教学研究钙磷镁和微量元素检验

1、第十二章钙、磷、镁和微量元素检验第一节概述一、钙、磷代谢及调节（一）含量与分布钙是体内含量最多的无机盐，占体重的1.5%2%,总量约7001400g,其次是磷，占体重0.8%1.2%,总量约400800g。99%以上的钙和86%以上的磷是以羟磷灰石形式沉积于骨、牙。（二）吸收与排泄吸收：在pH较低的小肠上段，钙的吸收率随年龄的增长而降低，每增加10岁减少5%10%,婴儿吸收率可达50%以上，儿童40%,成人20%左右，故老人易发生骨质疏松症。磷的吸收率约70%,低磷时可达90%020%肾脏70%肾脏正常血清钙2.252.75mmol/L (911mg/dl)排泄：主要通过肠道和肾脏。钙：80%

2、肠道磷：30%肠道（二、血钙与血磷血液中钙几乎全部存在于血浆,离子钙50%|卜可扩散钙JH+HCO3血钙存在形式柠檬酸钙.碳酸氢钙结合钙50%蛋白结合钙非扩散钙发挥生理作用的是离子钙，但临床实验室测定的大多数是总钙。血磷是指血液中的无机磷酸盐（HPO42_、H2PO4J正常人血清无机磷0.971.61mmol/L（35mg/dl），儿童稍高。CaxP=3540大于40骨盐沉积，有利于骨钙化。小于35骨盐溶解。（四）钙、磷生理功能钙：1参与血液凝固。2参与肌肉收缩。3.维持神经肌肉应激性。4作为第二信使。磷：1.作为核酸、磷脂、磷蛋白合成的原料。2参与高能磷酸化合物的合成。3 .构成核甘酸辅酶。

3、4 .构成磷酸盐缓冲对。（五）钙、磷代谢调节1.维生素Da(VitDa)月干肾D3肝25OHD3肾1,25(OH)2D3促进肠道对钙、磷的吸收；促进肾小管对钙、磷的重吸收；协同PTH促进骨重建。2.甲状旁腺素（PTH）甲状旁腺主细胞分泌的84肽。促进溶骨作用，促进间充质细胞转化成破骨细胞，抑制破骨细胞转化为成骨细胞；促进肾小管对钙的重吸收，抑制磷的重吸收。3.降钙素（CT）甲状腺滤泡旁细胞分泌的32肽，与PTH拮抗。促进成骨作用，抑制间充质细胞转化为破骨细胞，促进破骨细胞转化为成骨细胞；抑制肾小管对钙、磷的重吸收。间充质细胞y破骨细胞一丁X/+CT*成骨细胞二、镁代谢和生理功能（一）镁代谢1

4、.镁的含量与分布占体重的0.03%,正常成人镁的总量2028g,其中60%存在于骨骼，20%30%存在于骨骼肌，其余10%存在于其它组织中。体液中细胞内液镁的含量占总量的39%,而细胞外液仅占1%。2 .血镁血浆镁的浓度约0.671.23mmol/L,存在形式主要有三种：离子镁55%血镁-碳酸氢镁、柠檬酸镁、磷酸镁等15%蛋白结合镁30%发挥生理作用的是离子镁3吸收与排泄食物镁含量丰富，人体每天需要量300350mg,镁的吸收主要在小肠，吸收率只有30%40%,吸收率与肠腔中镁的含量成反比。体内镁的排泄主要通过肾脏。（二）镁的生理功能1 作为酶的辅助因子体内约300种酶的辅助因子是Mg2+o2

5、 .维持神经肌肉的应激性Mg2+能降低神经肌肉的应激性。三、微量元素与疾病（-）体内化学元素组成和分类人体约含有50多种元素人体元素主要元素含量OJg/kg体重C、H、0、N、S、P、Ca、K、Na、Cl、r必需的Fe>Cu、Zn>Mn、Co、Ni、Sei、F等14种微量兀素含量v0.1g/kg体重非必需的Si、As、Rb、B、Al有害的Bi、Hg、Pb、Be等（二）必需微量元素对人体各种生命活动的影响1 .促进机体的生长发育铁、铜、锌、镒、钻、碘等，作为酶和激素的重要组成成分。2 .对神经系统结构和功能的影响铁、铜、锌、钵、钻、碘等缺乏时可导致神经系统结构和功能的异常，智力低下。

6、3 .对内分泌系统的影响铜、铁、锌、锦、铭等元素的缺乏或过量可引起内分泌功能失4 .对免疫系统的影响铁、铜、锌等缺乏时可降低机体的免疫力。5 .对心血管疾病及创伤的影响适量的锌、镒、格、硒等元素有利于心血管的结构和功能。如食物中的锌/镉比与高血压的发生和预后密切相关。多种微量元素还能影响核酸和蛋白质的生物合成，故有利于创伤的愈合和疾病的恢复。第二节钙、磷、镁和微量元素测定一、钙的测定血钙测定方法很多。厂化学法滴定法（氧化还原滴定，络合滴定）；J比色法（邻甲酚猷络合法，甲基麝香草酚蓝法）血钙测定.物理法火焰光度法；ISE法；原子吸收分光光度法；同位素稀释质谱法。1.EDTA-Na2络合滴定法在碱

