临床检验仪器第十三章PCR核酸扩增仪习题

1、第十三章PC*酸扩增仪一、名词解释1 . PC叱术：聚合酶链反应（PCR是一种体外核酸扩增技术。2 . TaqDNA聚合酶：存在于水生嗜热菌的嗜热 DNA聚合酶，可在74c复制DNA, 在95 c仍具有酶活力。3 .水浴锅PC电酸扩增仪：属于第一代PCR6因扩增仪，以不同温度的水浴锅串联 成一个控温体系。4 .压缩机PC电酸扩增仪：于第二代PCR8因扩增仪，由压缩机自动控温，金属导 热。5.Overshooting升温过程中，由于一些加热元件，比如半导体、金属块上积蓄的 能量仍然会传给PC咻系，造成实际的温度高于设定的温度，即overshooting现 象。6.Undershooting：在降

2、温过程中也会出现惯性，造成实际的温度短时间内会低于 设定温度。7.半导体PC戒酸扩增仪：属于第三代PCRS因扩增仪，由半导体自动控温，金属 导热。8 .离心式空气加热PCFT增仪：属于第三代PCRS因扩增仪，由金属线圈加热，采 用空气作为导热媒介。9 .梯度PCRR：带梯度PC劭能的基因扩增仪，在反应过程中每个孔的温度控制条 件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应 条件。io原位pcra：带原位扩增功能的基因扩增仪。11 .原位PC叱术：即在细胞内进行PCFT增，组织细胞的形态不被破坏，是原 位杂交与PC敬术结合而形成的新技术。12 .荧光实时定量PCFRfc术

3、：在PC©应体系中加入特异性的荧光染料或探针， 通过 检测荧光信号，实时监测整个PC©应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定 量分析。13 .位置的边缘效应：指PCW因扩增仪最外周的样品孔温度与中间的样品孔差异，不均一，从而导致外周样品孔的 PCRT增效率不佳。14 .模块温控模式：仪器根据探测器直接探测的承载样品金属基座温度进行控制， 该模式适用于长时间的静态孵育。15 .反应管温控模式：仪器根据探测器所探到的温控模块的温度由计算机计算出 样品管内或PCR板孔内样品液的温度来进行控制。16 .Ct化 C代表cycle,t代表threshold。值的含义是，每个反应管内的

4、荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数，每个模板的 Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。二、选择题【A型题】在五个选项中选出一个最佳答案。1 .以下哪种物质在PCRK应中不需要（D）A.Taq DN摩合酶B.dNTPsC.Mg2+D.RNA酶E合适PH缓冲液2 .以下哪种酶可耐高温（A）A.Taq DNA1合酶B.HindiiiC.T4连接酶D.RNA酶E.Klenow 片段3 .PCRS应的正确过程应为（B）A.退火一变性一延伸B.变性一退火一延伸C退火一延伸一变性D.变性一延伸一退火E延伸一变性一退火4.PC叱术的本质是（C）A.核酸杂交技术B.核酸重

5、组技术C核酸扩增技术D.核酸变性技术E核酸连接技术1. TaqDNA聚合酶促反应最适温度（C） A.37B.5055 cC.7075cD.8085 c E.9495 c2.温度均一性较好的PCR仪为（E）A.水浴锅PCR核酸扩增仪和压缩机PC*酸扩增仪B.半导体PCR核酸扩增仪和离心式空气加热 PCRI（酸扩增仪 C.压缩机PCR核酸扩增仪和半导体PC*酸扩增仪D.压缩机PCR核酸扩增仪和离心式空气加热 PCRg（酸扩增仪 E.水浴锅PCR核酸扩增仪和离心式空气加热 PCRI（酸扩增仪 3. 一步就可以摸索出最适合反应条件的 PCR仪为（B） A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D

6、.荧光PCR仪E.实时PCR仪4.能在细胞内进行PCR仪扩增的PCR仪为（C）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.荧光PCR仪E.实时PCR仪5. PC叱术扩增DNA,需要的条件是（A）目的基因；引物；四种脱氧核甘酸；DNA聚合酶等；mRNA核糖 体A.B.C.D.E.1. PCRg在引物、模板和4种脱氧核糖核甘酸存在的条件下依赖于 DNA聚合酶 的酶促合成反应，其特异性决定因素为（B）A.模板B.引物C. dNTPD.镁离子E. PH缓冲液2 .下述哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中 DNA原始拷贝数（D）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.荧光实时PCR仪E

7、.定性PCR仪3 .以下是经过PCR扩增后彳#到的Ct值，哪个样品的DNA原始拷贝数最多（A）A.样品 A, Ct=20B.样品 A, Ct=22C.样品 A, Ct=24D.样品 A, Ct=26E样品 A, Ct=2813.以空气为加热介质的PCR仪是（C）A.金属板实时定量PCR仪B.96孔板式实时定量PCR仪C离心式实时定量 PCR（文D.各孔独立控温的定量PCR仪E.荧光实时定量PCR仪14 .下述哪个PCRT增仪可能具有多色多通道检测系统（D）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C原位PCR仪D.荧光定量PCRaE定性PCR仪15 .下述哪个PCRT增仪对温度控制要求最高（B）A.普通

