第四次实验微生物的显微镜直接计数法和大小

1、本次实验内容本次实验内容:一一 微生物大小的测定微生物大小的测定;二二 显微直接计数法显微直接计数法;三三 霉菌的形态观察。霉菌的形态观察。 一一 微生物大小的测定微生物大小的测定 微生物大小的概述微生物大小的概述u 对于病毒、细菌、放线菌、真菌和原生动物等不同类型的微对于病毒、细菌、放线菌、真菌和原生动物等不同类型的微生物来说，它们的大小存在很大的差异；生物来说，它们的大小存在很大的差异；u在同一类型中不同种类的微生物，或同一种类中不同时期的微在同一类型中不同种类的微生物，或同一种类中不同时期的微生物个体，它们的大小也存在很大的差异。如生物个体，它们的大小也存在很大的差异。如: :细菌的大小

2、细菌的大小. .一一 实验目的实验目的u 学会使用测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。学会使用测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。一一 微生物大小的测定微生物大小的测定二二 实验材料实验材料u测定菌株测定菌株: 大肠杆菌大肠杆菌;酵母菌。酵母菌。u主要器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺。主要器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺。三三 实验原理实验原理u 测定微生物大小的的工具：测定微生物大小的的工具： 镜台测微尺；目镜测微尺镜台测微尺；目镜测微尺实物照片实物照片三三 实验原理实验原理1 测量时，用目镜测微尺的格数度量微生物的大小，而目镜测微尺每格代表的实际长度用镜台测微尺来校定。目镜测微

3、尺每格的长度= ? 正确答案: 2.5 m 目镜测微尺镜台测微尺三三 实验原理实验原理 2 目镜测微尺每格实际代表的长度随放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前, 必须用镜台测微尺测定每台显微镜不同放大倍数下目镜测微尺每格实际代表的长度。 3 适用 范围：四四 实验步聚实验步聚1 目镜测微尺的校正：在目镜测微尺的校正：在40镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，

4、仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计数两测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计数两重合刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。每种放大倍数取重合刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。每种放大倍数取2次观察次观察结果的均值。结果的均值。 目尺每格长度目尺每格长度(m)=（台尺格数台尺格数10）/目尺格数目尺格数2 菌体大小的测定菌体大小的测定(取取3个菌的平均值个菌的平均值)： 1) 大肠杆菌大小的测定；制片大肠杆菌大小的测定；制片 测定大肠杆菌的长和宽测定大肠杆菌的长和宽 2) 酵母菌大小的测定；制片酵母菌大小的测定；制片 测定酵母菌的直径测定酵母菌的直径2 菌

5、体大小的测定结果：菌体大小的测定结果： 五五 实验结果实验结果1 目镜测微尺的校正结果目镜测微尺的校正结果 不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的实际长度(m) 1010 1040 10100菌株 在不同放大倍数下菌株的大小1010104010100大肠杆菌大肠杆菌_酵母菌酵母菌_一一 实验目的实验目的u 明确血球计数板的计数的原理；明确血球计数板的计数的原理；u学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。二二 显微直接计数法显微直接计数法二二 实验材料实验材料u测定菌株测定菌株: 酵母菌。酵母菌。u主要器材：显微镜、血球记数板。主要器材：显微镜、血球记数板。三

6、三 实验原理实验原理 微生物数量测定的方法：显微直接计数法；平板菌落计数法；光电比浊法。微生物数量测定的方法：显微直接计数法；平板菌落计数法；光电比浊法。1 显微直接计数法的计数原理：显微直接计数法的计数原理：2 1ml菌液中的总菌数菌液中的总菌数= N104B=A/525104B N: 大方格的总菌数；大方格的总菌数； A: 五个中方格的总菌数；五个中方格的总菌数； B：菌液的稀释倍数；：菌液的稀释倍数；3 血球计数板计数的适用范围：血球计数板计数的适用范围：三三 实验原理实验原理 1ml菌液中的总菌数菌液中的总菌数= ？ 答案：答案：(3+4+4+3+2)525104 =8105个个/ml

7、3 血球计数板计数的适用范围：血球计数板计数的适用范围：1 制备酵母菌液：制备酵母菌液：2 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 3 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数 室内不得有气泡。室内不得有气泡。4 用用10镜观察并将计数室移至视野中央。镜观察并将计数室移至视野中央。 5 在在10镜下计数：计数镜下计数：计数4个（或个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。菌液中的含菌数。6 注意事项：注意事项：计上不计下，计左不计右，出芽计一半。计上不计下，计左不计右，出芽计一半。四 实验步聚请确保血球计数板清洗干净！将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数TB二室平均值个/ml12345第一室 第二室 五五 实验结果实验结果问题与讨论问题与讨论为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来为什么目镜测微尺必须用镜台