丙型肝炎病毒基因分型及其与干扰素治疗应答的关系

1、丙型肝炎病毒基因分型及其与干扰素治疗应答的关系【摘要】目的为了解山西省丙型肝炎病毒的基因型和基因型对干扰素疗效的预示价值。方法用HCV5NC区酶切分型方法对94例丙型肝炎病人进行基因分型，并观察其中45例患者对干扰素-1b治疗的应答。结果显示HCV 组(、型)感染80例(85.1%)，HCV 组(、型)感染12例(12.8%)，HCV /组混合感染2例(2.1%)。在接受干扰素治疗的病例中，HCV 组感染(35例)的应答率为37.1%，持续应答率为17.1%，而组感染(10例)的应答率为80%，持续应答率为60%，两组相比，有显著性差异(P0.05，P0.025)。结论表明山西省以HCV 组感

2、染为主，干扰素对HCV 组感染的疗效优于HCV 组感染，HCV基因型有预测干扰素疗效的意义。【主题词】肝炎病毒，丙型基因型限制性内切片段长度多态性干扰素 Genotypic analysis of hepatitis C viruses and its significance in interferon treatmentZhao Heping, Cheng Baozhu, Guo Huian, et al. The First Affilicated Hospital of Shanxi University of Medical Sciences, Taiyuan030001Abstra

3、ctTo study the genotypes of HCV infection in Shanxi Province and the response of HCV genotypes to interferon therapy, the genotypes of HCV were analysed by restriction fragment length polymorphism in 94 chronic hepatitis C patients who were positive for HCV RNA (RT-PCR). It was shown that 80 patient

4、s (85.1%) were group infection, 12 (12.8%) were group infection and 2 (2.1%) were group / co-infection. 45 chronic hepatitis C patients with different genotypes (35 with HCV group , 10 with group ) receirved rIFN -1b 3MU three times a week for 6 months and were followed up to 12-34months. The respon

5、sive rate was significantly higher in patients with group infection (80%) than that in patients infected with group (37.1%) (P0.05). Sustained response was observed in 60% for group and in 17.1% for group (P0.025). The date indicated that HCV group is the major type of HCV infection in Shanxi Provin

6、ce the and HCV genotype seems to be an important factor in determining the response rate to IFN treatment in patients with chronic hepatitis C.Key words：Hepatitis CvirusGenotypeRestrictionfragmentlengthpolymorphismInterferon丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布随地区而异，同时HCV基因型具有重要临床意义。曾报道HCV基因型与疾病严重性、治疗应答、感染转归等相关13。我们应用限

7、制性内切酶技术对山西地区94例慢性丙型肝炎(CHC)患者进行HCV基因分型，并观察不同基因型在CHC中的分布和对干扰素治疗应答方面的差异。1材料和方法1.1病例来源与诊断标准94例CHC为我院住院及门诊病人，其中男63例，女31例；年龄569岁。血清抗-HCV(ELISA)和HCV RNA(RT-PCR)皆阳性，5例合并慢性HBV感染。按1995年第五次病毒性肝炎诊断标准诊断，慢性肝炎轻度52例，中度31例，肝硬化11例。25例慢性肝炎经肝活体组织检查，78例(82.9%)有输血或血制品史。1.2方法1.2.1RT-PCR检测血清HCV RNA试剂盒为北京肝病研究所制备。操作步骤按文献报道进行

8、4。1.2.2限制性片段长度多态性(RFLP)分析进行HCV基因分型取第2次PCR产物，用乙醇沉淀，加10l TE缓冲液溶解，以限制性内切酶Hae 37消化，取消化产物用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，EB染色后于紫外光灯下检查，根据酶切产物片段长度判断基因型，HCV 组(、型)不为酶切，在紫外光下见一条145bp的基因条带，而HCV 组(、型)被酶切成89bp和56bp两条基因片段。如出现145bp，89bp和56bp三条基因片段为HCV /组混合感染。1.2.3CHC病人的干扰素治疗45例CHC接受重组干扰素-1b(深圳科兴生物制品有限公司生产)治疗，剂量为3MU/次，肌注。前3天每天1次，以

9、后每周3次，疗程6个月。每月复查1次血清ALT和HCV RNA，治疗结束后随访1234个月，随访期间每3个月检测血清ALT和HCV RNA。2结果全部病例血清HCV RNA皆阳性，其HCV RNA阳性产物的RFLP分析结果显示，HCV 组80例(85.1%)，组12例(12.8%)，HCV /组混合2例(2.1%)。80例HCV 组感染与12例HCV 组感染在年龄、性别、输血史等方面基本相同(P0.05)在临床类型中的分布亦未见明显差异(P0.05)。见表1。45例接受重组干扰素-1b治疗的患者中，35例为HCV 组感染。10例为HCV 组感染。此两组病例在年龄、性别、输血史、病程、病情、治疗

