薄层色谱法分离菠菜叶色素

1、薄层色谱法分离菠菜叶色素2012/11/27 1.掌握薄层色谱法的原理、操作方法；掌握薄层色谱法的原理、操作方法； 2.利用薄层色谱法对菠菜叶色素进行分离。利用薄层色谱法对菠菜叶色素进行分离。一、实验目的 薄层色谱法薄层色谱法 薄层色谱法是一种微量、快速和简单的色谱方法，薄层色谱法是一种微量、快速和简单的色谱方法，它不仅是一种定性定量分析的重要手段，还是一种它不仅是一种定性定量分析的重要手段，还是一种有效的分离提纯方法，在有机化学、生物化学和制有效的分离提纯方法，在有机化学、生物化学和制备分离领域具有广泛应用。备分离领域具有广泛应用。 特点：设备简单，操作方便迅速，分离效率高，有特点：设备简单

2、，操作方便迅速，分离效率高，有较高的灵敏度和灵活性，既适合分离微量样品，又较高的灵敏度和灵活性，既适合分离微量样品，又适合于大型制备色谱。适合于大型制备色谱。二、实验原理 色谱有三种形式：吸附色谱、分配色谱和离子交换色谱有三种形式：吸附色谱、分配色谱和离子交换色谱。应用较为广泛的是吸附薄层色谱，即固液吸色谱。应用较为广泛的是吸附薄层色谱，即固液吸附薄层色谱，其原理是附薄层色谱，其原理是化合物在吸附剂和展开剂之化合物在吸附剂和展开剂之间进行反复的吸附和解吸附，吸附能力较弱的溶质间进行反复的吸附和解吸附，吸附能力较弱的溶质首先被展开剂解吸下来，随展开剂向前移动较快，首先被展开剂解吸下来，随展开剂向

3、前移动较快，而吸附能力较强的溶质解析较慢，随展开剂移动较而吸附能力较强的溶质解析较慢，随展开剂移动较慢，从而达到分离的目的。慢，从而达到分离的目的。二、实验原理 R甲甲 = a/cR乙乙 = b/cRf值测量方法值测量方法二、实验原理 1. 吸附剂的选择和薄层板的制备吸附剂的选择和薄层板的制备 2. 薄层板的活化薄层板的活化 硅胶板，硅胶板，105110烘箱中活化烘箱中活化0.5h。 3. 点样点样 在距薄层板一端在距薄层板一端约约1cm处用铅笔画起始线；配置样品溶液；毛处用铅笔画起始线；配置样品溶液；毛细管点样，斑点直径不要太大。细管点样，斑点直径不要太大。 4. 展开展开 展开剂的选择原则

4、：展开剂的选择原则： I. 展开剂的极性应该对分离的物质有一展开剂的极性应该对分离的物质有一 定的解吸能力，但不定的解吸能力，但不能太大，比被分离物质的极性略小；能太大，比被分离物质的极性略小； II. 展开剂对被分离的物质有一定的溶解度。展开剂对被分离的物质有一定的溶解度。 常用混合溶剂：石油醚常用混合溶剂：石油醚乙醚、石油醚乙醚、石油醚乙酸乙酯、环己烷乙酸乙酯、环己烷乙酸乙酯等。乙酸乙酯等。 5. 显色显色 紫外灯显色、碘薰显色、显色剂显色。紫外灯显色、碘薰显色、显色剂显色。三、操作方法 活化硅胶板、活化硅胶板、层析缸层析缸、玻璃棒、研钵；、玻璃棒、研钵； 95%乙醇、石油醚（乙醇、石油醚

5、（6090 ）、丙酮、菠菜叶。）、丙酮、菠菜叶。四、仪器与试剂直立式层析缸示意图直立式层析缸示意图 1. 硅胶板的活化硅胶板的活化 于烘箱中于烘箱中105110活化活化0.5h。 2. 菠菜叶绿素的提取菠菜叶绿素的提取 将将12片新鲜菠菜叶剪碎放于研钵中研磨，然后加入片新鲜菠菜叶剪碎放于研钵中研磨，然后加入20ml石油石油醚醚乙醇（乙醇（1:1）混合溶液继续研磨）混合溶液继续研磨3min，用吸管将萃取液转，用吸管将萃取液转移至分液漏斗中，用等体积的水洗涤两次，将上层有机相转移移至分液漏斗中，用等体积的水洗涤两次，将上层有机相转移至干燥的小锥形瓶中，用无水硫酸镁干燥。至干燥的小锥形瓶中，用无水硫

6、酸镁干燥。 3.分离与鉴定分离与鉴定 在经活化的硅胶板一端约在经活化的硅胶板一端约1cm 处，用铅笔轻轻划上起始线，用处，用铅笔轻轻划上起始线，用管口平整的毛细管吸取提取液点样，斑点直径约为管口平整的毛细管吸取提取液点样，斑点直径约为2至至3mm。在在层析缸层析缸中加入约深中加入约深0.5cm的展开剂（的展开剂（丙酮丙酮:石油醚石油醚=1:2），将），将点好样的硅胶板放入其中进行展开，当展开剂前沿爬至上端约点好样的硅胶板放入其中进行展开，当展开剂前沿爬至上端约1cm处时，取出硅胶板并立即用铅笔记下溶剂前沿位置，晾干处时，取出硅胶板并立即用铅笔记下溶剂前沿位置，晾干后计算各斑点的后计算各斑点的R

7、f值。值。五、实验步骤 4. 菠菜叶色素的分离菠菜叶色素的分离 从上至下依次为：从上至下依次为：-胡萝卜素、去镁叶绿素胡萝卜素、去镁叶绿素a、叶绿、叶绿素素a、叶绿素、叶绿素b、叶黄素、紫黄质、新黄质、点样点、叶黄素、紫黄质、新黄质、点样点。五、实验步骤1. 1. 菠菜叶不可研得太烂而成糊状，否则会造成分离困菠菜叶不可研得太烂而成糊状，否则会造成分离困 难；难；2. 2. 用水洗涤萃取液时，不要剧烈振荡，否则容易乳化；用水洗涤萃取液时，不要剧烈振荡，否则容易乳化；3. 3. 于于层析缸层析缸中加入展开剂后可摇动几下，令其蒸汽达中加入展开剂后可摇动几下，令其蒸汽达到饱和；到饱和；4. 4. 点样时不要点破硅胶层表面，点样完毕后应先令溶点样时不要点破硅胶层表面，点样完毕后应先令溶剂挥发后再进行展开。剂挥发后再进行展开。六、注意事项七、思考题 1.1.怎样选择合适的展开剂？展开剂极性太大或是太怎样选择合适的展开剂？展开剂极性太大或是太小会有什么影响？小会有什么影响？ 2.2.为什么样品斑点直