半夏外用的抗炎镇痛作用

1、瘤发生和生长中起着重要作用。许多恶性肿瘤是因其细胞在凋亡过程严重受阻,使肿瘤细胞快速恶性增生,这种增殖与死亡的平衡失调,是由细胞凋亡的调节紊乱引起的。本实验结果提示,TCS 能诱导胃癌细胞LoVo 凋亡,并与TCS 剂量成正相关。有研究提示5:TCS 具有核酸内切酶功能,能够切割破坏细胞DNA 超螺旋结构,导致细胞损伤,但对肿瘤细胞的DNA 的作用未见报道。TCS 诱导肿瘤细胞凋亡,是通过核酸内切酶功能直接介导,还是通过膜受体的介导;是与TCS 诱导的凋亡与核酸体失活,所导致的细胞坏死相关,还是细胞凋亡相关的基因和信号分子在TCS 诱导凋亡过程中的作用,这些问题还需要进一步探索。TCS 是传统

2、中药天花粉的主要成分,其在对瘤细胞和癌细胞诱导凋亡与核酸体失活过程中,正常造血细胞和组织细胞几乎无损伤作用67,这是TCS 区别其它抗肿瘤药物的明显优势。TCS 能够诱导胃癌细胞LoVo 凋亡,有直接抗肿瘤的作用,其与化疗药物相比,其优点显著,临床上可望成为治疗胃癌的新手段。本研究对TCS 治疗胃癌机制的阐明,有助于开发TCS 的应用范围,为胃癌治疗提供一种新途径。参考文献:1Shaw PC ,Chan WL ,Yeung HW ,Ng TBMini review trtchosan-thinum protein with multiple pharmacological properties

3、 J Life Sci ,1994,55(4:2532622Wong YF ,Wong WSF ,Chen XGEvaluation of trtchosanthinumagainstxeno grafts of human horiocarcinoma cells J Med Sci Res ,1990,18(1:95963Artin SJ ,Lennon SV ,Bonham AMInduction of apoptosis (pro-grammed cell death in human leukemicHL 60cells by inhibitionof RNA or protein

4、synthesis J J Immunol ,1990,145(6:185918674Martin SJ ,Lennon SV ,Bonham AMInduction of apoptosis (pro-grammed cell death In human leuke micHL 60cells by inhibi-tion of RNA or protein synthesis J J Im2munol ,1990,145(6:185918675Darzynkiewicz Z ,Bruno S ,Del Bino G ,Gorczyca W ,Hotz MA ,Lassota P ,Tra

5、ganos FFeatures of apoptotic cells measured by flow cytometry J Cytometry ,1992,13(8:7958086Li MX ,Yeung HW ,Pan LP ,Chan SITrichosanthin ,a potentHIV 1inhibitor ,can cleave supercoiled DNA in vitro J Nucle-ic Acids Res ,1991,19(22:63097Vaux DL ,Strasser AThe molecular biology of apoptosis J ProcNat

6、l Acad Sci USA ,1996,93(6:22392244(编辑:孙铮收稿日期:20110608基金项目:“十一五”国家科技支撑计划项目(编号:2008BAI53B09作者简介:史晶晶(1984,女,河南开封人,硕士学位,助教。通讯作者:时博,E mail :shiboshibo2003yahoocomcn 半夏外用的抗炎镇痛作用史晶晶,苗明三,时博(河南中医学院,河南郑州450008摘要:目的:通过对半夏的外用实验研究,总结规范出其外用功能,同时揭示中药外用的特点及可能的机理,进而丰富中药外用理论,指导中药临床外用。方法:根据半夏的临床外用特点设计相应的外用药理实验,主要观察半夏酒

