阴虚证动物模型的造模方法与思路评述

1、2009年1月第33卷第1期摘要查阅近20年来关于阴虚证动物模型建立方法的文献,根据其在造模时的指导思想和具体方法,将其归纳为中医和西医理论指导两大类;从中医阴虚的病因、病机和证候特点出发,对建立这些模型的思路和具体方法进行了分析和比较。关键词阴虚证;动物模型;方法与思路;评价中图分类号R2-03文献标识码A文章编号1007-659X (200901-0015-04从1957年重庆医学院以甲状腺干粉喂饲家兔造成甲状腺功能亢进的中医阴虚证动物模型至今已经51年了。其间,经过无数学者们的努力,中医阴虚证的动物模型已经从无到有,从单纯模仿(西医发展到能根据中医理论,采取综合方法进行造模,取得了很大的

2、成绩。但是,其与后来的阳虚动物模型比较,不论是造模方法、模型成功标志、模型稳定性、常规检测指标等,还是相关报道的质量和数量都明显滞后。为此,笔者在查阅近20年来有关阴虚证造模方法文献的基础上,从中医阴虚的病因、病机和证候特点出发,对其进行归类、分析和比较,并对其造模思路和具体方法进行评述,以期为建立更加科学、更加符合中医阴虚证特点的动物模型提供参考。1资料来源文献来源:清华CNKI 与维普期刊数据库;年限:19912007年;方法:手动检索。阴虚动物模型方法与研究共73篇文献,其中造模方法研究18篇,运用模型进行治疗研究47篇,综述6篇。中医造模有21篇,采用8种造模方法。西医造模有52篇,采

3、用3种造模方法。2结果2.1中医理论指导下的造模方法2.1.1温燥性中药造模主要运用温燥性中药如附子、干姜、肉桂等。在73篇文章中,有6篇运用该法造模。如杨翠平1将制附子、干姜、肉桂按111制成100%和50%两种水煎液,连续给小鼠灌服30d 。所制成的模型表现为体质量增长率、胸腺指数、脾脏指数均降低;体温略高;血浆cAM P (环磷酸腺苷浓度升高,cGM P (环磷酸鸟苷下降,cAM P/cGM P 比值升高;血浆中SOD (超氧化物歧化酶活性、肝匀浆中GSH-PX (谷胱甘肽氧化酶活性降低,肝匀浆中M DA (丙二醛含量升高。该造模方法根据中医阴阳水火属性迥异的特点,以辛温燥烈之阳药长期(

4、30d 服用,最终因“火灼津液,营阴暗耗”、“阳盛则阴病”而造成阴虚模型。此造模方法病理机制单纯,模型“内热”与“内燥”征象显著,体温升高却并不明显,比较符合阴虚证的临床特点,有研究使用价值。但该方法难于界定到底是“实热”,还是“阴虚”模型;在停服阳药之后,阴虚证是否会自行消除交待不详;其对模型动物的血液运行影响轻微,并未出现“迫血妄行”之征(血流变学指标与空白组之间无统计学意义;且上述实验室指标也在阳虚模型见到。2.1.2利水伤阴造模主要用禁水、禁食、利尿脱水等方法。在73篇文章中,有6篇运用该法造模。如王秋2在实验家兔禁水、禁食18h 后,由其耳缘静脉两次(间隔1h按2.5ml/kg 剂量

5、注射入速尿;并在末次速尿注入1h 后,以0.5g/kg 剂量同法注入大肠杆菌。所制成的模型表现为烦躁、呼吸急促、大便干燥、耳郭发红发热、舌红少津、体温升高等。“水火者,阴阳之征兆也”。阴的属性通水,阴是体内体液的总称。体液的绝对不足,失去滋养与补充(血液功能是中医阴虚证的重要机制和临床症状产生的主要原因。该造模方法既减少水分摄入,又增加水分排出,使实验动物的体液绝对不足。其造模方法符合中医理论,所致实验动物的临床症状与阴虚证的表现十分相似。但此种模型不太稳定,一旦纠正其脱水状态(饮水或输液之后,其症状多顷刻间消失,这与临床“阴虚难复”不符。阴虚证动物模型的造模方法与思路评述姜丽芳,贺伟平,李少

