自身抗体的应用及研究进展ppt课件

1、自身抗体的应用及研究进展自身抗体的应用及研究进展 2酶联免疫吸附法ELISA） 1间接免疫荧光法IFA Indirect Fluorescent Assay ）3免疫印迹法IBWesternblotLIA4其它：IDA、RIA等全自动自身抗体分析仪全自动自身抗体分析仪u自动化检测自动化检测u检测定量化检测定量化u单个项目随时检测单个项目随时检测u多个项目同时检测多个项目同时检测u45-90分钟报告结果分钟报告结果u原厂质控和校正血清原厂质控和校正血清u精确温度调控系统精确温度调控系统u五点定标、三重检测五点定标、三重检测25wash 2wash 3read 3wash 1read 1read

2、2disp15101520风湿病的实验室诊断u血清学检查血清学检查u 自身抗体自身抗体特异性特异性u 非特异的免疫相关指标非特异的免疫相关指标u滑液分析滑液分析u一般的实验室检查项目一般的实验室检查项目项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、 ELISA抗SM免疫印迹、 ELISA抗SSA免疫印迹、 ELISA抗SSB免疫印迹、 ELISA抗JO-1免疫印迹、 ELISA抗SCL-70免疫印迹、 ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、 ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体

3、）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(1)(2)自身免疫肝炎七项自身免疫肝炎七项ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗

4、体）间接免疫荧光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法抗Ku抗体Ku)抗Mi抗体Mi-2）抗PM-Scl抗体抗JO-1抗体JO-1）多发性肌炎、皮肌炎抗线粒体抗体M2型AMA-M2）原发性胆汁性肝硬化抗nRNP抗体U1-snRNP）混合性结缔组织病MCTD）抗Scl-70抗体Scl-70）抗着丝点B抗体CENP-B）系统性硬化抗SSB/La抗体抗SSA/R052抗体

5、抗SS-A/R060抗体干燥综合征/系统性红斑狼疮抗核糖体P蛋白PO）抗增殖细胞核抗原抗体PCNA)抗Sm抗体抗组蛋白抗体抗核小体抗体抗双链DNA抗体IgG抗体系统性红斑狼疮项项 目目 名名 称称 疾疾 病病ANA谱谱17项免疫印迹法）项免疫印迹法）(3)常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法( (一一) )类风湿关节炎类风湿关节炎RARA）u类风湿因子RF）u早期诊断的系列指标u抗RA33/36抗体u抗核周因子APF）u抗角蛋白抗体AKA）u抗Sa抗体u抗环瓜氨酸抗体抗CCP）u抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体AKA）抗角蛋白抗体(AKA)，1979年Young等发现类风湿性关节炎(R

6、A)血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，并对类风湿性关节炎(RA)具有特异性，命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当。AKA可以在RA发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。AKA检测方法：取6周龄雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作为抗原，做冰冻切片，厚4 m5 m-70 保存备用。加1 20稀释血清，湿盒内37孵育30分钟，PBS漂洗，吹干，加1 20稀释的荧光素标记羊抗人IgG，37孵育30分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片荧光显微镜下观察。判定标准：以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光为阳性。gene Filaggrin类风湿因子类风湿因

7、子RFRF）u抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型uRF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的重要标准之一uRF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。类风湿因子RF）uRF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性u SLE 30% SS 70%90%u SSc 20%30% MCTD 50%60%u 非风湿性疾病u 5%以下的正常人uRF阳性不等于一定就是RAuRF阴性也不等于一定就不是RARF常用检测方法uRF 1：40阳性 乳胶凝集法测IgM-RF

8、）uRF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF）uRF-IgG 110IU/mlu-IgA 18IU/ml ELISA法 u-IgM 200IU/mlRARA早期诊断的系列指标早期诊断的系列指标 敏感性 特异性抗RA33/36抗体 35.8% 99.6%APF 40%-80% 70%-90%AKA 40%-55% 85%-95%抗Sa抗体 40%-60% 98.6% 抗CCP 46%-70% 96%抗环瓜氨酸肽抗体抗CCP）u瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关u 抗体的主要抗原决定簇u对RA诊断具有高度特异性98%）u可在RA早期出现u预测早期关节炎发展为RAuRA关节侵蚀破