7、性溶液中，血清钙与钙红指示剂结合成可溶性的复合物，使溶液呈淡红色，EDTA-Na2对钙有很大的亲和力，能与复合物中的钙络合，使钙红指示剂重新游离，溶液变蓝色，根据EDTA-Na2滴定用量可计算出血清钙含量。钙+钙红钙-钙红复合物淡红色钙-钙红复合物+EDTA-Na2>EDTACa+钙红蓝色钙指示剂除钙红外，还有依地格黑T（红f蓝），钙黄绿素（黄f绿），紫红酸镂（红f紫）。钙红指示剂终点明显，不受血清镁干扰，血清镁在强碱性条件下生成Mg（OH）2J,指示剂在强碱性条件下不稳定，加指示剂后应立即滴定。操作简便，无需特殊仪器设备，适合于基层医院，但终点判断人为误差较大，溶血、黄疸影响终点判断。

8、2邻甲酚酬络合酮法（O-CPC）邻甲酚献络合酮是一种金属络合染料，也是一种酸碱指示剂，在碱性溶液中能与钙和镁螯合，生成紫红色螯合物（吸收峰575nm），作钙测定时，加入8-羟基喳咻消除镁的干扰。Mg2+8-羟基喳咻可溶性络合物Ca2+邻甲酚猷络合酮紫红色螯合物灵敏度很高，试管、器皿如有微量的钙污染亦会引起误差，最好使用一次性试管，所有试3.甲基麝香草酚蓝法（MTB）血清钙在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝（MTB）结合，生成一种蓝色络合物，加入8-羟基喳咻消除镁干扰。显色稳定，线性范围大，溶血、黄疸无干扰。4离子选择电极法（ISE）此法迅速、简便、灵敏度高、重复性好，并可同时测定总钙和离子钙，离子钙

9、测定最好用血清，不用抗凝剂，在急需检测结果时可用肝素抗凝。【正常参考值】成人总钙2.252.75mmol/L离子钙1.151.42mmol/L二、无机磷测定目前还不能直接测定人体内的磷元素，各种方法都是直接地分析两种磷酸盐阴离子（HPCU2八H2P。4-），常用的方法有磷铝酸法，染料法，酶法。1 .磷铝酸法以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入铝酸镂试剂，与无机磷结合成磷铝酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成铝蓝。（NH4）6MO7O24+3H2SO4+4H2。>7H2Moe）4+3（NFk）2SO412H2MoO4+H3PO4>12Moe>3H3Po4+12H2O12MoO3-

10、H3P04+还原剂>铝蓝还原剂有很多种，1-氨基-2蔡酚4磺酸，应用历史较久，试剂不太稳定，显色时间长，灵敏度不高。氯化亚锡，灵敏度较高，颜色强度随显色时间时间而改变，偏离Beer定律。硫酸亚铁，显色较稳定。2 .孔雀绿直接显色法血清经浓尿素溶液稀释后，用孔雀绿铝酸试剂显色，加入吐温20使标准液与血清标本显色反应速度接近。灵敏度较高，但影响因素多，重复性差，显色不稳定。糖原磷酸化的葡萄糖磷酸变位酶GmG 1 P3 .酶法GnH3P。4PG6PNADPG6PD6磷酸葡萄糖酸次黄首H3PO4次黄喋吟H20 O2H2O2 N乙基嗦吟核昔磷酸化酷黄噱吟氧化酶次黄喋吟R 1 P尿酸H2O2N （3

11、甲基苯基） N乙酰乙胺P°D紫红色复合物555nm发色底物三、镁的测定r化学法钙镁试剂比色法，达旦黄比色法，甲基麝香草酚蓝比色法。传统方法测定方法Y物理法原子吸收分光光度法，（参考方法）同位素稀释中子活化法（决定性方法）酶法新进展，将成为新的自动方法。1钙镁试剂（Calmagite）比色法血清镁在碱性条件下与钙镁试剂生成紫红色络合物，颜色深浅与镁浓度成正比。加入EGTA乙二醇双（B-氨基乙醛）N,N,Ns,N/一四乙酸，可消除钙的干扰。吸收峰520nm。显色稳定，操作简便，快速，可手工操作，也可用于自动化分析。2原子吸收分光光度法血清经酸性氯化锢溶液作50倍稀释，直接用原子吸收分光光度计检测285.2nm的吸光度。操作简便，准确，精密度好，可同时进行钙的测定422.7nmo3酶法右旋葡萄糖MgATP"右旋葡萄糖6磷酸MgADP右旋葡萄糖6磷酸NADPG6PD右旋葡萄糖6磷酸NADPH【正常参考值】0.671.23mmol/L四、铁的测定血清铁测定血清铁测定虫I血清总铁结合力（BC）测定TIBC是指可与血清运铁蛋白结合的铁的最大量。血清铁总铁结合力1°°%血清铁和总铁结合力的百分比称为铁饱和度。铁饱和度测定方法，亚铁嗪比色法。运铁