8、PCR仪B.梯度PCR仪C原位PCR仪D.荧光定量PCRaE定性PCR仪16 .控温精度最高的控温方式是（D）A.水浴锅控温B.压缩机控温C半导体控温D.离心式空气加热控温E都一样17 .在PCRT增过程中，下列哪个步骤对温度精度要求最高（B）A.变性B退火C延伸D.退火和变性E都一样18 .在PCRT增过程中，用同样的样品，同样的 PCR反应程序，同一个PCR仪, 最后的结果差异非常明显，其可能的原因是下列哪个（B）A.温度的准确性差B.温度的均一性差C升降温的速度低D.不同模式下的相同温度特性差E.热盖温度不准19 .PCR®酸扩增仪最关键的部分是（A）A.温度控制系统B.荧光检

9、测系统C软件系统D热盖E.样品基座20 .“位置的边缘效应”是指（D）A.温度的准确性欠佳B.温度的均一性欠佳C边缘升降温速度快D.边缘升降温速度慢E.梯度模式和标准模式温度不一致21 .PCRT增仪升降温速度快有很多优点，下述哪一项应除外（C）A.缩短反应时间B.提高工作效率C消除位置的边缘效应D.缩短非特异性反应时间E提高反应特异性22 .在梯度模式下得出最佳反应条件，并以此条件在标准模式下单独做，但结果 却不如人意，最有可能的原因是（EA.样品孔温度与设定温度不一致B.样品孔之间的温度有差异C.样品孔位置的边缘效应较高D.升降温速度不够快E不同模式温度特性有差异23 .定量PCRT增仪的

10、关机次序一般为（AA.关软件一关PCR仪一关电脑B.关软件一关电脑一关PCR仪C关PCR关一关软件一关电脑D.关PCR关电脑一关软件E关电脑一关PCR仪一关软件【X型题】每题的备选答案中有两个或两个以上正确答案。1. PC叱术每一个循环均包含以下哪些环节（BCD）A.酶切B.变性C.退火D.延伸E.连接2 .以下哪些酶可用于PCR反应（AC）A. KlenowB. HindiiiC. Taq DN咪合酶D. RNaseE. DNase3 .目前常用的PCR核酸扩增仪控温方式有（CD）A.水浴锅控温B.压缩机控温C.半导体控温D.离心式空气控温E.金属控温4 .普通PCR核酸扩增仪除通常的定性

11、PCRtZ外，还包括（ABCDEA.水浴式PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.变温金属块式PCR仪E.变温气流式PCR仪5.按变温方式不同，PCR核酸扩增仪可分为（ADE）A.水浴式PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.变温金属块式PCR仪E.变温气流式PCR仪6 .目前市场上实时荧光定量PCR仪一般有哪些类别（ADE）A.金属板实时定量PCR仪B.梯度定量PCR仪C.原位定量PCR仪D.离心式实时定量 PCR仪E.各孔独立控温的定量PCR仪7 .下述产品哪些属于金属板实时定量 PCR仪（BCDA. Light CycldM 荧光定量 PCR仪B. ABI 7500荧光定量 PC

12、RZC. MJ公司Chromo 4荧光定量PC敬D. Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪E. Rotor-Gene 3000荧光定量 PCRft8 .下述产品哪些属于离心式实时定量 PCR仪（AE）A.Light CycldM 荧光定量 PCRtZB.ABI 7500荧光定量PC敬C.MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪D.Biorad公司iCycler荧光定量PCR仪E.Rotor-Gene 3000荧光定量 PCR仪9 .PC*酸扩增仪的温度控制主要是指（ABD）A.温度的准确性控制B.温度的均一性控制C退火温度控制D.升降温速度控制E延伸温度控制10 .荧光定量PCR仪

13、的荧光检测系统主要包括（B。A.发光二极管B.激发光源C.检测器D.光度计E.光电倍增管11 .荧光定量PCR仪的荧光强度减弱或不稳定，可能的原因有（ABE）A.滤光片发霉B.光源损耗C半导体模块故障D.荧光染料污染E.光电倍增管灵敏度下降三、简答题1 .什么是聚合酶反应（PCR技术？PC岐术的本质是核酸扩增技术，通过加热使双链DNA单开螺旋，在退火温度条件 下引物同模板DN煤交，在Taq DNAK合酶，dNTPs Mg2利合适pHg冲液存在条 件下延伸引物，重复上述“变性一退火一引物延伸”过程至 25-40个循环，呈指 数级扩大待测样本中的核酸拷贝数，可以在体外对目的核酸进行大量复制。2 .

