尼扎替丁在大鼠体肠吸收动力学研究

1、尼扎替丁在大鼠体肠吸收动力学研究         09-09-25 11:35:00     作者：孙嘉敏 张洁 李铜铃    编辑：studa20【摘要】  目的 研究尼扎替丁在大鼠肠道中的吸收机理。方法 运用大鼠原位肠灌注模型，采用高效液相色谱法测定肠灌注液中药物和酚红的浓度，计算尼扎替丁在各部位的吸收参数。结果 尼扎替丁在全肠段均有吸收，但吸收都较差，吸收速率常数为十二指肠>回肠>空肠>结肠，不同浓度尼

2、扎替丁循环时，吸收参数无统计学差异。结论 尼扎替丁在大鼠肠道内的吸收呈现一级吸收动力学特征，其吸收机理为被动扩散。 【关键词】  尼扎替丁； 在体肠吸收； 高效液相色谱； 吸收机理    【Abstract】  Objective To study the absorption mechanism of Nizatidine in intestine of rats.Methods The model of in situ intestinal perfusion was applied in this research and HPLC me

3、thod was established to determine the concentration of Nizatidine and phenolsulfonphthalein in the perfusate in order to calculate the absorption parameter of Nizatidine.Results Nizatidine was poorly absorbed,and the comparison of Ka in different segments is as follows:duodenum>ileum>jejunal&g

4、t;colon.There was no significant difference of absorption parameters.Conclusion Nizatidine complied with the first order absorption kinetics and the absorption mechanism of Nizatidine is passive transport.    【Key words】  Nizatidine；   in situ intestinal perfusion； 

5、;  HPLC；   absorption mechanism  尼扎替丁（Nizatidine）是一种新型组胺H2受体拮抗剂，竞争性地与组胺H2受体相结合，可逆性地抑止其功能，从而抑制胃酸分泌。临床上广泛用于治疗消化性溃疡、胃食管返流性疾病且无明显毒副作用1，显示较好疗效。研究该药在肠道各段地吸收特征对于进一步开发NZTD新型给药系统有重要意义。    本实验采用大鼠原位肠灌注模型，对NZTD的吸收动力学进行研究。    1  实验部分    1.1&#

6、160; 仪器、试药与动物    DDB320多功能恒流泵（浙江象山生化电子仪器厂）； LC10Avp液相色谱仪（包括APD10Avp紫外检测器、CTO10Asvp柱温箱，日本岛津公司）； Anke TGL16G高速离心机（上海安亭）。尼扎替丁原料药（批号：060714，来源：自制）； 尼扎替丁对照品（批号：061108，来源：自制）； KrebsRingers营养液（简称KR液，pH 7.4）； SD大鼠，220250g（四川大学动物中心）。    1.2  循环液中尼扎替丁和酚红的含量测定方法  &#

7、160; 1.2.1  色谱条件  Diamonsil C18色谱柱（200mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇0.05 mol·L1乙酸铵缓冲液（3.88 g 乙酸铵中加入5 ml三乙胺，加水至1 ×103 ml，乙酸调pH 6.7）（51 : 49），流速1.0 ml·min1，检测波长295 nm，柱温30.    1.2.2  方法专属性考察  在选定的色谱条件下，测得空白循环液、空白循环液加入尼扎替丁，空白循环液加入酚红及小肠循环样品的色谱图（见图1）。结果表明，空白循

8、环液不干扰药物及酚红的测定，药物和酚红的保留时间分别为4.0 min 和9.1 min.    1.2.3  标准曲线的制备  用空白循环液分别配制含NZTD 1.73、8.63、17.26、34.52、 77.67、 155.34 g ·ml1的标准工作液，取20 l进样，按“1.2.1”项下方法检测，以峰面积对浓度回归得NZTD的标准曲线方程：A = 3.557 2×104 C1.931 2×104（r=0.999 9）。用KR液配制含酚红为5.02、10.04、20.07、30.11、40.14、50.18

9、g ·ml1的标准工作液，依法测定，峰面积对浓度回归后得酚红的标准曲线方程：A = 1.8817×104 C5.082×103（r=0.999 9）。    1.2.4  方法准确度、精密度及样品稳定性  NZTD在空白循环液中高（103.90 g ·ml1）、中（51.78 g ·ml1）、低（6.90 g ·ml1）浓度的平均回收率分别为100.30 %、99.14 %、103.01 %（n = 5）； 日内精密度为0.40 %、0.18 %、0.10 %（n=5）； 日间精密度为

