枸杞对酒精性肝损伤大鼠保护作用的实验研究(一)

1、枸杞对酒精性肝损伤大鼠保护作用的实验研究(一)    【摘要】 目的 观察宁夏枸杞对酒精性肝损伤大鼠的保护作用。方法 选择成年雄性SD大鼠60只，体重300340g，随机分为四组：空白对照组每天给予蒸馏水灌胃，喂饲基础饲料；其余三组按10mL/(kg·bw)剂量给予56度白酒灌胃，酒精模型组喂饲基础饲料；低剂量枸杞组：喂饲基础饲料枸杞(50g/kg)；高剂量枸杞组：喂饲基础饲料枸杞(100g/kg)，喂饲3周，实验期末，空腹12h，20%乌拉坦麻醉后，心脏取血制备血清及10% 肝组织匀浆，测定谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧

2、化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)，并取肝组织病理切片检查。结果 与酒精模型组比较，枸杞组肝脏SOD、CAT 活性均高于酒精模型组，差别有统计学意义(P0.01)；枸杞组血清ALT活性低于酒精模型组，差别有统计学意义(P0.01)；枸杞组血清、肝脏中MDA含量均低于酒精模型组，差别有统计学意义(P0.05);肝组织病理结果提示宁夏枸杞对酒精性肝损伤大鼠具有保护作用。结论 宁夏枸杞对酒精性肝损伤大鼠具有抗脂质过氧化及保护肝细胞的作用。 【关键词】 枸杞 酒精性肝损伤大鼠 抗脂质过氧化 宁夏Abstract： Objective To explore the prote

3、ction effects of Lycium barbarrum(LB) on alcoholic liver injury in rats. Methods Sixty male rats weighed 300340g were randomly divided into four groups.The blank group were given distilled water and basic animal feeds. The other three groups were given 56 degrees spirit by 10ml/kg·bw. The alcoh

4、ol model rats were fed with basic animal feeds. The low dose group rats were fed with basic animal feeds and LB 50g/kg. The high dose group rats were fed with basic animal feeds and LB 100g/kg. After three weeks, we took serum from heart and liver organization to detect the ALT, SOD, CAT, MDA, TAOC

5、and check the pathological slice of liver organization. Results Compared with the alcohol model group,LB group's activity of SOD, CAT were significantly higher. The activity of serum ALT in LB group were significantly lower than that in the alcohol model group (P0.01). The concentration of MDA i

6、n the alcohol model group were significantly lower than that in the alcohol model group (P0.05). The pathological results showed that LB had certain protection effect on alcohol liver injury in rats. Conclusion LB has lipid peroxidation and protection effects for rats with alcohol liver injury.Key w

7、ords:Lycium barbarrum;rats with alcoholic liver injury; lipid peroxidation近年来,我国人均酒精消耗量显著增长,酒精性肝病(Alcoholic liver disease，ALD)的发病率也呈逐年增加趋势,对酒精性肝病的研究仍停留在临床治疗方面。从营养学角度来讲，寻找酒精性肝损伤的天然保护物质，采取有效的干预措施，具有重要的意义。宁夏枸杞富含多种营养素和生物活性物质，且具有抗氧化、降血脂及免疫调节等作用1。然而，目前国内尚未见宁夏枸杞(Lycium barbarrum，LB)对酒精性肝损伤保护作用的研究报道，本研究建立了酒

8、精性肝损伤动物模型，观察宁夏枸杞对酒精性肝损伤的保护作用，为进一步开发利用宁夏枸杞提供科学依据。1 材料与方法1.1 受试物宁夏中宁枸杞、白酒(56度红星二锅头，北京酿酒总厂生产)。1.2 实验动物成年雄性SD大鼠，由宁夏医学院实验动物中心提供。1.3 实验方法取成年雄性SD大鼠60只，体重300340g,适应性饲养3d后，随机分为4组(空白对照组、酒精模型组、低剂量枸杞组、高剂量枸杞组)，每组15只；空白对照组每天给予蒸馏水灌胃，喂饲基础饲料;其余三组大鼠按10mL/(kg·bw)剂量给予56度白酒灌胃，其中酒精模型组大鼠喂饲基础饲料，低剂量枸杞组：喂饲基础饲料枸杞(50g/kg饲