10、前血清ALT水平等方面均具有可比性(P0.05)，见表2。以干扰素治疗6月时血清ALT复常，HCV RNA阴转定为有应答，疗效持续至治疗结束后12月或12月以上为持续应答，治疗结束时ALT无明显下降、HCV RNA仍为阳性者为无应答。HCV 组感染的应答率分别为37.1%和80%(P0.05)而持续应答率分别为17.1%和60%(P0.025)，两组疗效相比，有显著性差异。见表3。表1HCV 组和组感染病例的一般情况和临床类型Tab.1General conditions and clinical types of HCV groups and infected cases病人情况Condit

11、ions ofthe patientsHCV 组HCV group (n=80)HCV组HCV group (n=12)年龄(年)42.714.942.115.7Age(year)性别(男/女)54268/4Sex(male/female)感染来源lnfection source受血及血制品69(86.3%)9(75%)Recipient of unscreenedblood and blood product散发11(13.7%)3(25%)SporadicHCV和HBV重叠感染4(5%)1(8.3%)HCV+HBV临床类型Clinical type慢性肝炎Chronic hepatitis

12、轻型43(53.8%)8(66.7%)Mild type中型26(32.5%)4(33.3%)Moderate type肝硬化11(13.7%)0Liver cirrhosis 表2干扰素治疗HCV 组和组患者的临床情况Tab.2Clinical conditions of interferon-treated HCV groups and group patients病人情况Conditions of the patientsHCV HCV group (n=35)HCV HCV group (n=10)年龄(年)45.214.942.615.8Age (year)性别(男/女)28/78/

13、2Sex (male/female)输血史287Blood transfusion history病程(月)18.27.116.26.8Course of illness(month)治疗前血清ALT水平86.378.883.868.3Sera ALT elevationbefore treatment临床类型(慢性肝炎)Clinical type (CH)轻型19(54.3%)6(60.0%)Mild type中型16(45.7%)4(40.0%)Moderate type 表3HCV基因型与干扰素应答Tab.3HCV genotype and interferon responseHCV基

14、因型HCV genotype病例数No. of patients对干扰素应答Interferon response无应答No-response有应答Response复发Relapse持续应答Sustained response组3522(62.9%)13(37.1%)7(20.0%)6(17.1%)Group 组102(20.0%)8(80.0%)2(20.0%)6(60.0%)Group 3讨论HCV基因分型与命名尚未统一，目前国内常用Okamoto命名系统分为型，根据此4型中亲缘关系的远近，型和型可归入第组，型和型归入第组。本文所用HCCV5NC区Hae 酶切分型法是基于型、型无该酶切位点

15、，而型、型存在此位点，因而可将HCV 型、型与型、型分开，亦即可将HCV 组和组分开。我们用此技术对山西地区94例CHC分型，结果显示：组感染占大多数(85.1%)，组感染和/组混合感染分别占12.8%和2.1%。鉴于文献报道我国HCV 型感染甚少5，6。故研究结果表明山西省HCV感染以HCV 组中的型感染为主，此可供丙型肝炎的防治工作参考。HCV基因型是影响干扰素疗效的主要因素之一，大多数认为HCV 型感染对干扰素的治疗反应性比HCV 型感染差1，7，8，可能与其伴随血清HCV RNA滴度较高有关3。本文观察二组病例在临床背景相似的情况下，HCV 组感染患者对重组干扰素-1b的应答率和持续应

16、答皆明显高于组感染者，提示HCV 组对干扰素治疗的反应性较组敏感。HCV基因型的测定有助于预示干扰素疗效。若干报道HCV基因型与疾病严重程度、病变进展和转归有关13。本文结果显示组、组基因在各型HCV中分布无明显差异，唯11例肝硬化患者皆属组感染。不同HCV基因型是否存在毒力、致病性差异，是否有预后重要性，尚需扩大病例数，积累更多肝组织病检资料，并通过长期随访研究方能定论。此外，研究未发现HCV基因型与年龄、性别和传播途径有相关性。本课题由山西省教委资助作者单位：030001太原山西医科大学第一医院(赵和平郭慧安张玲荣王勤英)；太原市商业职工医院(程宝珠)；铁十二局医院(张天生)1997年11

17、月4日收稿12月30日修回参考文献1Dusheiko G, Schmilovitz-Weiss H, Brown D, et al. Hepatitis C virus genotypes: on investigation of type-specific differences in geographic origin and disease. Hepatology, 1994, 19: 13-18.2Mahancy K, Tedeschi V, Maertens G, et al. Genotypic analysis of hepatitis C virus in Americian

18、patients. Hepatology, 1994, 20: 1405-1411.3Kobayashi M, Tanaka E, Sodeyama T, et al. The natural course of chronic hepatitis C. A comparison between patients with genotypes 1 and 2 hepatitis C viruses. Hepatology, 1996, 23: 695-699.4杜绍财，陶其敏，孙炎等. 双PCR检测丙型肝炎病毒RNA. 北京医科大学学报，1991，23：429-431.5黄祖瑚，周东辉，查文章，等. 有偿供血员、丙型肝炎及原发性肝癌患者HCV基因分型. 中华传染病杂志，1995，13：89-91.6杨东亮，郝连杰. 我国丙型肝炎病毒基因变异及分型研究现状. 中华传染病杂志，1996，14：41-44.7Kanai K, Kako M