探究性实验一微生物的培养与应用PPT课件

1、课题课题1、微生物实验室培养、微生物实验室培养1培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用 途工业生产观察微生物的运动、分类、鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种分类、鉴定工业生产鉴别不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)不加凝固剂加凝固剂，如琼脂含化学成分不明确的天然物质培养基成分明确液体培养基半固体培养基半固体培养基天然培养基合成培养基选择培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加某种指示剂或化学药品培养基中加入某种化学物质，以

2、抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的的生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐)第1页/共19页目的要明确：根据微生物的种类、培养目的选择不同的原料配制 培养基营养要协调：配制培养基时要注意各营养物质的浓度和比例、PH 要适宜2.培养基的配制原则和营养构成培养基的配制原则和营养构成(1)培养基的配制原则(2)培养基的营养构成各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源 和无机盐。不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 第2页/共19页3配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项配制

3、牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项(1)步骤：(2)注意事项计算称量溶化灭菌倒平板倒平板的温度一般在50左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 第3页/共19页4纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项(1)原理：(2)方法：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。平板划线法、稀释涂布平板法平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种

4、的单个菌落。(如下图)平板划线法：第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。 灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 划线时最后一区域不要与第一区域相连。 划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。注意:第4页/共19页稀释涂布平板法：.系列稀释操作(图1)：a将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101106的顺序编号。b用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。 c从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。以此类推，直到完成最后1支试管的稀释

5、。第5页/共19页.涂布平板操作如图2所示：稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证“无菌无菌”。具体如下：。具体如下：酒精灯与培养皿的距离要合适；酒精灯与培养皿的距离要合适；吸管头不要接触任何其他物体；吸管头不要接触任何其他物体；吸管要在酒精灯火焰周围使用。吸管要在酒精灯火焰周围使用。注意：第6页/共19页对位训练1有关稀释涂布平板法的叙述中，错误的是()A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落2分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47

6、H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请完成下列问题。(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_和_。(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？_。D答案(1)葡萄糖尿素(2)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长第7页/共19页课题课题2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1筛选菌株的原理筛选菌株的原理2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法3细菌分离与计数的实验流程细菌分离与计数的实验流程4该实验中的注意事项该实验中的注意事项5对位训练第8页/共19页课题课题2、土壤中分

7、解尿素的细菌的分离与计数、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1筛选菌株的原理筛选菌株的原理微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法原理：方法：缺点：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。不能区分死菌与活菌。用计数板计数。第9页/共19页每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌

8、落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作：a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。计算公式：第10页/共19页土壤取样样品稀释取样涂布微生物的培养观察并记录结果细菌计数稀释度104 105106123平均值123平均值123平均值菌落数/平板菌数/克土壤3细菌分离与计数的实验流程细菌分离与计数的实验流程第11页/共19页4该实验中的注意事项该实验中的注意事项(1)设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。(2)对照原

9、则判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。误区警示牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照，即不涂布菌液，目的是验证培养基中是否含杂菌。样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。第12页/共19页3分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是 ()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A BC D5对位训练4在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学

10、结果的原因可能有 ()土样不同培养基污染操作失误没有设置对照A BC DCA第13页/共19页5用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 ()A涂布了1个平板，统计的菌落数是230B涂布了2个平板，统计的菌落数分别是216和260，取平均值238C涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163D涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、241和248，取平均值233D第14页/共19页课题课题3、分解纤维素的微生物的分离、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶纤维素酶2纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌的筛选

11、原理3土壤中纤维素分解菌的筛选流程土壤中纤维素分解菌的筛选流程4对位训练第15页/共19页1纤维素酶纤维素酶纤维素 纤维二糖 葡萄糖C1酶CX酶葡萄糖苷酶2纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌的筛选原理红色复合物 红色消失，出现透明圈纤维素分解菌纤维素酶刚果红纤维素纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：第16页/共19页土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。3土壤中纤维素分解菌的筛选流程土壤中纤维素分解菌的筛选流程提醒纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，因培养基中无凝固剂，利用液体培养基以增加纤维素分解菌的浓度。选择培养基以纤维素做碳源和能源，其它绝大多数微生物不能正常生长；鉴别培养基因含琼脂，故为固体培养基，刚果红染色法就是应用的此培养基。为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。流程中的“选择培养”是