9、料);高剂量枸杞组：喂饲基础饲料枸杞(100g/kg饲料)，喂饲3周；实验期末，大鼠空腹12h，用20%乌拉坦麻醉后，取心脏血及肝脏，制备血清及10%肝匀浆,检测血清和肝组织谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力 (T-AOC)等指标，并取肝组织作病理切片检查。1.4 测定指标及方法用赖氏法检测谷丙转氨酶(ALT);羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)；硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)；钼酸胺法检测过氧化氢酶(CAT)；比色法检测总抗氧化能力 (T-AOC);考马斯亮蓝法检测肝脏组织蛋白。(上述检测指标均采用试剂盒，由南京建成生

10、物工程研究所提供)1.5 肝脏病理学检查每组随机取5只大鼠，取肝左叶,10%甲醛固定，常规制作石蜡切片,进行HE染色。1.6 统计学方法采用SPSS 11.5统计软件进行分析，结果以±s表示，用方差分析方法进行统计学检验。2 结果2.1 肝组织病理切片结果空白对照组：肝细胞有正常的多边形细胞形状和结构，小叶结构清晰，汇管区未见炎细胞浸润(图1，见封4)。酒精组:肝细胞显示程度不同的嗜酸性颗粒变性，有大小不等的灶状坏死(图2，见封4)，大部分肝细胞胞浆内见有多量微脂滴，可见融合性大脂滴(脂肪变性)及酒精小体，汇管区有较多量炎细胞浸润(图3，见封4)。枸杞高剂量组:肝细胞胞浆疏松，可找到

11、不典型的酒精小体，中等量微脂滴，汇管区血管扩张，少量淋巴细胞浸润(图4，见封4)。枸杞低剂量组:肝细胞嗜酸性颗粒变性，核周可找到不规则的酒精小体，微脂滴多见。汇管区血管轻度充血，少量炎细胞浸润(图5，见封4)。2.2 宁夏枸杞对大鼠血清ALT、CAT、SOD、MDA、T-AOC的影响 (表1)表1 枸杞对大鼠血清中ALT、CAT、SOD、MDA、T-AOC的影响(略)模型组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)活性高于空白对照组，差别有统计学意义(P0.01)，枸杞组大鼠血清ALT活性均低于模型组，差别有统计学意义(P0.01);与酒精模型组相比，枸杞组血清CAT活性有升高趋势，但是差别无统计学意义;酒

12、精模型组血清SOD低于空白对照组，差别无统计学意义；枸杞高剂量组和枸杞低剂量组血清SOD活性高于酒精模型组，差别无统计学意义；酒精模型组大鼠血清MDA含量高于空白对照组，差别有统计学意义(P0.01)；枸杞高剂量和低剂量组大鼠血清中MDA含量低于酒精模型组，差别有统计学意义(P0.05)；酒精模型组大鼠血清中总抗氧化能力低于空白对照组，差别有统计学意义(P0.01)；枸杞高剂量组、低剂量组大鼠肝脏中总抗氧化能力均高于模型组，差别无统计学意义。2.3 宁夏枸杞对大鼠肝脏中CAT、SOD、MDA、T-AOC的影响由表2可知，与空白对照组相比,酒精模型组肝脏CAT活性明显低于空白对照组，差别有统计学