14、 PCRK酸扩增仪的工作关键是什么？经历了怎样一个发展过程？PCR8因扩增仪工作关键是温度控制。其发展过程为：水浴锅PC取属于第一代PCR 基因扩增仪，以不同温度的水浴锅串联成一个控温体系；压缩机PC敢属于第二代PCR6因扩增仪，由压缩机自动控温，金属导热，控温较第一代PCRS因扩增仪 方便；半导体PCRUS于第三代PCR6因扩增仪，由半导体自动控温，金属导热， 控温方便，体积小，相对稳定性好；离心式空气加热PC敢属于第三代PCR8因扩 增仪，由金属线圈加热，采用空气作为导热媒介，温度均一性好，各孔扩增效率 高度一致。3 . PCRK酸扩增仪按照变温方式的不同可分为哪几类？分别有什么特点。PC

15、国因扩增仪按照变温方式通常有以下三类：(1)水浴式PC敢：变温快、时间准、温度均一，但体积大，自动化程度不高。(2)变温金属块式PCFT 通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处 理过程。装置比较牢固耐用，温度变换平稳，有利于保持Taq DNA5合酶的活性。(3)变温气流式PC敢：以空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供 外部冷空气而制冷。成本较低；安全程度高。微机配上软件，可灵活编程。4 .什么是梯度PCR仪？它有什么优点？梯度PCRZ是由普通PCRZ衍生出的带梯度PC电能的基因扩增仪。在反应过 程中每个孔的温 度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步 就可以摸索

16、出最适合的反应条件。使用梯度 PCRX,多次实验可在一台仪器上完 成，既节省实验时间，提高实验效率，又节约实验成本。5 .何谓荧光实时定量 PCR (RQ-PCFR技术？荧光实时定量 PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR )技术即在 PC网应 体系中加入特异 性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中 模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时 监测整个PCRJ应过程，最后通过 标准曲线对未知模板进行定量分析。6 .荧光实时定量PCR仪有哪些种类，各有什么特点？ 目前市场上实时荧光定量PC©一般可分三类。(1)金属板式实时定量PC取：可容纳

17、的样本量大，无需特殊耗材， 但温度 一一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致。(2)离心式实时定量PC敢：能保障标准曲线和样品之间反应条件的一致性。 但可容纳样品量少，有的需用特殊毛细管作样品管，增加了使用成本。(3)各孔独立控温的定量PC敢：各孔独立控温，适合多指标快速检测。但 是上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。7 . PCR®酸扩增仪的温度控制包括哪些方面？PCRS因扩增仪的温度控制是决定PC网应能否成功的关键，主要包括温度 的准确性、均一性以及升降温速度等方面。(1)温度的准确性是指样品孔温度与设定温度的一致性；(2)温度的

18、均一性是指样品孔间的温度 差异，关系到不同样品孔之间反应结果的一致性； (3)升降温的速度：升降温速度快，可以缩短反应进行的时间，提高工作效率，并提高PCRJ应特异性。对梯度PCF来说，除此以外，还必须考虑仪器 在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。8 .为什么反应管温控比模块温控更准确？反应管温控模式下，仪器根据探测器所探测到的温控模块的温度由计算机计算出样 品管内或PCR5孔内样品液的温度来进行控制。由于精确的算法能自动补偿时间， 确保反应混合物按照程序设定的时间维持预设温度，所以准确度更高。9 .实时荧光定量PCR扩增仪的荧光检测系统主要由哪两部分组成？ 激发光源和检测器10 .

19、PCR扩增仪的热盖有什么作用、使用时应注意什么？目前PCRK通常都配备热盖，可使样品管顶部温度达到 150c左右，避免 蒸发的反应液凝集于 管盖而改变PC网应体积。无需加石蜡油，减少了后续 实验的麻烦。旋转加压的热盖需注意旋转压力的控制，过松则使热盖没有充分接触反应管而影响结果；过紧则会导致反应管变形，甚至可能造成热盖的 机械故障。11 .简述PCRT增仪的操作规程。普通PCFT增仪的操作通常为打开电源，仪器自检，设置温度程序或调出储存 的程序，运行即 可。定量PCFT增仪的操作一般都是先打开PCRa电源，再打 开相连电脑中的相应软件，分别设置温度程序、采集通道，并可根据不同仪器的要求进行一些特殊设置，在仪器中放好 PCRT,盖好仪器，运行 设置好的 反应程序。关机时通常先关软件，再关 PCR<,最后关电脑。12 .定量PCRT增仪常见故障有哪些，如何解决？定量PCFT增仪常见故障及解决方法为：（1）荧光染料污染样品孔，解决方法是请工程师清洁样品孔；（2） PCFRT融化， 原因可能是温度传 感器出问题或是热盖出问题，需工程师检修；（3）个别孔扩 增效率差异很大