关于电针足三里对吗啡戒断大鼠μ受体mRNA表达的影响

1、关于电针足三里对吗啡戒断大鼠受体mRNA表达的影响    If you run after two heares, you will ca.  Riches do not always bring happiness.                    作者：宋小鸽张垚朱永磊刘先华【摘要】  ：目的 探讨电针改善吗啡戒断症状

2、的作用机制。方法 建立自然吗啡戒断大鼠模型,运用RT-PCR方法测定脑组织受体mRNA的表达,观察电针足三里对吗啡戒断大鼠体重及受体mRNA表达的影响。结果 电针组大鼠体重比戒断组增加明显(P<0.05),戒断组和电针组比正常组脑组织中受体mRNA表达降低,治疗后电针组比戒断组脑组织中受体mRNA表达明显增加。结论 电针足三里具有提高吗啡戒断大鼠体重、改善大鼠吗啡戒断症状的作用()。电针调节吗啡戒断大鼠海马、下丘脑受体mRNA的表达,可能是电针改善大鼠吗啡戒断症状的作用机制之一。 A faithful friend is hard to find.

3、  【关键词】  电针足三里吗啡戒断大鼠受体mRNA论文既是探讨问题进行科学研究的一种手段，又是描述科研成果进行学术交流的一种工具.  Abstract：Objective To research the mechanism of electroacupuncture (EA) improving morphine abstinence syndrome in rats. Methods The 

4、model of the rat with physical morphine abstinence syndrome was established. The expression of -opioid receptor mRNA in the brain tissue of morphine withdrawal rats was e

5、xamined by RT-PCR, and effects of EA at Zusanli (ST36) on the body weight and expression of -opioid receptor mRNA of morphine withdrawal rat were observed. Results T

6、he body weight of the EA group was increased compared with the morphine abstinence group (P<0.05). Comparing with the control group, the expression of -opioid receptor 

7、;mRNA in the brain was lower in the EA group and the morphine abstinence group. After EA, the expression of -opioid receptor mRNA of the EA group was more 

8、increased than the morphine abstinence group. Conclusion EA at Zusanli (ST-36) can increase body weight of morphine withdrawal rats, and improve morphine abstinence syndrome. EA

9、60;can increase expression of -opioid receptor mRNA in hippolcapal and hypothalamus of brain tissue in morphine withdrawal rat, that may be one of the mechanisms of EA

10、60;improving morphine abstinence syndrome of rats.There is more trouble in having nothing to do than in having much to do.  Key words：electroacupuncture；Zusanli；morphine withdrawal rat；-opioid receptor mRNA      有研究报道,大鼠

11、在吗啡依赖、戒断过程中额叶皮质、海马、丘脑等受体出现明显下调,显著低于正常组水平,并认为受体下调是阿片类依赖和戒断的重要神经生物学机制之一1。为了进一步探讨针刺改善戒断症状的作用机制,我们在以往研究的基础上,运用RT-PCR方法测定脑组织受体mRNA的表达,在观察电针足三里对吗啡戒断大鼠体重影响的同时,探讨电针对海马、下丘脑受体mRNA表达的调节作用。现将结果报道如下。Riches do not always bring happiness.  1  材料与方法I know no such thing as genius, it is nothing but la

12、bour and diligence.  1.1  仪器与试药    PCR仪(德国产)；台式高速冷冻离心机(美国产)；电泳及转印系统(瑞典Amersham)；凝胶成像系统(美国伯乐)。盐酸吗啡由沈阳第一制药厂提供,批号000606；RT-PCR试剂盒购自基Promega公司,dntp、Taq酶购自Sangon公司。The best of friends must part.  1.2  动物    健康SD大鼠24只,雌雄各半,体重180200 

13、;g,安徽医科大学实验动物中心提供(医药学/临床医学论文 )。1.3  造模    连续递增给予大鼠注射吗啡20 d,第1天皮下注射5 mg/kg,从第2天起,每天吗啡剂量增加5 mg/kg(每天上、下午各1次),第20天的给药量达100 mg/kg,造成吗啡依赖大鼠模型,于实验第21天停药,大鼠出现戒断症状,造成自然吗啡戒断大鼠模型。1.4  分组    将实验大鼠分为正常组、戒断组、电针组,每组8只,雌雄各半。正常组：皮下注射注射用

14、水0.5 mL,每天1次,连续20 d,常规饲养观察7 d；戒断组：造模后不予任何治疗,常规饲养观察7 d；电针组：造模后,于实验第21天给予电针双侧足三里(PCE-88A型程控电针仪,采用2 Hz和100 Hz交替),每天1次,每次30 min,连续治疗7 d。The best of friends must part.  1.5  观察指标1.5.1  体重在造模前及造模结束后4、12、24 h和电针治疗后,进行大鼠体重的测量。1.5.2 &