13、意义(P0.01)；枸杞高剂量组肝脏CAT活性高于模型组，差别有统计学意义(P0.05);酒精模型组肝脏SOD活性低于空白对照组，差别有统计学意义(P0.01)，枸杞高剂量组和枸杞低剂量组肝脏SOD活性均高于酒精模型组，差别有统计学意义(P0.01); 酒精模型组肝脏MDA含量高于空白对照组，差别有统计学意义(P0.01)；枸杞高剂量组大鼠肝脏中MDA含量低于模型组，差别无统计学意义；枸杞低剂量组大鼠肝脏中MDA含量低于模型组，差别有统计学意义(P0.05);枸杞高剂量组、低剂量组大鼠肝脏中总抗氧化能力均高于模型组，差别无统计学意义。表2 枸杞对大鼠肝脏中CAT、SOD、MDA、T-AOC的影

14、响(略)3 讨论本实验采用56度白酒10mL/(kg·bw)连续灌胃3周,结果显示酒精模型组大鼠血清中ALT活性明显增高;肝组织中MDA升高，SOD、CAT降低;肝组织病理结果显示酒精模型组可见大小不等的灶状坏死,大部分肝细胞胞浆内有多量微脂滴，可见融合性大脂滴(脂肪变性)及酒精小体，汇管区有较多量炎细胞浸润。肝脏病理学改变与李舒丹等报道相一致2，提示酒精模型组既有酒精性肝炎的存在,也有酒精性脂肪肝的表现，表明酒精性肝损伤动物模型建立成功。乙醇在其代谢过程中可通过多种途径产生自由基,自由基能与细胞大分子反应,导致脂质过氧化,损伤肝细胞,引起细胞结构和功能的破坏2。SOD可以催化超氧化

15、物自由基,并有效地清除自由基，CAT与SOD协同作用，清除由歧化反应生成的过氧化氢4。长期饮酒,使SOD、CAT活力下降,不能有效地清除自由基,使活性氧水平发生改变，可促发脂质过氧化反应，导致肝细胞损伤5。MDA是脂质过氧化物分解的终末产物,可损伤组织细胞的膜性结构，影响膜的功能，从而导致组织细胞功能的损伤6。MDA在组织中的含量可直接反应机体脂质过氧化的速率和强度。因此,SOD、CAT活力的降低和MDA含量的升高可以间接地反应肝细胞脂质过氧化损害的程度。肝组织病理结果提示:枸杞组肝损伤程度较模型组明显减轻，表明宁夏枸杞对酒精性肝损伤大鼠具有保护作用；生化结果显示：与酒精模型组比较，枸杞组血清

16、CAT、SOD活性均高于模型组；ALT活性低于模型组； 血清、肝脏中MDA含量均低于模型组； 枸杞组总抗氧化能力高于模型组，表明宁夏枸杞能有效地阻止酒精所致肝损伤脂质过氧化物的终产物MDA的升高,具有抗脂质过氧化及保护肝细胞的作用。同时发现枸杞高剂量组对肝损伤的保护作用优于枸杞低剂量组。枸杞提高SOD、CAT活性可能是其减轻鼠肝脂质过氧化损伤的机制之一。由于枸杞富含黄酮类、胡萝卜素、维生素E及硒等抗氧化活性成分7，故宁夏枸杞可有效地清除自由基，阻止酒精诱发的脂质过氧化损伤。综上所述,宁夏枸杞对酒精性肝损伤大鼠具有明显的保护作用，其保护机制可能是宁夏枸杞富含抗氧化物质，能提高机体SOD、CAT活性，降低MDA的含量,从而减轻自由基引发的肝脂质过氧化损伤。宁夏枸杞资源丰富，具有良好的开发和应用前景。【参考文献】1罗琼，阎俊.枸杞及其多糖对家兔血脂的影响J.营养学报,1997,19(4):415-418.2李舒丹，厉有名,虞朝辉.大鼠慢性酒精性肝损伤模型的建立J.浙江医学,2002,24(9):524-530.3朴丽花,金政,李相伍.悦肝胶囊对小鼠酒精性