第21讲基因工程

1、第第21讲讲 基因工程基因工程一、基因工程的基本工具一、基因工程的基本工具 判断正误判断正误 (1)(1)限制酶只能用于切割目的基因。限制酶只能用于切割目的基因。 ( () )(2)(2)限制酶切割限制酶切割DNADNA分子具有特异性。分子具有特异性。( () )(3)(3)限制酶切割限制酶切割DNADNA后可产生黏性末端和平末端后可产生黏性末端和平末端 两种类型。两种类型。 ( () )(4)DNA(4)DNA连接酶能将两碱基间通过形成氢键连接连接酶能将两碱基间通过形成氢键连接 起来。起来。 ( () )(5)(5)E Ecolicoli DNA DNA连接酶既可连接平末端，又可连接酶既可连

2、接平末端，又可 连接黏性末端。连接黏性末端。 ( () )(6)(6)质粒是小型环状质粒是小型环状DNADNA分子，是基因工程常用分子，是基因工程常用 的载体。的载体。 ( () )(7)(7)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞载体的作用是携带目的基因导入受体细胞 中中, ,使之稳定存在并表达。使之稳定存在并表达。 ( () )二、基因工程的操作程序二、基因工程的操作程序 填空填空 基因文库基因文库PCRPCR技术技术启动子启动子标记基因标记基因农杆菌转化法农杆菌转化法花粉管通道法花粉管通道法显微注射显微注射DNADNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交抗原抗原抗体杂交抗体杂交个体生物学水平个

3、体生物学水平三、蛋白质工程三、蛋白质工程 判断正误判断正误 (1)(1)蛋白质工程可按照人的意愿生产出自然界中蛋白质工程可按照人的意愿生产出自然界中 不存在的蛋白质。不存在的蛋白质。 ( () )(2)(2)人类主要通过直接改造蛋白质的结构来生产人类主要通过直接改造蛋白质的结构来生产 新的蛋白质。新的蛋白质。 ( () )(3)(3)蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的 第二代基因工程。第二代基因工程。 ( () )考点考点1 1 _识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论 是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到是奇数

4、个碱基还是偶数个碱基，都可以找到 一条一条中心轴线中心轴线，如图，如图，中轴线两侧中轴线两侧的双链的双链DNADNA 上的碱基是上的碱基是反向对称反向对称重复排列的重复排列的。如。如: :当限制酶在它识别序列的当限制酶在它识别序列的中轴线两侧中轴线两侧将将DNADNA的的两条链分别切开时，产生的是两条链分别切开时，产生的是黏性末端黏性末端。而当限制酶在它识别序列的而当限制酶在它识别序列的中轴线处中轴线处切开时，切开时，产生的则是产生的则是平末端平末端。高考警示高考警示：切割质粒切割质粒需使用限制酶需使用限制酶1 1次次，切割，切割目的基因目的基因则需则需 要使用相同的限制酶要使用相同的限制酶2

5、 2次次。因为质粒是环状。因为质粒是环状DNADNA， 而目的基因在而目的基因在DNADNA分子链上。分子链上。高考警示高考警示：质粒质粒DNADNA分子上分子上限制酶切割位点限制酶切割位点的选择必的选择必须保证须保证 至少有一个标记基因是完整的至少有一个标记基因是完整的，如果标记基因，如果标记基因 全部被切开则不便于鉴定与选择。全部被切开则不便于鉴定与选择。 跟踪训练跟踪训练1 1 关于关于DNADNA重组技术基本工具的说法正确的是重组技术基本工具的说法正确的是( () ) A ADNADNA连接酶只能连接双链连接酶只能连接双链DNADNA片段互补的片段互补的 黏性末端。黏性末端。 B B细

6、菌细胞中含有的限制酶不能对自身细菌细胞中含有的限制酶不能对自身DNADNA 进行剪切。进行剪切。 C C限制酶切割限制酶切割DNADNA后一定能产生黏性末端后一定能产生黏性末端 D D天然的质粒就可以用来作为载体天然的质粒就可以用来作为载体B 跟踪训练跟踪训练2A基因比较小基因比较小，无无启动子启动子、终止子终止子、内含子内含子为为RNARNA聚合酶识别和结合位点，聚合酶识别和结合位点，驱动转录驱动转录mRNAmRNA使转录终止使转录终止的的DNADNA片段片段 几个切口？几个切口？几个粘性末端？几个粘性末端？生物生物种类种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞常用常用方法方法

