费代测几保留条件及有效期:试剂盒保留:2-8有效期:6个月【人膀胱癌抗原(UBC)elisa试剂盒】样本处置及要求:1 .血清:室温血液自然凝固10-2
4、0分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分分认真搜集上清,保留进程中如显现沉淀,应再次离心。2 .血浆:应依照标本的要求选择EDTA或柠椽酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。认真搜集上清,保留进程中如有沉淀形成,应该再次离心。3 .尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。认真搜集上清,保留进程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参如实行。4 .细胞培育上清:检测分泌性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。认真搜集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞
5、悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。认真搜集上清。保留进程中如有沉淀形成,应再次离心。5 .组织标本:切割标本后,称取重量。加入必然量的PBS,PH7.4O用液氮迅速冷冻保留备用。标本融化后仍然维持2-8的温度。加入必然量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。认真搜集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6 .标本搜集后及早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行实验,可将标本放于-20保留,但应幸免反复冻融.7
6、.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1 .标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中别离加标准品100U1,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50u1,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100口1别离加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔别离加标准品稀释液50ul,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50口1弃掉,再各取50R1别离加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中别离加标准品稀释液50ul,混匀:混匀后从第五、第六孔中各取50ul别离加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中别离加标准品稀释液50ul,混匀后从第七、第八孔中别
7、离取50口1加到第九、第十孔中,再在第九第十孔别离加标准品稀释液50口1,混匀后从第九第十孔中各取5041弃掉。(稀释后各孔加样量都为50U1,浓度别离为1800ng/L,1200ng/L,600ng/L,300ng/L,150ng/L)o2 .加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40口1,然后再加待测样品10ul(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3 .温育:用封板膜封板后置37温行30分钟。4 .配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸锵水30(48
8、T的20倍)倍稀释后备用。5 .洗涤:警惕揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6 .加酶:每孔加入酶标试剂50ul,空白孔除外。7 .温育:操作同3。8 .洗涤:操作同5。9 .显色:每孔先加入显色剂R50U1,再加入显色剂B50U1,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.10 .终止:每孔加终止液50口1,终止反映(现在蓝色立转黄色)。11 .测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(0D值)。测定应在加终止液后15分钟之内进行。【人膀胱癌抗原(UBC)elisa试剂盒】注意事项:1 .试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳.15-30分
9、钟后方可利用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保留。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不阻碍结果。3 .各步加样均应利用加样器,并常常校对其准确性,以幸免实验误差。一次加样时刻最好操纵在5分钟内,如标本数量多,推荐利用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量太高(样本0D值大于标准品孔第一孔的0D值),请先用样品稀释液稀释必然倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(XnX5)。5 .封板膜只限一次性利用,以幸免交叉污染。6 .底物请避光保留。7 .严格依照说明书的操作进行,实验结果判定必需以酶标仪读数为准.8 .所有样品,洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。9 .本试剂不同批号组分不得混用。10 .如与英文说明书有异,以英文说明书为准。试剂盒性能:1 .样
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