9、坏的早期识别及预测(二)系统性红斑狼疮SLE）u是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体u自身抗体u（1抗核抗体谱ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体u（2抗磷脂抗体u（3抗组织细胞抗体抗RBC抗体u 抗血小板相关抗体u 抗神经元抗体u（4其它RF、p-ANCA抗核抗体抗核抗体ANA）u定义以细胞核内物质为抗原的抗体u临床意义uSLE的筛查抗体:u 95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关u 阴性基本可排除SLEu阳性并非SLE特异u 阳性并非风湿病特异:u 风湿病SLE、SSc、SS、RA) u 非风湿性疾病感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤

10、）u 服用某些药物INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）u 抗核抗体抗核抗体ANAANA）方法间接免疫荧光法结果判断: 滴度1：100为阳性 常见核型5种 不同核型的临床意义不同 核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA有关，有关， 多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者 均质型均质型与与AHA抗组蛋白抗抗组蛋白抗体）、抗体）、抗DNA有关，引有关，引起起LE形成主要见于形成主要见于SLE、药物性狼疮药物性狼疮 斑点型斑点型 与抗与抗ENA有关，应进一有关，应进一步查特异性抗体步查特异性抗体核仁型核仁型多见于硬皮病多见于硬皮病 着丝点型着丝点型多见于多见于CREST综合征综合征ANA

11、常见五种核型及临床意义u核膜型与抗ds-DNA有关，u 多见于SLE，特别是有肾炎者u均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成u 主要见于SLE、药物性狼疮u斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体u核仁型多见于硬皮病u着丝点型多见于CREST综合征ANA检测方法u间接免疫荧光法u印迹法uELISA法 抗核抗体谱ANAs） 定义：以细胞核内物质为抗原的抗体定义：以细胞核内物质为抗原的抗体 抗抗DNA抗体抗体抗抗ss-DNA 抗抗ds-DNA 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体H1，H2A，H2B，H3，H4 抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体抗抗ENA抗体抗体 抗着丝点抗体抗着丝点抗体 抗核仁抗体抗核仁抗

12、体 其它其它线粒体、溶酶体、高尔基体等线粒体、溶酶体、高尔基体等 抗抗ds-DNA抗体抗体u临床意义临床意义u 对对SLESLE的诊断有较高特异性的诊断有较高特异性u 滴度与滴度与SLESLE活动相关，可作为病情监测及疗活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标效观察指标u 与与SLESLE肾损害有关肾损害有关u检测方法检测方法u 放免法放免法Farr)Farr)敏感，有利于早期预测敏感，有利于早期预测u 检测高亲合力的抗检测高亲合力的抗ds-ds-DNADNAu 间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IF)(IF)特异特异u ELISAELISA可检测低亲合力的抗可检测低亲合力的抗ds-DNAds-DN

13、Au 有助于中枢狼疮的病情监测有助于中枢狼疮的病情监测u 金标免疫斑点法金标免疫斑点法抗抗ENAENA抗体抗体u 抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高u双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指趾端硬化u肾脏保护性抗体？u 抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%u有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断u抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在u 抗SSA 原发性SS：60-75%u SLE: 40-50%u与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、u 血管炎、紫癜相关u 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞u 抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异u其它CTD伴抗SSB者常伴

14、继发性SS抗抗ENAENA抗体抗体u抗Scl-70 硬皮病标记性抗体u抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体u抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内u 临床意义u 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%u 多见于SLE活动期u 与抗ds-DNA抗体的消长相平行u 但不会随病情缓解立即消失u 可持续1-2年后才转阴抗核小体抗体AnuA）u核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用u对SLE的早期诊断有重要意义u比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现u阳性率：50%90%u特异性98%(三)皮肌炎/多发性肌炎PM/DM）u免疫学检查免