7、农杆菌转化法农杆菌转化法显微注射技术显微注射技术感受态细胞法感受态细胞法受体受体细胞细胞体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞原核细胞转化转化过程过程将目的基因插入将目的基因插入到到TiTi质粒的质粒的T TDNADNA上上农杆菌农杆菌导入植物细胞导入植物细胞整合到受体细整合到受体细胞的胞的染色体染色体DNADNA上上表达表达将含有目的基将含有目的基因的表达载体因的表达载体提纯提纯取卵取卵( (受精卵受精卵)显显微注射微注射受精受精卵发育卵发育获得获得具有新性状的具有新性状的动物动物CaCa2 2处理细胞处理细胞感受态细胞感受态细胞重组表达载重组表达载体与感受态细体与感受态细胞混合胞混合感受感受态细

8、胞吸收态细胞吸收DNADNA分子分子DNA跟踪训练跟踪训练3下面是获得抗虫棉的技术流程示意图。下面是获得抗虫棉的技术流程示意图。有关叙述错误的是有关叙述错误的是( () )A A重组质粒构建过程中需要限制性内切酶和重组质粒构建过程中需要限制性内切酶和 DNADNA连接酶连接酶B B图中愈伤组织分化产生的再生植株的基因型图中愈伤组织分化产生的再生植株的基因型 一般都相同一般都相同C C卡那霉素抗性基因中含有相关限制性内切酶卡那霉素抗性基因中含有相关限制性内切酶 酶的识别位点酶的识别位点D D转基因抗虫棉有性生殖的后代不能稳定保持转基因抗虫棉有性生殖的后代不能稳定保持 抗虫性状抗虫性状（ ）C跟踪

9、训练跟踪训练4考点考点3 3 : :用基因工程的方法，使外源基因得到用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。高效表达的菌类细胞株系。3.3.工程菌工程菌：工程菌工程菌比较比较：比较项目比较项目乳腺生物反应器乳腺生物反应器工程菌工程菌基因结构基因结构动物基因的结构与动物基因的结构与人类基因的结构基人类基因的结构基本相同本相同细菌或酵母菌等生物基细菌或酵母菌等生物基因的结构与人类基因的因的结构与人类基因的结构有较大差异结构有较大差异基因表达基因表达合成的药物蛋白与合成的药物蛋白与天然蛋白质相同天然蛋白质相同细菌细胞细菌细胞内内没有内质网、没有内质网、高尔基体高尔基体等细胞器，产等细

10、胞器，产生的药物蛋白生的药物蛋白可能没有可能没有活性活性药物提取药物提取从动物乳汁中提取从动物乳汁中提取从微生物细胞中提取从微生物细胞中提取生产设备生产设备 畜牧业生产，畜牧业生产， 加提取设备加提取设备工业生产，设备精良工业生产，设备精良受体细胞受体细胞动物的受精卵动物的受精卵微生物细胞微生物细胞导入目的导入目的基因方式基因方式显微注射法显微注射法感受态细胞法感受态细胞法生产条件生产条件不需严格灭菌，温度等不需严格灭菌，温度等外界条件对其影响不大外界条件对其影响不大需严格灭菌，严格需严格灭菌，严格控制工程菌所需的控制工程菌所需的温度、温度、pHpH、营养物、营养物质浓度等外界条件质浓度等外界

11、条件比较项目比较项目乳腺生物反应器乳腺生物反应器工程菌工程菌跟踪训练跟踪训练5 C考点考点4 4 : :跟踪训练跟踪训练61 1(2010(2010全国卷全国卷)下列叙述符合基因工程概念下列叙述符合基因工程概念 的是的是 ( () )A AB B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中 含有含有B B淋巴细胞中的抗体基因淋巴细胞中的抗体基因B B将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆 菌，获得能产生人干扰素的菌株菌，获得能产生人干扰素的菌株C C用紫外线照射青霉菌，使其用紫外线照射青霉菌，使其DNADNA发生改变，发生改变，

12、 通过筛选获得青霉素高产菌株通过筛选获得青霉素高产菌株D D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后 其其DNADNA整合到细菌整合到细菌DNADNA上上2.2.【1212浙江浙江6 6】天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于 缺少控制蓝色色素合成的基因缺少控制蓝色色素合成的基因B B，而开蓝色花的，而开蓝色花的 矮牵牛中存在序列已知的基因矮牵牛中存在序列已知的基因B B，现用基因工程，现用基因工程 技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是 ( )( )A A提取矮牵牛蓝色花的提取矮牵牛蓝色花的mRNAmRNA，