7、糊外用对小鼠耳廓二甲苯致肿胀的影响、对热板法致小鼠疼痛的影响、对甲醛致小鼠疼痛模型的影响、对大鼠蛋清性足跖肿胀的影响。结果:半夏酒糊能够显著显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀和二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,显著提高小鼠痛阈,明显延长甲醛法致小鼠足跖疼痛的潜伏期,显著减少5min 和10min 内小鼠舔咬右后足跖的次数。结论:半夏外用有活血化瘀的功能,可以改善由于软组织损伤、瘀斑、跌打瘀肿、外伤导致的肿胀疼痛。关键词:半夏;抗炎;镇痛;活血化瘀;大鼠;小鼠中图分类号:R2855文献标识码:A文章编号:10035028(201109099103中药外用治疗疾病,方法众多、副作用小、疗效突出,是祖国医学的重要组成

8、部分,也是最具特色的中医疗法之一。随着中药临床外用的发展,中药外用功能也应随着丰富和发展,但目前中药缺少相应的外用功能的表述和理论指导,也较少开展相应的研究,以至于现在中药外用功能的发展明显落后于中药的临床外用,因此我们选定几位药物对其外用功能进行实验验证,以期对其外用治疗功能进行增补。近年来的研究报道显示,半夏在治疗软组织损伤、瘀斑、跌打瘀肿、外伤等症上有公认临床外用疗效,但却未在药典上有相应外用功能的体现,因此我们选择抗炎镇痛实验初步验证半夏外用治疗软组织损伤、瘀斑、跌打瘀肿、外伤等的功能。1实验材料11动物清洁级昆明种小鼠,体质量1821g ,雌雄各半或雌性,由河北省实验动物中心提供,合

9、格证号909152;清洁级SD 大鼠,体质量180200g ,雄性,由河北省实验动物中心提供,合格证号911134。12仪器大鼠足跖测定仪,成都泰盛科技有限公司生产,PV 200;热板测定仪,山东医学科学设备站生产,YLS 6A 型;FA (N /JA (N 系列电子天平,上海民桥精密仪器有限公司。·199·13药品及试剂半夏,购自安徽省亳州市药材交易公司,经河南中医学院生药教研室陈随清老师鉴定为蓼天南星科植物半夏Pinellia ternata(ThunbBreit的干燥块茎;半夏粉的制备:将半夏干燥块茎除去杂质打粉后过120目筛;半夏糊的制备:半夏糊小剂量(015g/m

10、L,取15g半夏粉溶于100mL白酒,半夏糊大剂量(025g/mL,取25g半夏粉溶于100mL白酒;田七跌打风湿膏,广州白云山制药股份有限公司,批号N1001;红星二锅头,北京红星股份有限公司,批号20090405;甲醛,烟台市双双化工有限公司,批号20090326;二甲苯,天津科密欧化学试剂开发中心,批号2008071028;氯化钠注射液,郑州永和制药厂有限公司,批号09073105。2实验方法与结果21半夏酒糊对各组小鼠耳廓二甲苯致肿胀的影响取健康小鼠50只,雄性,1821g。随机分成5组,每组10只。分别为半夏大剂量组、半夏小剂量组、白酒组、阳性组、模型对照组,分别给小鼠右耳涂药,半夏

11、大、小剂量组均涂抹相应药物(大剂量025g/mL,厚度2mm,相当于084g/耳;小剂量为015g/mL,厚度2mm,相当于048g/耳;阳性组给以田七跌打风湿膏(厚度2mm,相当于03g/耳;白酒组给以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相当于048g/耳;模型对照组涂抹生理盐水,均正反两面用药;10min涂抹1次,涂药1h,用生理盐水擦静右耳后再用干药棉擦干。10min后涂二甲苯004mL/耳,于致炎后10min、2h各组小鼠右耳再次分别涂以相应量药物。于涂二甲苯4h后处死小鼠,处死前取用生理盐水擦静右耳后再用干药棉擦干。剪下双耳,对齐,用8mm打孔器取下圆型耳片,迅速分析天平称量,双耳重