15、疫学检查uANAuENA抗抗Jo-1阳性阳性u其它检查其它检查肌酶谱肌酶谱u肌酸磷酸激酶肌酸磷酸激酶CPK）: MM-心肌和骨心肌和骨骼肌骼肌u MB-心肌心肌u BB-平滑肌和脑内平滑肌和脑内u乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶LDH）u谷草转氨酶谷草转氨酶AST）u谷丙转氨酶谷丙转氨酶ALT）u碱性磷酸酶碱性磷酸酶ALP）(四)干燥综合征SS）uANA阳性率40%70%uENA抗SSA抗体阳性率70%96%u 抗SSB抗体阳性率50%87%u抗-Fordrin对于pSS或sSS的诊断有一 u 定意义，但特异性和敏感性并不理想。uRF阳性率75%100%u高球蛋白血症uWBC下降(五)系统性硬化病pSS）

16、uANA阳性率阳性率50%55%uENA抗抗Scl-70阳性率阳性率15%40%u抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)阳性阳性(六)混合性结缔组织病MCTD）uANA阳性uENA抗RNP高滴度阳性（七血管炎（七血管炎 抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA）荧光图谱分型荧光图谱分型主要抗原成分主要抗原成分胞浆型胞浆型cANCA核周型核周型pANCA蛋白酶蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）非典型型（非典型型（cANCA）不清不清ANCA的临床意义uc-ANCA和PR3-ANCAu 对韦格纳肉芽肿有高度特异性95%），敏感性80%u 与病情活动性相关u 常作为判断药物疗

17、效和病情复发的指标up-ANCA和MPO-ANCAu 不如c-ANCA具有诊断特异性u 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关u 主要与显微镜下多血管炎 u 坏死性新月体肾小球肾炎u 变应性肉芽肿性血管炎 相关（八抗磷脂抗体综合征APS）u是一种非炎症性自身免疫病，临床上以动/静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体u血清学检查u抗心磷脂抗体（ ACA ）IgG、IgM、IgAELISA）u抗2糖蛋白1抗体抗2-GP1)u狼疮抗凝物LA）凝血酶原时间PT）u 激活的部分凝血活酶时间APTT）u 白陶土凝集时间KCT）u 蛇毒试验RVVT） 抗磷脂抗体u抗2-

18、GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更具有特异性，是导致APS的主要抗体u抗2GP1抗体只出现于自身免疫性疾病, 而ACA也可出现于一些感染性疾病, 如梅毒、AIDS、肝炎、结核等 （九自身免疫性肝病抗核抗体ANA）抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗平滑肌抗体ASMA）抗肝肾微粒体抗体抗LKM抗体）抗肝-胰抗体(抗LP抗体)抗可溶性肝细胞抗体抗SLA）抗线粒体抗体AMA）u自身免疫性肝炎AIH）u ANAu 抗平滑肌抗体SMA）u 抗肝肾微粒体抗体u原发性胆汁性肝硬化PBC）u 抗线粒体抗体AMA）M2u原发性硬化性胆管炎u ANCA阳性自身免疫性肝病自身免疫性肝病风湿病的实验室诊断u自身抗体特异性u非特异的免疫相关指标u一般的实验室检查项目u血常规u尿常规u肝功能u肾功能等本卷须知u选择做哪些检查项目时要重点突出u 防止“大撒网”u解释实验结果时应考虑以下几个问题u实验方法本身的敏感性、特异性、u 可靠性及实验室之间的差异性u结合临床u应把与之相关的一组实验结果放在一起考虑全国自身抗体检测质量控制总结全国自身抗体检测质量控制总结 u由中华医学会风湿病分会计划 u参与质控的医院和检测的项目逐年增多，多为三甲医院 自身抗体的检测对于风湿性疾病的诊断、病情评估、治疗和预后都及其重要。但影响其检