13、经逆转录获得互补，经逆转录获得互补 的的DNADNA，再扩增基因，再扩增基因B BB B利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的 基因文库中获取基因基因文库中获取基因B BC C利用利用DNADNA聚合酶将基因聚合酶将基因B B与质粒连接后导入与质粒连接后导入 玫瑰细胞玫瑰细胞D D将基因将基因B B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入直接导入大肠杆菌，然后感染并转入 玫瑰细胞玫瑰细胞3.20143.2014重庆卷重庆卷 如图是利用基因工程培育抗虫如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是植物的示意图。以下相关叙述，正确的是( () )A A

14、的构建需要限制性核酸内切酶和的构建需要限制性核酸内切酶和DNADNA聚合酶参与聚合酶参与B B侵染植物细胞后，重组侵染植物细胞后，重组TiTi质粒整合到的染色体上质粒整合到的染色体上C C的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D D只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异4.20144.2014天津卷天津卷 为达到相应目的，必须通过为达到相应目的，必须通过 分子检测的是分子检测的是 ( () )A A携带链霉素抗性基因受体菌的筛选携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B B产生抗人白细胞介素产生抗人白细胞介素

15、8 8抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞 的筛选的筛选C C转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D D2121三体综合征的诊断三体综合征的诊断A A过程需使用逆转录酶过程需使用逆转录酶B B过程需使用解旋酶和过程需使用解旋酶和PCRPCR获取目的基因获取目的基因C C过程使用的感受态细胞可用过程使用的感受态细胞可用NaClNaCl溶液制备溶液制备D D过程可利用过程可利用DNADNA分子杂交鉴定目的基因是否分子杂交鉴定目的基因是否 已导入受体细胞已导入受体细胞5.20145.2014广东卷广东卷 ( (双选双选) )利用基因工程技术利用基因工程技术 生产羧酸酯酶生产羧酸酯

16、酶(CarE)(CarE)制剂的流程如图所示，制剂的流程如图所示， 下列叙述正确的是下列叙述正确的是 ( ( ) )6.20146.2014江苏卷江苏卷 ( (多选多选) )下列关于基因工程下列关于基因工程技术的叙述，错误的是技术的叙述，错误的是 ( ( ) )A A切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地 识别识别6 6个核苷酸序列个核苷酸序列B BPCRPCR反应中温度的周期性改变是为了反应中温度的周期性改变是为了DNADNA聚聚合酶催化不同的反应合酶催化不同的反应C C载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因选标记

17、基因D D抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达体上也未必能正常表达1 1(2010(2010全国卷全国卷)下列叙述符合基因工程概念下列叙述符合基因工程概念 的是的是 ( () )A AB B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中 含有含有B B淋巴细胞中的抗体基因淋巴细胞中的抗体基因B B将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆 菌，获得能产生人干扰素的菌株菌，获得能产生人干扰素的菌株C C用紫外线照射青霉菌，使其用紫外线照射青霉菌，使其DNADNA发生改变，发生改变，

18、 通过筛选获得青霉素高产菌株通过筛选获得青霉素高产菌株D D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后 其其DNADNA整合到细菌整合到细菌DNADNA上上 B2.2.【1212浙江浙江6 6】天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于 缺少控制蓝色色素合成的基因缺少控制蓝色色素合成的基因B B，而开蓝色花的，而开蓝色花的 矮牵牛中存在序列已知的基因矮牵牛中存在序列已知的基因B B，现用基因工程，现用基因工程 技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是 ( )( )A A提取矮牵牛蓝色花的提取矮牵牛蓝色花的mRNAmRN

19、A，经逆转录获得互补，经逆转录获得互补 的的DNADNA，再扩增基因，再扩增基因B BB B利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的 基因文库中获取基因基因文库中获取基因B BC C利用利用DNADNA聚合酶将基因聚合酶将基因B B与质粒连接后导入与质粒连接后导入 玫瑰细胞玫瑰细胞D D将基因将基因B B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入直接导入大肠杆菌，然后感染并转入 玫瑰细胞玫瑰细胞A3.20143.2014重庆卷重庆卷 如图是利用基因工程培育抗虫如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是植物的示意图。以下相关叙述，正确的是( () )