12、量之差为肿胀度12,肿胀度=右耳重左耳重。结果见表1。表1半夏酒糊对各组小鼠耳廓二甲苯致肿胀的影响(mg,珋xs组别动物数(只肿胀度(两耳重量差模型对照组109807阳性组104105*白酒组108710*半夏大剂量组104305*半夏小剂量组105805*注:与模型对照组比较,*P005,*P001。从表1可以看出,与模型对照组比较,半夏大剂量组、半夏小剂量组和阳性组两耳片重量差均显著降低(P001,白酒组两耳片重量差稍降低(P005。22半夏酒糊对各组小鼠热板法致疼痛阈值的影响取健康小鼠60只,雌性,1821g。实验前先在热板仪上(5605筛选小鼠正常痛阈,以小鼠舔(咬后足趾为疼痛出现指示

13、,凡痛阈大于30s或小于3s,均弃不用,选痛阈合格小鼠50只,按小鼠痛阈值大小随机分为5组,半夏大剂量组、半夏小剂量组、白酒组、阳性组、模型对照组。分别给以相应药物。半夏大剂量组、半夏小剂量组均涂抹相应药物(大剂量025g/mL,厚度2mm,相当于056g/足;小剂量为015g/mL,厚度2mm,相当于032g/足;阳性组给以田七跌打风湿膏(厚度2mm,相当于02g/足;白酒组给以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相当于056g/足;模型对照组以药棉蘸生理盐水湿敷,给药后均以保鲜膜覆盖胶布固定30min后,以生理盐水洗净药物,再用干药棉擦干后足,于给药后30min、60min、90min在热

14、板仪中再次测定小鼠痛阈34。结果见表2。如小鼠在热板上停留60s后仍无痛反应,按60s计算。表2半夏酒糊对各组小鼠热板法致疼痛阈值的影响(s,珋xs组别动物数(只给药前30min60min90min 模型对照组1012115130111331013809阳性组101271124824*25021*23218*白酒组101261314111*14310*14711*半夏大剂量组101200924137*24235*22631*半夏小剂量组101221622629*23029*22049*注:与模型对照组比较,*P005,*P001。从表2可以看出,与模型对照组比较,半夏大剂量组、半夏小剂量组和阳

15、性组可显著提高小鼠痛阈(P001,白酒组明显提高小鼠痛阈(P005。23半夏酒糊对各组小鼠甲醛法致痛作用的影响取健康小鼠50只,雌雄各半,1821g。随机分成半夏大剂量组、半夏小剂量组、阳性组、白酒组、模型对照组,每组10只。分别给于小鼠右后足相应药物,半夏大剂量组、半夏小剂量组均涂抹相应药物(大剂量025g/mL,厚度2mm,相当于056g/足;小剂量为015g/mL,厚度2mm,相当于032g/足;阳性组给以田七跌打风湿膏(厚度2mm,相当于02g/足;白酒组给以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相当于056g/足;模型对照组以药棉蘸生理盐水湿敷,给药后均以保鲜膜覆盖胶布固定30min后

16、,以生理盐水洗净药物,再用干药棉擦干,立即给小鼠右后足背皮下注射新配制的25%甲醛溶液30L5。实验指标:立即记录每只小鼠首次舔咬右后足的潜伏期及5min内舔咬右后足的次数和10min内舔咬右后足的次数。结果见表3。表3半夏酒糊对各组小鼠甲醛法致痛作用的影响(珋xs组别动物数(只首次舔咬足跖潜伏期(S5min内舔咬足跖数(次10min内舔咬足跖数(次模型对照组1071242572728030阳性组1011131*13133*14436*白酒组1078232472825927半夏大剂量组109523*12930*14327*半夏小剂量组10892519836*21335*注:与模型对照组比较,*

17、P005,*P001。从表3可以看出,与模型对照组比较,大剂量半夏可明显延长甲醛法致小鼠足跖疼痛的潜伏期(P005,阳性组可显著延长甲醛法致小鼠足跖疼痛的潜伏期(P001;小剂量半夏对甲醛致小鼠足跖疼痛的潜伏期无明显影响(P005。大、小剂量半夏,阳性组均可显著减少5min和10min内小鼠舔咬右后足跖的次数(P001,白酒组对甲醛致小鼠足跖疼痛无明显影响(P005。·299·第31卷第9期史晶晶,等:半夏外用的抗炎镇痛作用Vol31No924半夏酒糊对各组大鼠蛋清性足跖肿胀的影响取健康大鼠40只,雄性,180200g。随机分成半夏大剂量组、半夏小剂量组、白酒组、阳性组、模