15、#160;受体mRNA表达 Hide one's talents in a napkin.  运用半定量RT-PCR方法测定丘脑和海马受体mRNA的表达。The wise hand doth not all that the fool.      引物由Sangon公司合成,受体两条引物序列为：上游引物：5ACC TGG CTC CTG GCT CAA CTT 3；下游引物：5TGG ACC CCT GCC 

16、TGT ATT TTG 3；-actin上游引物：5ATC ATG TTT GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC 3；-actin下游引物：5AAG AGA GCC TCG GGG CAT CGG AAC CGC TCA 3。    总提取RNA,逆转录：大鼠脱臼处死,浸泡在75%酒精中10 min。

17、在消毒室内断头取脑。迅速分离丘脑和海马,各取100 mg,消毒、碾碎；加Tizzol 1 mL；加氯仿0.2 mL；4 ,离心15 min；转上层水相于另一1.5 mL EP管中；加等体积异丙醇,混匀,室温10 min；再4 ,离心10 min；弃上清,加冰预冷的75%乙醇1 mL；4 ,离心5 min；弃上清,空气干燥510 min；溶于DEPC水中,70 ,水浴10 min,立即置冰上。加入反应体系后,室温放10 

18、;min；42 ,水浴60 min；95、水浴5 min, -20 保存备用。    PCR反应：取适量逆转录反应液,分别进行受体和- actin的PCR扩增。PCR反应液总体积为25 L。条件为94 变性5 min后进行PCR循环,94 变形30 s,58 退火50 s, 72 延伸30 s,完成30个循环,置-20 保存。取10 L PCR产物,1%琼脂糖凝胶上电

19、泳,运用凝胶成像系统进行成像摄影。 论文教育信息网  【摘要】  ：目的 探讨电针改善吗啡戒断症状的作用机制。方法 建立自然吗啡戒断大鼠模型,运用RT-PCR方法测定脑组织受体mRNA的表达,观察电针足三里对吗啡戒断大鼠体重及受体mRNA表达的影响。结果 电针组大鼠体重比戒断组增加明显(P<0.05),戒断组和电针组比正常组脑组织中受体mRNA表达降低,治疗后电针组比戒断组脑组织中受体mRNA表达明显增加。结论 电针足三里具有提高吗啡戒断大鼠体重、改善大鼠吗啡戒断症状的作用。电针调节吗啡戒断大鼠海马、下丘脑受

20、体mRNA的表达,可能是电针改善大鼠吗啡戒断症状的作用机制之一。 【关键词】  电针足三里吗啡戒断大鼠受体mRNAEffects of Electroacupuncture on Expression of -opioid Receptor mRNA of Morphine Withdrawal Rat Take a pain for a pleasure all wise men can.  SONG Xiao-g

21、e, ZHANG Yao, ZHU Yong-lei, et alInstitute of Acu-moxibustion, Anhui College of TCM, Hefei 230038, ChinaOne cannot be in two place at once.  Abstract：Objective To research the mechanism of e

22、lectroacupuncture (EA) improving morphine abstinence syndrome in rats. Methods The model of the rat with physical morphine abstinence syndrome was established. The expression of -o

23、pioid receptor mRNA in the brain tissue of morphine withdrawal rats was examined by RT-PCR, and effects of EA at Zusanli (ST36) on the body weight and expression

24、0;of -opioid receptor mRNA of morphine withdrawal rat were observed. Results The body weight of the EA group was increased compared with the morphine abstinence group (P&

25、lt;0.05). Comparing with the control group, the expression of -opioid receptor mRNA in the brain was lower in the EA group and the morphine abstinence group. After E

26、A, the expression of -opioid receptor mRNA of the EA group was more increased than the morphine abstinence group. Conclusion EA at Zusanli (ST-36) can increase body 

27、weight of morphine withdrawal rats, and improve morphine abstinence syndrome. EA can increase expression of -opioid receptor mRNA in hippolcapal and hypothalamus of brain tissue

28、60;in morphine withdrawal rat, that may be one of the mechanisms of EA improving morphine abstinence syndrome of rats.Key words：electroacupuncture；Zusanli；morphine withdrawal rat；-opioid rec

