细胞培养的注意事项

1、相关疾病：每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真就是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，瞧在眼里怕丢 了 ，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢？小早疋早脱身，从此专注黑生物12。严 格无菌操作，多喷喷洒精，要就是对火菌得东西不放心，自己包自己送自己烘干、小 2.不要 与别人共用试剂耗材，自己准备一套。a 3.有可能得话在拿到新细胞得时候做好支原体衣原体检测。4 2.水浴锅很脏,生化培 养箱要就是得手动加湿得话盘里得水也会很脏，勤换（火菌水加进去）、小 5 晚上离开 得时候最好给细胞房照紫外，超净台就是用完就开。皿 6、 最好得就是同一时间就您一 个人在用细胞房在养细胞。a非科班出身经验分享a 1。

2、别怕浪费。枪头什么得只要有可能污染就换，如果用洒精灯就什么都稍微烤一下，别 直接放到火上，离一段距离。2。动作要既轻柔又有力、动作太重会有一堆一堆得气泡,动作太轻就吹不下来、刚 开始得时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就就是吹得时候枪里得培养基不要一次 全都压出来，留一点,枪得最头部尽量深得在液而以下。M 3、离开过操作台得东西再进操 作台之前一泄要用洒精喷一颯,包括一切实验耗材、仪器、以及您带着手套得手、4、实验结束后对实验台得消毒。紫外什么得，用前用后都照个3 0分钟。a 5.身体得各个部分尽量得少接触不需要接触得地方得地方。比如实验台，又比如培养箱 内部。6小、细胞得密度根据细胞得

3、性质、传代得时间以及自己得心情来左。培养基得话 最多最多不要超过2天就要换一次。细胞可以不传代，但就是培养基就是一泄要换得。皿 大概就就是，不该碰得地方不碰，有影响得地方少碰；该使劲得时候绝对不含糊,不该使劲得地 方一泄忍住、如果就是比较简陥得操作台就一定要摆个洒精灯,所有操作紧密国绕在酒精灯 周用进行。如果就是髙级台子就多用酒精喷喷、感觉生物得实验,心疼钱就还就是不要做了、 丄最后一点点绝对非科班得经验、癌细胞真就是坚挺。有一次实在就是不想传了，放了 5 天吧,感觉都长了几层出来，培养基都黄了。抱着试一试得心情传了一次，又坚强得活过来了。 当然，状态肯定也差得很了。换种心情，好好生活！养了三

4、年细胞，各种肿瘤细胞，说一点自己得瞧法a 1。培养细胞前,可以瞧II细胞特点 说明书，包括细胞正常生长得状态图、传代、培养基得类型等。2。不同细胞生长周期不同，有得生长很快,比如说MDAM B -2 3 1,传代得时候取离 心悬液得十分之一就己经足够了，有得又就是特别慢，等得人心焦,BT474就就是，传代就是 一分二，复苏起始得时候两周多才能长满，所以就要在培养细胞得过程中多多摸索了、介3、对于娇弱得细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔,离心时候也要 注意转速与时间，每天都要去瞧一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。 小 4、 冻存细胞复苏后第二天最好更换一

5、次培养基、金5。培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。a 6。养细胞最大得教训:不能偷懒!小细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。小 1、不 管买得细胞、惠赠得细胞，刚拿到手赶紧做两件事:检测就是否有支原体污染；迅速扩增冻 存、山2 o 发现有污染迅速处理掉.特別就是当您养了很多种细胞时；细菌污染，真菌污染很 容易发现，支原体污染得话,细胞会长得慢，买个支原体检测得kit泄期检测一下、上 3、细胞房日常得值日淸洁就是必须得，此外还要左期熏蒸。a 4、 细胞得传代一泄要规律，保持相同得confluen cy与传代时间间隔，不要随心 所欲或者拖延、5。注意个人卫生、靠内心感动细胞1. 自己得细胞自己养，

6、血得教训。a2。在生物安全柜（或者超净台）,枪头IL淸管IL清，培养基，瓶子都足够好,并且细胞房有 良好得卫生措施（比如隔离服，手套，口罩，淸洁.HEPA等等）且不违法操作原则得情况下, 您其实很难污染。3。上述条件不完备得情况下，就要多注意无菌操作了:比如要用得东西提前拿到台子里照 啊（不过这个其实也不大好，因为会挡住紫外线）,使用前SDS+酒精擦台子，进岀超净台一立 要洒精擦手、上4。 少对细胞说话，多靠内心来感动它们（就是得！心不诚就是不可以得!）至少1天 瞧1次。小养细胞很容易小养细胞真得不难，最关键几点:小 1。所有得东西使用 最好得，如果您用得血淸、培养皿、培养基、胰酶什么得都就是

7、进口得，頁得很难相信您会把 细胞养坏。a2. 动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞眾露在空气中得时间越少越好。期外,要掌握好胰酶 消化时间，所谓得细胞状态差，很多时候就是传代得原因。3、有时间得话,需要细胞汁数，传相应数目得细胞到培养皿中，可以大致淸楚细胞得生长 曲线，不会临时要处理，手足无措。必4.要做什么心里要非常淸楚，合理安排时间，细胞房得实验穿插进行，可以丹省很多时间, 也不会耽渓别人得实验。a 5、个人得实验器具自己收一套，不要与别人混用，最近换了什么新得东西稍微记一下， 试剂一旦怀疑污染，马上丢。上6、细胞房不能进去太多人，避免相互干扰。a细胞养不好，自挂东南枝现在一大型药企养细胞做

8、检测，工作量很大，很多地方都没办法非常仔细得做、但就是两 年下来只出现过一次污染，总结一下心得：a 1。 好得洁净室，空调系统跟得上、a 2。好得生物安全柜,硬件跟得上。3、瓶子移液器吸头大都就是进口,耗材跟得上、除了这些就就是自己得操作习惯了。皿4、任何东西不要从敞开得瓶口上而经过。a5。虽然酒精灯会干扰安全柜气流但就是还就是需要一盏用来勤烧瓶口、小 6 .实 验时所用材料得位置摆放要顺手,污染源与已灭菌物品要分开放置。a养细胞就像打仗A 细胞饲养涵盖得内容太广了，而且不同种类细胞得饲养难度以及技术要求不同，肿瘤细胞, 成纤维细胞，上皮细胞。甚至各类干细胞、.每一种都有自己得生长要求、如果只

9、就 是单纯得一般性操作，大同小异,个人觉得练好技术得情况下注意几点就好:小 1、各种无 菌，从培养基到操作过程再到培养箱，时刻注意无菌、本人曾经所在得实验室出现过大规模污 染并最终导致所有细胞集体毁灭.教训惨痛。2。培养基得配制一左要做好梯度摸索并详细记录，否则细胞死都不知道怎么死得、 a 3 .尽量提髙操作熟练度，减少培养皿在培养箱外得滞留时间，细胞很脆弱，经不起折腾, 不像人，热了有空调，冷了能烤火。4. 把握好培养基更换得时间，不同细胞类型时间不同，早了浪费试剂,晚了可能全军覆没。a 5。经验很重要,养细胞得很多经验您就是无法在公开得书籍与资料上找到得。多向实 验室前辈学习，她们会让您少迫很多弯路，真得。金养细胞就像打仗，知彼知己，百战不殆。只有了解您养得对象，才能把她养好。小细胞就 就是矫情养细胞细胞这个东西呢有得时候真说不淸。养过一段时间得巨噬细胞，一开始操作各种 谨