20、A A的构建需要限制性核酸内切酶和的构建需要限制性核酸内切酶和DNADNA聚合酶参与聚合酶参与B B侵染植物细胞后，重组侵染植物细胞后，重组TiTi质粒整合到的染色体上质粒整合到的染色体上C C的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D D只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异D4.20144.2014天津卷天津卷 为达到相应目的，必须通过为达到相应目的，必须通过 分子检测的是分子检测的是 ( () )A A携带链霉素抗性基因受体菌的筛选携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B B产生抗人白细胞介素产生抗人白

21、细胞介素8 8抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞 的筛选的筛选C C转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D D2121三体综合征的诊断三体综合征的诊断BA A过程需使用逆转录酶过程需使用逆转录酶B B过程需使用解旋酶和过程需使用解旋酶和PCRPCR获取目的基因获取目的基因C C过程使用的感受态细胞可用过程使用的感受态细胞可用NaClNaCl溶液制备溶液制备D D过程可利用过程可利用DNADNA分子杂交鉴定目的基因是否分子杂交鉴定目的基因是否 已导入受体细胞已导入受体细胞5.20145.2014广东卷广东卷 ( (双选双选) )利用基因工程技术利用基因工程技术 生产羧酸酯酶

22、生产羧酸酯酶(CarE)(CarE)制剂的流程如图所示，制剂的流程如图所示， 下列叙述正确的是下列叙述正确的是 ( ( ) )A A、D D6.20146.2014江苏卷江苏卷 ( (多选多选) )下列关于基因工程技术下列关于基因工程技术 的叙述，错误的是的叙述，错误的是 ( ( ) )A A切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地 识别识别6 6个核苷酸序列个核苷酸序列B BPCRPCR反应中温度的周期性改变是为了反应中温度的周期性改变是为了DNADNA聚合酶聚合酶 催化不同的反应催化不同的反应C C载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选载体质粒通常采用抗生素

23、合成基因作为筛选 标记基因标记基因D D抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上 也未必能正常表达也未必能正常表达A、B、C祝同学们前程似锦祝同学们前程似锦! !2.(20122.(2012福建卷福建卷) )肺细胞中的肺细胞中的letlet7 7基因表达减弱，基因表达减弱， 癌基因癌基因RASRAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利表达增强，会引发肺癌。研究人员利 用基因工程技术将用基因工程技术将letlet7 7基因导入肺癌细胞实基因导入肺癌细胞实 现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基 因工程技术基本流程如图因

24、工程技术基本流程如图1 1。图图1 1图图2 2限制性核酸内切限制性核酸内切( (或或限制限制) )启动子启动子胰蛋白胰蛋白请回答：请回答：(1)(1)进行过程时，需用进行过程时，需用_酶切开载体以插入酶切开载体以插入letlet7 7基因。载体应有基因。载体应有RNARNA聚聚合酶识别和结合的部位，以驱动合酶识别和结合的部位，以驱动letlet7 7基因转录，基因转录，该部位称为该部位称为_。(2)(2)进行过程时，需用进行过程时，需用_酶处理贴附在酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。(3)(3)研究发现，研究发现，letlet7 7基因能影响癌基

25、因基因能影响癌基因RASRAS的的表达，其影响机理如图表达，其影响机理如图2 2。据图分析，可从细胞。据图分析，可从细胞中提取中提取_进行分子杂交，以直接检测进行分子杂交，以直接检测letlet7 7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中可能是由于细胞中_(RASmRNA/RAS_(RASmRNA/RAS蛋白蛋白) )含量减少引起的。含量减少引起的。RNARNARASRAS蛋白蛋白祝同学们前程似锦祝同学们前程似锦! !最近在基因工程教学，对最近在基因工程教学，对20112011年高考题学生有疑问，年高考题学生有疑问，我也解释不清楚，就借助绍兴柯

26、桥中学叶建伟老师我也解释不清楚，就借助绍兴柯桥中学叶建伟老师的解释，选部分供大家参考。的解释，选部分供大家参考。例题（例题（20112011年高考理综浙江卷第年高考理综浙江卷第6 6题）将题）将adaada（腺苷酸脱（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒氨酶基因）通过质粒pET28bpET28b导入大肠杆菌并成功表达腺导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 A A每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B B每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C C每个限制性核酸内切酶识别位