29、eptor mRNAEvery man has his hobby-horse.      有研究报道,大鼠在吗啡依赖、戒断过程中额叶皮质、海马、丘脑等受体出现明显下调,显著低于正常组水平,并认为受体下调是阿片类依赖和戒断的重要神经生物学机制之一1。为了进一步探讨针刺改善戒断症状的作用机制,我们在以往研究的基础上,运用RT-PCR方法测定脑组织受体mRNA的表达,在观察电针足三里对吗啡戒断大鼠体重影响的同时,探讨电针对海马、下丘脑受体mRNA表达的调节作用。现将结果报道如下。  1  材料与方法1.1&#

30、160; 仪器与试药    PCR仪(德国产)；台式高速冷冻离心机(美国产)；电泳及转印系统(瑞典Amersham)；凝胶成像系统(美国伯乐)。盐酸吗啡由沈阳第一制药厂提供,批号000606；RT-PCR试剂盒购自基Promega公司,dntp、Taq酶购自Sangon公司。1.2  动物    健康SD大鼠24只,雌雄各半,体重180200 g,安徽医科大学实验动物中心提供。1.3  造模论文分为专题型、论辩型、综述型和综合型四大类  

31、0;   连续递增给予大鼠注射吗啡20 d,第1天皮下注射5 mg/kg,从第2天起,每天吗啡剂量增加5 mg/kg(每天上、下午各1次),第20天的给药量达100 mg/kg,造成吗啡依赖大鼠模型,于实验第21天停药,大鼠出现戒断症状,造成自然吗啡戒断大鼠模型。Nature is the glass reflecting truth.  1.4  分组Money is the root of all evil.      将实验大鼠分为正常组、

32、戒断组、电针组,每组8只,雌雄各半。正常组：皮下注射注射用水0.5 mL,每天1次,连续20 d,常规饲养观察7 d；戒断组：造模后不予任何治疗,常规饲养观察7 d；电针组：造模后,于实验第21天给予电针双侧足三里(PCE-88A型程控电针仪,采用2 Hz和100 Hz交替),每天1次,每次30 min,连续治疗7 d。We are here to add what we can to life, not to get what we can from it.  1.5  观察指标St

33、ill waters have deep bottoms.  1.5.1  体重  在造模前及造模结束后4、12、24 h和电针治疗后,进行大鼠体重的测量。1.5.2  受体mRNA表达 运用半定量RT-PCR方法测定丘脑和海马受体mRNA的表达。    引物由Sangon公司合成,受体两条引物序列为：上游引物：5ACC TGG CTC CTG GCT CAA CTT 3；下游引物：5TGG AC

34、C CCT GCC TGT ATT TTG 3；-actin上游引物：5ATC ATG TTT GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC 3；-actin下游引物：5AAG AGA GCC TCG GGG CAT CGG AAC CGC TCA 3。    总提取RNA,逆转录：大鼠脱

35、臼处死,浸泡在75%酒精中10 min。在消毒室内断头取脑。迅速分离丘脑和海马,各取100 mg,消毒、碾碎；加Tizzol 1 mL；加氯仿0.2 mL；4 ,离心15 min；转上层水相于另一1.5 mL EP管中；加等体积异丙醇,混匀,室温10 min；再4 ,离心10 min；弃上清,加冰预冷的75%乙醇1 mL；4 ,离心5 min；弃上清,空气干燥510 min；溶于DEPC水中,70 ,水浴10 min

36、,立即置冰上。加入反应体系后,室温放10 min；42 ,水浴60 min；95、水浴5 min, -20 保存备用。Everybody's business is nobody's business.      PCR反应：取适量逆转录反应液,分别进行受体和- actin的PCR扩增。PCR反应液总体积为25 L。条件为94 变性5 min后进行PCR循环,94 变形30 s,58 退火50

37、0;s, 72 延伸30 s,完成30个循环,置-20 保存。取10 L PCR产物,1%琼脂糖凝胶上电泳,运用凝胶成像系统进行成像摄影。It is right to put everything in its proper use.  1.6  统计学方法    实验数据采用x±s表示,组间差异性比较用t检验,方差分析,所有统计数据均用SPSS 11.0统计软件分析。2  结果Early mistakes are the s

38、eeds of future trouble.  2.1  各组大鼠体重比较(见表1)表1  各组大鼠体重比较(略)注：与正常组比较,*P<0.01；与戒断组比较,P<0.05 2.2  受体mRNA表达    -actin mRNA和受体mRNA扩增片段在凝胶电泳中分别位于400500 bp和500600 bp之间,证明扩增片段为目的基因。戒断组在500600 bp处信号弱,条带不明显,表明受体扩增产物少,受体mRNA表达降低。电针组在此处条带较强,但是还不能达到正常组水平,表明受体扩增产物高于戒断组,受体mRNA表达较戒断组增高。结果见图1。3  讨论  &