磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯

1、实验四实验四 磷酸甘油氧化酶法测定血清磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯甘油三酯临床生物化学实验室临床生物化学实验室一、实验目的一、实验目的l 掌握：掌握：磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯的基本原理。l 熟悉：熟悉：磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯的基本操作。l 了解：了解：血清甘油三酯测定对于家族性脂类代谢紊乱等疾病诊断的临床意义。二、实验原理二、实验原理 血清中甘油三酯血清中甘油三酯(TG)(TG)经经脂蛋白酶脂蛋白酶(LPL)(LPL)作用，作用，可水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在可水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在ATPATP和和甘油激甘油激酶酶的作用下生成的作用下生成3-3-磷酸甘油，再经磷

2、酸甘油氧化磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和酶作用生成磷酸二羟丙酮和H H2 2O O2 2，H H2 2O O2 2与与4-APP4-APP和和 ESPAS 在在过氧化物酶过氧化物酶作用下，生成作用下，生成红色醌类化合红色醌类化合物物，其显色程度与，其显色程度与TGTG的浓度成正比。的浓度成正比。甘油三酯甘油三酯过氧化物酶过氧化物酶PODATPADP甘油激酶甘油激酶GKLPL甘油甘油+酯肪酸酯肪酸3-磷酸甘油磷酸甘油磷酸甘油氧化酶磷酸甘油氧化酶GPO磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮+H2O24-氨基安替比林（氨基安替比林（4-AAP）对氯酚对氯酚/ESPAS醌亚胺染料醌亚胺染料三、试

3、剂三、试剂l 1. 酶试剂：酶试剂：GOODs缓冲液（缓冲液（pH7.2） 30mmol/L甘油激酶甘油激酶 1KU/L脂蛋白酯酶脂蛋白酯酶 3KU/L甘油磷酸氧化酶甘油磷酸氧化酶 2KU/L过氧化物酶过氧化物酶 2KU/LATP 0.5mmol/L4-AAP 0.3mmol/LESPAS 0.2mmol/L稳定剂稳定剂 适量适量l 2. 标准液：标准液：甘油三酯甘油三酯 2.26 mmol/L混匀，混匀， 37 37水浴水浴5min5min后，在波长后，在波长546546nmnm处用处用BB管调零，测定各管吸光度值。管调零，测定各管吸光度值。加入物加入物（L）空白管空白管（B）标准管标准管测

4、定管测定管SU1U2血清血清1515DDW15标准液标准液 15工作液工作液 1500150015001500四、实验操作四、实验操作五、结果计算五、结果计算 TG TG(mmol/L)(mmol/L)U U/ /S SCsCs（2.26 mmol/L） l 参考范围：血清参考范围：血清TG:0.565TG:0.5651.695 1.695 mmolmmol/L六、注意事项l 1. 本法本法使用的酶试剂在使用的酶试剂在4避光保存，至少可稳定避光保存，至少可稳定3-7天，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度天，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度应应0.05。l 2. 血清要及时测定，血清要及时

5、测定， 4存放不超过存放不超过3天，避免天，避免TG水解释放出甘油。水解释放出甘油。l 3. 本法线性上限为本法线性上限为11.3mmol/L，若所测，若所测TG超过了超过了11.0mmol/L, 则可用生理盐水稀释后再测。则可用生理盐水稀释后再测。七、方法学评价1. 本法本法是一步终止法，简便、快速、微量且试剂较是一步终止法，简便、快速、微量且试剂较稳定等优点，适用于手工和自动化测定。稳定等优点，适用于手工和自动化测定。2.不足：所测不足：所测TG值包括了血清中游离的甘油。于值包括了血清中游离的甘油。于4h内立即检测，若放置过久会使结果偏高。内立即检测，若放置过久会使结果偏高。3.为了为了除

6、去游离甘油的干扰，常用下面两种方法：除去游离甘油的干扰，常用下面两种方法：1）外空白法）外空白法:使用不含LPL的酶试剂测定FG作空白值，但此法需要双份测定，成本加倍。2）内空白法：）内空白法：将酶试剂分成2部分：LPL和4-AAP组成试剂II，其余试剂为试剂I。血清先加试剂I，37温育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰；再加试剂II，即可测出TG水解生成的甘油。该法增加了操作步骤，但不增加成本。八、临床意义l TG 增高增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症 ( 如家如家族性高胆固醇血症、家族性族性高胆固醇血症、家族性 ApoB 缺陷症、多源缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等 ) 、糖、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 l TG 降低降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