6、华(成都中医药大学针灸推拿学院,四川成都610007指导廖品东收稿日期2008-06-16作者简介姜丽芳(1980-,女,河北承德人,硕士研究生,主要从事小儿推拿证治规律的研究。第33卷第1期山东中医药大学学报Vol.33,No.12009年1月JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCMJan.2009152009年1月山东中医药大学学报第33卷第1期2.1.3形劳伤阴造模主要用过度疲劳造模,在73篇文章中,有4篇运用该法造模。如江泳涛等3采用雄性SD大鼠,体质量180220g,游泳6周,每周5d,日1次,日游泳时间由10min逐日增加至第5周末120min。水

7、深60cm,水温30±2。所制成的模型表现为体质量下降,肛温增高,体形瘦小,皮毛干枯无光泽,惊恐不安,血清SOD下降,认为其模型为“阴虚内热证”。该造模方法的根据是素问·举痛论“劳则气耗”。但短暂的剧烈运动可导致一时性的气耗,而长期过度的劳作造成的则是真阴受损、精绝。此实验是采用渐进式增加运动强度,与中医所指的过劳全然不同;而且气属阳,主温煦,气不足失于温煦,也会引起阳虚的症状。2.1.4情志失调造模主要应用情志刺激进行造模,在73篇文章中,有2篇运用该法造模。如樊蔚虹等4-5采用雄性SD大鼠,体质量200240g,从实验第1天起将大鼠双后肢束缚,成对倒吊于笼内或立式固定于

8、网笼底盖上,以引起明显激怒,表现为粗叫、撕咬,首次激怒20min,以后每隔1d,增加10min。造模时间为20d。所制成的模型表现为体质量下降,体形瘦小,皮毛干枯无光泽,肛温增高,惊恐兴奋,cAM P和血清SOD 下降,血浆皮质酮、血清M DA、海马氨基酸兴奋性/抑制性增高,认为其模型为“肝肾阴虚证”。该造模方法的根据是素问·阴阳应象大论“暴怒伤阴”。认为“伤阴”即伤肝之阴血,“肝肾精血同源”,久则必伤肾阴,而致肝肾阴虚。激怒法造模接近于临床实际,符合中医七情致病特点,且避免了给药造成的急性损伤和中毒,并认为长期激怒法应是肝肾阴虚证实验研究的首选造模方法。但多数学者认为,激怒法造模属

9、肝郁型。激怒法引起的是肝郁型还是肝肾阴虚型尚有争议。从中医的角度来讲引起肝肾阴虚的原因较多,如水不涵木、大病后期及素体阴虚等,所以不能说此法是肝肾阴虚证实验研究的首选造模方法。2.1.5气候造模主要应用气候对人体影响进行造模,在73篇文章中,有1篇用该法造模。如凌昌全等6采用将大鼠置于人工气候室内(干球40和湿球32进行热应激3h处理,所制成的模型表现为呼吸急促,呈昏睡状态,四肢伸展,耳、爪、尾等暴露部位潮红,大量流涎,肛温上升,认为其模型为“热损伤阴虚证”。天人相应,机体阴阳随气候的变化而变化。在高温环境下,腠理疏松,气门打开,津液外泄,会使机体大汗淋漓。因阳加于阴为之汗,汗出过多必伤心阳,

10、阴阳两伤,阴不敛阳,虚阳外越,也会出现该模型的症状。此法造模也存在阴虚与阳虚界定问题。2.1.6复合造模主要运用多原因引起伤津耗液造模,在73篇文章中,有1篇用该法造模。如易杰7采用雌/雄SD大鼠,体质量180220g,给番泻叶致泻,加以游泳,造模1月。模型表现为体质量下降,易激惹、咬斗,肛温升高,粪便干燥,背毛枯槁无光泽,进食量不均,饮水量多,认为其模型为“脾阴虚证”。两种或两种以上方法联合造模,此法充分利用中医的致病因素,但此法造模方法复杂,会导致大鼠多脏腑功能失调,会影响临床药物应用研究结果。给大鼠番泻叶致泻后,大鼠状态没有描述,如泄泻太过会伤及大鼠脾胃,可见倦怠症状,如再放置水中,可能

11、大鼠无力游泳,死亡率增高,增加研究费用。如泄泻不及,实验无意义,所以此法造模复杂,直接影响实验结果。2.1.7五味偏嗜造模主要运用饮食偏嗜造模。在73篇文章中,有1篇用该法造模。如宋建平等8采用雌/雄Wistar大鼠各半,体质量150200g,饲以高盐饲(含食盐9%,饮用水初为自来水,30d后改为0.19%盐水,共喂养150d。所制成的模型表现为血压升高、尿液中VM A(3-甲基-4-羟杏仁酸及17-OH(17-羟皮质类固醇含量增加。认为其模型为“高血压阴虚阳亢证”。该造模方法的根据是内经“夫盐之味咸,其气令器津泄”,“咸走血,血病无多食咸”。近代研究也认为高血压与高盐饮食有关。咸者,肾之味。