27、点至少插入一个每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaada D D每个插入的每个插入的adaada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子参考答案：参考答案：C C 考生对考生对A A和和D D选项基本没有异议，选项基本没有异议，B B和和C C二个选项在师生中二个选项在师生中引起广泛争议，甚至有人认为试题存在科学性错误。下引起广泛争议，甚至有人认为试题存在科学性错误。下面是一些具有代表性的错误观点和笔者（叶建伟老师）面是一些具有代表性的错误观点和笔者（叶建伟老师）对相关疑难问题的阐述（节选）。对相关疑难问题的阐述（节选）。 1 1 重组质粒是否含有限制性核酸内切酶识别

28、位点重组质粒是否含有限制性核酸内切酶识别位点 认为认为B B选项表述的含义是错误的原因分析：选项表述的含义是错误的原因分析： 目的基因和质粒能够形成重组质粒的关键是目的基因和目的基因和质粒能够形成重组质粒的关键是目的基因和 质粒被限制性核酸内切酶切割后具有相同的粘性末端。质粒被限制性核酸内切酶切割后具有相同的粘性末端。 形成相同的粘性末端可以采用两种方法：形成相同的粘性末端可以采用两种方法： 用用相同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒相同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒； 用用同尾酶切割目的基因和质粒同尾酶切割目的基因和质粒。若选择同尾酶分别。若选择同尾酶分别 切割目的基因和质粒，再由切

29、割目的基因和质粒，再由DNADNA连接酶作用形成重组连接酶作用形成重组 质粒。该重组质粒可能无法被同尾酶中的任何一种质粒。该重组质粒可能无法被同尾酶中的任何一种 限制性核酸内切酶识别和切割。限制性核酸内切酶识别和切割。实际上基因工程技术的操作过程中会遇到很多问题，实际上基因工程技术的操作过程中会遇到很多问题，如重组质粒导入受体细胞后，目的基因的表达可能会如重组质粒导入受体细胞后，目的基因的表达可能会出现目的基因不表达、表达水平过低或过高、表达产出现目的基因不表达、表达水平过低或过高、表达产物的氨基酸序列差错等多种表达异常情况。当出现目物的氨基酸序列差错等多种表达异常情况。当出现目的基因的表达异

30、常时，需要回收目的基因，并对目的的基因的表达异常时，需要回收目的基因，并对目的基因进行加工修饰，最终使目的基因表达出人们所预基因进行加工修饰，最终使目的基因表达出人们所预期的效果。因此在期的效果。因此在构建重组质粒时，要求连接形成的构建重组质粒时，要求连接形成的“接点接点”序列，必须能被特定的限制性核酸内切酶识别、序列，必须能被特定的限制性核酸内切酶识别、切割，以便回收插入质粒的目的基因切割，以便回收插入质粒的目的基因2 2 质粒的每个限制性核酸内切酶识别位点是否都要插入质粒的每个限制性核酸内切酶识别位点是否都要插入目的基因目的基因认为认为C C选项表述的含义是正确的原因分析：具有一种或选项表

31、述的含义是正确的原因分析：具有一种或多种限制性核酸内切酶的单一切割位点是理想质粒载体多种限制性核酸内切酶的单一切割位点是理想质粒载体的基本条件之一，的基本条件之一，同时该切割位点就是目的基因的插入位点。也就是说如同时该切割位点就是目的基因的插入位点。也就是说如果用某一特定的限制性核酸内切酶（如果用某一特定的限制性核酸内切酶（如BamHBamH）作用于）作用于基因工程质粒载体（如基因工程质粒载体（如pET28bpET28b）只会产生一个切口，）只会产生一个切口，故认为该切口插入一个目的基因（如故认为该切口插入一个目的基因（如adaada）是目的基因）是目的基因成功表达（如合成腺苷酸脱氨酶）的前提条件。成功表达（如合成腺苷酸脱氨酶）的前提条件。基因工程通常不选择天然质粒直接作为目的基因的载体，基因工程通常不选择天然质粒直接作为目的基因的载体，而选择以天然质粒为基础，人工改造和组建形成的实用而选择以天然质粒为基础，人工改造和组建形成的实用质粒作为目的基因的载体。这种实用质粒不是单纯为某质粒作为目的基因的载体。这种实用质粒不是单纯为某一目的基因构建的，而需要有较广泛的使用功能，也就一目的基