18、型对照组,每组8只。先用足跖测定仪测大鼠正常左右后足跖体积,并调节在大鼠踝关节的划线位置,使大鼠正常足跖体积在1mL左右。半夏大、小剂量组均涂抹相应药物(大剂量025g/mL,厚度2mm,相当于14g/足;小剂量为015g/mL,厚度2mm,相当于08g/足;阳性组给以田七跌打风湿膏(厚度2mm,相当于05g/足;白酒组给以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相当于14g/足;模型对照组以药棉蘸生理盐水湿敷,给药后均以保鲜膜覆盖胶布固定30min后,以生理盐水洗净药物,再用干药棉擦干,于每鼠左右后足跖均皮下各注射新配制的10%新鲜鸡蛋清液01mL/足6。实验指标:分别于给蛋清后30min、60

19、min、90min、120min、150min用足跖测定仪再次测大鼠左右后足跖体积,并计算足跖肿胀率。结果见表4。表4半夏酒糊对各组大鼠蛋清性足跖肿胀的影响(珋xs组别动物数(只正常体积(mL给蛋清后不同时间足跖肿胀体积(mL(肿胀率30min60min90min120min150min模型对照组8097004171009(077008167008(072010160008(066009157008(06100915009(055010阳性组8096004160009*(068011157009*(064012151009*(059011148009*(055011141009*(048010

20、白酒组8097004170009(076012165008(071010160009(066010156008(061009152008(057009半夏大剂量组8096004159005*(066011155005*(061010151006*(057010147005*(053009142006*(048010半夏小剂量组8097006162005*(069012159004*(065011155004*(061010152004*(057011146003*(052010注:与模型对照组比较,*P005,*P001。从表4可以看出,给药前各组大鼠正常足跖体积之间差异不明显(P005,说明

21、分组均匀;与模型对照组比较,半夏大剂量组在给药后30150min均可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀(P001,半夏小剂量组在给药后30min、60min 和150min可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀(P001,在给药后90min和120min可明显抑制大鼠蛋清性足跖肿胀(P005,白酒组对抑制大鼠蛋清性足跖肿胀无明显作用(P005。3讨论2005版药典记载:半夏辛,温,有毒。归脾、胃、肺经。为天南星科植物半夏的干燥叶块茎,功能燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结7。且文献上有记载该药临床外用功能:取生半夏研极细末,密贮,外用治外伤出血、跌打瘀肿、鸡眼胼胝、瘢痕疙瘩,其止血、生肌、祛瘀、消瘢之效卓然。肘后方中

22、记载“治疗痈疽、乳痈肿毒,用半夏末、鸡子白调涂;或半夏用水磨敷,有散结、消肿、止痛之效”。外科小品中记载“治外伤性出血:生半夏、乌贼骨等分,研细末,撒患处。”8半夏临床外用对治疗软组织损伤、瘀斑、跌打瘀肿、外伤有较好疗效,主要的药理作用是抗炎、镇痛。药理实验的设计,原则上以建立中药外用所治疾病的动物模型为主。据此,我们选做了几种抗炎镇痛实验:半夏对二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型的影响、半夏对热板法致小鼠疼痛模型的影响、半夏对大鼠蛋清性足跖肿胀模型的影响、半夏对甲醛致小鼠疼痛模型的影响。实验结果显示,在半夏外用药理研究中,半夏能显著减轻二甲苯导致耳廓肿胀;显著提高小鼠痛阈;显著延长甲醛法致小鼠足跖疼痛的潜伏期,显著减少5min和10min内小鼠舔咬右后足跖的次数;在给药后30150min均可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀。说明半夏可以改善由于软组织损伤、瘀斑、跌打瘀肿、外伤导致的肿胀疼痛。应