12、长期过食盐,必伤肾之气血阴阳,肾阴阳为一身阴阳之根本,元阴元阳失调,引起一身阴阳失调。所以此模型是阴虚还是阳虚难以界定。2.2西医理论指导下的造模方法2.2.1甲状腺激素类造阴虚模型主要用甲状腺素、甲状腺素联合利血平、甲状腺素联合其他方法造模,在73篇文章中,有11篇用甲状腺素造模,如程彬彬9用健康雌性昆明种SD小鼠40只,体质量1822g,每只小鼠每天按320mg/kg体质量灌胃甲状腺素混悬液,均连续7d,造成小鼠阴虚模型。有9篇用甲状腺素联合利血平造模,如刘咏梅10采用昆明种小鼠,雄性, 68周龄,体质量20±2g,予甲状腺片150mg/kg和利血平1mg/kg灌胃,连续6d。有

13、8篇用甲状腺素联合其他方法进行造模,如宋欣伟等11采用Wistar大鼠雄性108只,SPF级,体质量200±20g,大鼠0.85mg/kg·d-1剂量连续皮下注射甲状腺素30d,然后将剂量增加1.7mg/kg·d-1继续皮下注射30d,同时加用地塞米松320mg/kg灌胃,隔天1次共15次。所制成的模型多表现为体质量下降,肛温升高,烦躁不安,心率加快,血162009年1月第33卷第1期姜丽芳等:阴虚证动物模型的造模方法与思路评述清T 3(三碘甲状腺原氨酸、T 4(四碘甲状腺原氨酸值升高,血浆cAM P 升高,cGM P 下降,cAM P/cGM P 比值升高,Na

14、 +-2K +-3ATP (钠-钾-三磷酸腺苷酶活性增强。该实验思路是模拟甲状腺功能亢进时的怕热、多汗、神经过敏、急躁、震颤、心率加快、心输出量增加等类似于阴虚的现象。甲状腺素类造模的优点是实施方便,可以模拟临床常见疾病甲状腺功能亢进,此病多会出现阴虚火旺证,而且中医药治疗有一定的优势。但是我们在文献检索中发现此造模方法尚存在一定问题。造模时间的差异性:甲状腺素造阴虚模型多则28d ,少则5d ;甲状腺素联合利血平造阴虚模型多则12d ,少则7d ;甲状腺素联合其他方法造不同脏腑阴虚模型多则60d ,少则12d ,造模时间的控制是十分重要的,尚需进一步研究;造模结果的差异性:用同样的造模方法,

15、可造模的结果却不同,认为是肾阴虚、心阴虚、肝肾阴虚、脾阴虚。2.2.2肾上腺皮质激素类造阴虚模型该造模多运用糖皮质激素类的氢化可的松进行造模,在73篇文章中,有12篇运用该法造模。如刘旭光12采用SD 大鼠,雄性,体质量180220g ,于每日1700按5mg/100g 体质量剂量灌胃给予氢化可的松,连续4d 。也有用其他肾上腺皮质激素类进行造模,在71篇文章中,有3篇运用该法造模。如杨敬宁13采用雄性wistar 大鼠,体质量180±10g ,1.25mg/d ,肌注皮质酮,连续6d 。所制成的模型多表现为好动易怒,被毛凌乱、光泽差,尾色潮红,活动次数、饮水量增加,血浆ACTH(促

16、肾上腺皮质激素、CORT (血清皮质醇含量增高,胸腺指数下降,IL -2(白细胞介素-2下降,IL -6(白细胞介素-6升高。该实验思路是模拟临床上应用该激素所产生的不良反应,肾上腺皮质激素类是最常用的造模方法。其中有几点值得注意:刘旭光等14在造模时考虑到啮齿类动物生物特征,在每日1700用药,这样的考虑是十分可取的;刘蓬等15观察到,采用强的松龙臀部肌注,早期类似“肾阴虚”,晚期则类似“肾阳虚”,由此看来采用肾上腺皮质激素类造阴虚模型,选择适当的动物、严格控制剂量,以及造模时间十分重要,而且应该及时监测。这也反映了该模型的固有的缺点。但近来孙燕等16-17研究激素在阴虚证的发生发展过程中常