10、1.25 %、1.67 %、2.21 %（n=5）； 将含NZTD高、中、低三个浓度的肠循环液置37水浴中，分别于0、0.5、1.5、2.0 h取样，测定峰面积，结果表明：2 h内NZTD在肠循环液中稳定，高、中、低三个浓度的RSD分别为0.89 %、0.74 %、0.82 %.    酚红在空白循环液中高（45.46 g ·ml1）、中（25.01 g ·ml1）、低（10.08 g ·ml1）浓度的平均回收率分别为100.67 %、99.70 %、100.48 %（n=5）； 日内精密度为0.60 %、0.40 %、0.70 %（

11、n=5）； 日间精密度为0.35 %、0.58 %、1.18 %（n=5）。    1.2.5  肠道的吸附、代谢和摄取的考察  剪取大鼠小肠，剖开洗净，置NZTD中浓度的小肠循环液中，37孵育2 h，测定孵育后NZTD的浓度，其剩余百分率为94.72 %（n = 3）。可认为大鼠肠壁对NZTD无显著的吸附、代谢和摄取。     09-09-25 11:35:00     作者：孙嘉敏 张洁 李铜铃    编辑：studa20

12、    1.3  尼扎替丁吸收机理的研究    1.3.1  溶液的配制  KR液：分别称取7.8 g NaCl、0.35 g KCl、0.37 g CaCl2、1.37 g NaHCO3、0.02 g MgCl2、0.32 g NaH2PO4和1.4 g葡萄糖用蒸馏水定容至1 L即得； 空白循环液：KR液进行大鼠小肠循环灌注2 h，即得。酚红液：取酚红约20 mg精密称定，置1 000 ml量瓶中，KR液溶解，稀释定容至刻度，即得； 供试液：分别用KR液配制成高、中、低浓度分别为133.4、66.7、3

13、3.4 g ·ml1的供试品溶液。    1.3.2  大鼠的在体肠吸收实验  选实验前禁食1夜(自由饮水)，体重220250 g的SD大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠40 mg·kg1，麻醉后固定。切开腹腔，分离待考察肠段，于两端切口，插管，用37 生理盐水缓缓洗净肠管内容物。将肠管两端的玻璃管与蠕动泵的胶管连接，形成回路，开动蠕动泵。供试液以3 ml·min1流速循环10 min后，将流速调节为1.5 ml·min1，立即吸取1 ml循环液，同时向取样瓶中补加酚红液1 ml，其后每隔15 min亦按同法取样并

14、补加酚红液，循环2 h，样品经1.2×104 r·min1离心5 min后进样测定。    2  实验结果    2.1  NZTD在大鼠小肠各部位的吸收速率常数    以剩余药量的对数值对取样时间进行线性回归，直线的斜率即为各肠段的吸收速率常数（见表1）。表1  NZTD在小肠各段的吸收速率常数由表1可知，吸收速率按十二指肠、回肠、空肠、结肠顺序下降。各回归直线的r值均大于0.900 0，表明药物浓度的下降与循环时间呈线性关系，故为一级动力学吸收。

15、60;   2.2  不同浓度的NZTD对吸收的影响    分别考察高、中、低三个浓度NZTD在小肠和结肠的吸收，实验数据按“2.1”项处理，求出不同浓度下循环后的吸收速率常数和药物吸收百分率（见表2）。表2  不同浓度在小肠的吸收数据由表2可见，给予不同剂量的NZTD，Ka值几乎不随浓度的变化而变化，说明NZTD在大鼠小肠的转运机制为被动扩散。    3  讨论    本实验建立了同时测定NZTD和酚红在肠循环液中含量的HPLC方法，与目前多数使用酚红校

16、正水分的在体肠吸收实验分别测定药物及酚红浓度的方法相比24，操作简便，节省时间，有利于大批样品的测定。虽然酚红在该色谱条件下峰形较宽，但是理论塔板数不小于2 500，对称因子为0.951.00，满足含量测定要求。    在体肠循环实验采用的流速较目前常采用的流速低57，原因在于笔者发现高流速下大鼠肠段过度充盈且肠黏膜极易被冲出，肠段较难接近正常的生理状态，易造成酚红的吸收，从而导致实验误差，但若采用低流速，则需相应延长循环时间增加取样点。在考察了2.5 ml·min1、2.0 ml·min1、1.5 ml·min1、1.0 ml

