手术创伤后外周静脉血内毒素的研究

1、手术/创伤后外周静脉血内毒素的研究 摘要目的探讨健康成人和创伤病人外周静脉血内毒素水平及其与创伤的关系。方法采用偶氮显色鲎试验检测50例健康成人及51例不同手术/创伤病人外周静脉血的内毒素。结果(1)此法检测内毒素可达微量(10-2 Eu/ml,n=5)，重复性较好(CV=2.29%,n=5)。(2)本法测得健康成人外周静脉血内毒素0.033?Eu/ml，与国际水准一致。(3)病人术后3天内毒素升高(P0.01)。(4)病人外周静脉血内毒素与创伤程度呈正相关，R2=0.667。结论本法测定血微量内毒素是可行的。外周静脉内毒素水平随创伤程度增加而增加。关键词手术/创伤内毒素移位偶氮显色鲎试验St

2、udy on endotoxin levels in peripheral venous blood after operation/traumaXU Pengyuan, JIANG Zhuming, SUN Yonghua, et al. Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming 650101Abstract Objective To investigate the relationship between the endotoxin leve

3、l in peripheral venous blood and trauma in the patients with trauma and healthy adults. Methods Peripheral venous blood samples were taken from 50 healthy people and 51 patients with various surgical operations/trauma and the endotoxin levels in peripheral venous blood assayed by using Limulum lysat

4、e test with chromogenic substrate. Results Improved limulus lysate test with chromogenic substrate could determine the trace amount endotoxin (10-2 Eu/ml, n=5)and had a good reproducible (CV=2.29%, n=5). Endotoxin levels in 50 healthy adults in peripheral venous blood was below 0.0330 Eu/ml. Endotox

5、in concentration at the 3rd day after operation was obviously increased as compared with that before operation (P0.01). Endotoxin levels in peripheral venous blood were correlated with the severity of stress. Conclusion This method might be feasible for determining trace amount endotoxin. Endotoxin

6、levels in peripheral venous blood were positively correlated with the severity of stress.Key words Operation/trauma Endotoxin translocation Limulus lysate test with chromogenic substrate我们采用偶氮显色鲎试验微检技术1测定健康人和病人外周静脉血内毒素，以了解健康人和不同创伤病人外周静脉血内毒素水平，现报道如下。对象与方法1. 材料CS101-1E型电热鼓风烤箱(中外合资重庆四达仪器有限公司生产)，无热原水(协和

7、医院制)，无热原试管和无热原肝素试管。冻干细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所，批号9703，60单位)；细菌内毒素检查用水中国药品生物制品检定所批号(Lot)1。鲎试剂盒(上海医化所，1997)。分光光度计：BECKMAN VIS-723(美国BECK-MAN公司)。净洁工作台(北京半导体一厂生产)。2. 对象(1)健康志愿者：50例健康成人(男36例，女14例)，年龄1843岁(平均29.2岁)，取空腹12小时1.5ml肘静脉血作健康对照。(2)临床病人：北京协和医院外科和北京积水潭医院烧伤科手术/创伤病人51例。其中男29例，女22例，年龄1670岁(平均47.4岁)。3. 方法

8、(1)取血：手术病人术前1天、术后3天和6天晨取外周静脉血，烧伤病人入院当天取外周静脉血1.5ml，处理后保存于-30待测。病人应激程度评定：按APACHE评分。(2)测定内毒素：制定标准内毒素定量曲线后，用稀释加热法对上述备用血浆进行预处理，吸取0.1ml血浆进行检测，将测得的吸光度代入回归方程算出内毒素含量。结果1. 50例健康成人血浆内毒素含量为(0.0160.086)Eu/ml，取95%的可信区间为正常值范围，则正常值上限为0.033Eu/ml(3.3ng/L)。2. 病人外周静脉血内毒素水平术后3天血内毒素浓度明显增高(0.0360.0059)，与术前比较差异有显著性，P=0.001

9、7，术后6天内毒素下降为(0.0190.0055)，与术前比较差异无显著性，P=0.2042。8例烧伤病人内毒素值为(0.0870.012)，与正常值比较差异有显著性，P=0.0026。术后3天内毒素浓度超过正常值者11例(占25.6%)，与术前比较差异有显著性(P0.01)。8例烧伤病人内毒素含量均超过正常(占100%)。病人APACHE评分见表1，术后3天及烧伤当天内毒素与应激程度的相关性见1。从1可见病人外周静脉血浆内毒素与应激程度呈正相关，R2=0.665。表1普外病人术后3天及烧伤病人当天APACHE评分情况评分临床病例14分23例(胆囊手术、甲状腺手术、乳腺手术和短肠综合征)58分

10、20例(胆囊手术、胃手术、直肠癌手术、克隆氏病手术，胰腺手术、甲状腺手术、腹疝手术、脾手术和烧伤病人)912分6例(直肠肉瘤手术、乳腺癌手术、胃手术、门脉高压手术和烧伤病人)1316分2例(直肠癌手术、阻塞性黄疸) 讨论将标准内毒素稀释为0.03、0.06、0.12、0.2、0.4Eu/ml可制定出一理想曲线(相关系数为0.994)。内毒素浓度为0.03Eu/ml时，平均吸光度为0.10 O.D(n=5)，与空白管对照(0.03O.D)表示本法测定内毒素可达微量(10-2Eu/ml)水平，并有良好的重复性(CV=2.29%)。所得正常值0.033Eu/ml与国际水准一致。我们认为本试验的关键在

11、于严格无热原操作，取量精确及操作熟练以减少系统误差。 151例病人血浆内毒素与应激程度的相关性本研究结果显示，术后3天病人内毒素增高有统计学意义，术后6天内毒素下降至正常。内毒素水平随着创伤程度的增加而增加，呈正相关关系。所有手术病人均无感染，而烧伤病人当天处于渗出期发生创面感染的可能性极小，其内毒素增高均考虑应激损伤肠粘膜，肠道内毒素移位所致。创伤状态外周静脉血内毒素是否增高主要取决于肠粘膜受损情况；肝脏清除内毒素的功能状态2等因素。当肠粘膜严重受损，门静脉血内毒素明显增高时，由于内毒素对肝脏的直接致伤效应以及刺激单核巨噬细胞系统后产生的多种活性物质的损伤作用，常常引起肝脏功能降低，因而引起外周静脉血内毒素增高。本试验结果还提示应激大小与外周静脉血内毒素有相关性，创伤越大，内毒素水平越高，这可能与严重创伤造成肠粘膜屏障损害有关。本研究结果提示，临床上正确应用偶氮显色鲎试验定量测定外周静脉血微量内毒素是可行的。外周静脉内毒素水平与创伤程度呈正相关，这对在临床中研究和监测创伤状态下肠道内毒素移位，从而防治内源性感染有重要意义。本课题为卫生部重点资助项目(No.97010204)和卫生部国际交流中心资助项目(No.97-13)作者单位：徐鹏远6501