17、有一定的变化,研究表明激素不大可能是阴虚证本质:激素不符合阴虚证本质的标准,激素的作用不能很好地解释阴虚的全部证候和实验室指标变化;激素的作用方式和作用特点与阴虚证的发生规律相冲突;阴虚证时激素的改变大多是属于继发性改变;激素对于证候的调节和影响是间接的作用方式,从阴虚证日节律特征产生的分子机制可以看出这一点。可见虽然激素造模实验中用的较多,但也不是理想的造模方法。2.2.3手术造模主要是人为干预体内激素分泌情况。在73篇文章中,有5篇运用该法造模,如廖圣宝等18-21采用雌/雄Wistar 大鼠,体质量150200g ,戊巴比妥钠(40mg/kg 腹腔注射麻醉,手术分离左肾动脉,用0.2mm

18、 银夹狭窄左肾动脉,不触及右背,术后缝合腹腔并注射青霉素10万单位/只,常规饲养。造模1周,认为其模型为“阴虚证”。所制模型表现为尾动脉收缩压较术前升高3kPa(22.6mmHg 以上,并超18kPa (135mmHg 者为模型复制成功(二肾一夹高血压。张丽萍等22-23用去卵巢拟阴虚内热证。方法是用3%水合氯醛ip (腹腔注射麻醉大鼠,腹位固定,于最末肋骨下腋中线上距脊柱约2cm 处剪毛,切开皮肤和背肌,夹出一侧卵巢,分离脂肪,结扎卵巢下输卵管后切除一侧卵巢,术后第5,6,7,8天逐只进行阴道涂片检查,以确定一侧卵巢摘除。术后第8天选取无动情期变化大鼠灌服热性中药20ml/kg ,连续14d

19、 。所制成的模型表现为阴道上皮角化细胞减少,未角化细胞增多,肛温增高,血清中E 2(雌二醇水平明显降低,LH (黄体生成素、FSH (促卵泡激素、PRL (催乳素水平增高,子宫质量减轻。评价:手术造模代表研究技术的进步,但是我们的研究最终是为了临床服务,从经济角度考虑手术造模也不会普遍推广。3讨论中医证候模型是中医药研究发展的重要手段。在我国对阴虚造模进行了60多年的研究,学者们从不同角度去实验,最终目的就是探索出规范化的阴虚模型,为临床研究提供更充分理论依据。但由于阴虚证的病理具有不典型性,突出表现在阴虚证(虚热证的病理不能明显游离于阳虚证-正常生理-实热证这一病理轴之外,阴虚证病理的不典型

20、性与理论上阴虚证的观念不符合,从而影响了对阴虚证病理的确认,进而影响了阴虚造模的成熟化。阴虚是指体内津液精血等阴液亏少而无以制阳,滋润、濡养等作用减退所表现的虚热证候。临床表现:形体消瘦,口燥咽干,潮热颧红,五心烦热,盗汗,小便短黄,大便干结,舌红少津少苔,脉细数。常见心阴虚、肝阴虚、肺阴虚、肾阴虚、胃阴虚。在阴虚证的基础上,心阴虚伴有悸烦不宁、失眠多梦的表现,肝阴虚伴有头目、筋脉、肝络失于滋养的表现,肺阴虚伴有干咳或痰少而黏的表现,肾阴虚伴有腰膝酸软、眩晕耳鸣、男子遗精、女子月经不调的表现。综合阴虚证的临床表172009年1月山东中医药大学学报第33卷第1期 图1阴火产生的病因病机(上接第1

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22、步去探索。参考文献1杨翠平.温热药造小鼠阴虚模型的建立及其对小鼠抗氧化作用的影响J .四川中医,2004,10(11:15.2王秋.家兔温病阴虚热盛证动物模型J .辽宁中医杂志,1995,22(9:427-429.3汪泳涛,张伟荣,宋红普,等.长期超负荷游泳运动建立阴虚内热证动物模型的研究J .中医药学刊,2003,21(7:1115-1142.4樊蔚虹.长期激怒法造模J .中国中医基础医学杂志,2001,7(9:68-69.5任小巧,卢跃卿,邓伟,等.加味一贯煎对实验性肝肾阴虚证大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响J .中国中药志,2000,25(3:172-174.6凌昌全,李敏,朱德增,等.

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