17、83;min1四个流速后，综合循环时间、肠段充盈程度以及回归直线的相关系数等因素，初步选择流速为1.5 ml·min1.    本实验结果表明NZTD在肠道内的吸收速率常数较小，在全小肠段均有吸收，无特定吸收部位，提示若想制成理想的新型口服给药系统，需通过制剂手段提高其吸收。【参考文献】  1 Parente F,Bianchi Pono G.Acid Inhibitory Characteristics of Nizatidine in Man: an OverviewJ.Scand J Gastoenterol Suppl,1994,206

18、: 37.2 易跃能，杨华，叶樱.尼扎替丁注射液含量测定的方法比较J.中南药学，2006，2(1)：2323.3 张蓉琴，李铜铃，程强.尼扎替丁的含量及有关物质测定方法的改进J.华西药学杂志，2004，19(3)：217218.4 刘明，陈束叶，杨天府.大鼠对阿魏酸哌嗪的在体肠吸收J.华西药学杂志，2006，21(4)：351351.5 冯亮，蒋学华，周静.三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的大鼠在体肠吸收动力学研究J.中国药学杂志，2006，41(14)：1 0991 099.6 杨星刚，张立波，潘卫三.芍药苷大鼠在体肠吸收动力学的研究J.中国药学杂志，2006，41(11)：856856.7 陆

19、彬.药剂学实验M.北京：人民出版社，1994，131135.     09-09-25 11:35:00     作者：孙嘉敏 张洁 李铜铃    编辑：studa20    1.3  尼扎替丁吸收机理的研究    1.3.1  溶液的配制  KR液：分别称取7.8 g NaCl、0.35 g KCl、0.37 g CaCl2、1.37 g NaHCO3、0.02 g MgCl2、0.3

20、2 g NaH2PO4和1.4 g葡萄糖用蒸馏水定容至1 L即得； 空白循环液：KR液进行大鼠小肠循环灌注2 h，即得。酚红液：取酚红约20 mg精密称定，置1 000 ml量瓶中，KR液溶解，稀释定容至刻度，即得； 供试液：分别用KR液配制成高、中、低浓度分别为133.4、66.7、33.4 g ·ml1的供试品溶液。    1.3.2  大鼠的在体肠吸收实验  选实验前禁食1夜(自由饮水)，体重220250 g的SD大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠40 mg·kg1，麻醉后固定。切开腹腔，分离待考察肠段，于两端切口，插管，用37

21、 生理盐水缓缓洗净肠管内容物。将肠管两端的玻璃管与蠕动泵的胶管连接，形成回路，开动蠕动泵。供试液以3 ml·min1流速循环10 min后，将流速调节为1.5 ml·min1，立即吸取1 ml循环液，同时向取样瓶中补加酚红液1 ml，其后每隔15 min亦按同法取样并补加酚红液，循环2 h，样品经1.2×104 r·min1离心5 min后进样测定。    2  实验结果    2.1  NZTD在大鼠小肠各部位的吸收速率常数    以剩余药量的

22、对数值对取样时间进行线性回归，直线的斜率即为各肠段的吸收速率常数（见表1）。表1  NZTD在小肠各段的吸收速率常数由表1可知，吸收速率按十二指肠、回肠、空肠、结肠顺序下降。各回归直线的r值均大于0.900 0，表明药物浓度的下降与循环时间呈线性关系，故为一级动力学吸收。    2.2  不同浓度的NZTD对吸收的影响    分别考察高、中、低三个浓度NZTD在小肠和结肠的吸收，实验数据按“2.1”项处理，求出不同浓度下循环后的吸收速率常数和药物吸收百分率（见表2）。表2  不同浓度在小肠的吸收数据由表2

23、可见，给予不同剂量的NZTD，Ka值几乎不随浓度的变化而变化，说明NZTD在大鼠小肠的转运机制为被动扩散。    3  讨论    本实验建立了同时测定NZTD和酚红在肠循环液中含量的HPLC方法，与目前多数使用酚红校正水分的在体肠吸收实验分别测定药物及酚红浓度的方法相比24，操作简便，节省时间，有利于大批样品的测定。虽然酚红在该色谱条件下峰形较宽，但是理论塔板数不小于2 500，对称因子为0.951.00，满足含量测定要求。    在体肠循环实验采用的流速较目前常采用的流速低57，原因在于笔者发现高流速下大