飞行时间质谱仪使用说明_图文

1、 安捷伦液相色谱- G6200系列飞行时间质谱联用仪 现场培训手册 安捷伦科技(中国有限公司,20132013年 1月Rev. TOF-201301声明本手册内容如有改变,恕不另行通知。安捷伦科技公司对本材料,及由此引起的任何商务和特种用途不承担责任。安捷伦科技公司对本手册中可能有的错误或与装置、性能及材料使用有关内容而带来的意外伤害和问题不负任何责任。如果安捷伦与用户对本书中的警告术语有不同的书面协议,这些术语与本书中的警告术语冲突,则以协议中的警告术语为准。联系方式售后服务中心免费电话:800 820 3278手机拨打:400 820 3278 (需支付本地电话费免费传真:800 820

2、1182其他常用网址软件状态公告和补丁下载:技术支持:Spectrometry/Pages/default.aspx版本 (2目录 (31 基本原理 (61.1TOF的基本原理 (61.2离子源技术和原理 (71.3不同离子源的比较 (82 硬件概览 (92.1典型配置图 (92.2仪器序列号位置 (92.3系统结构图示意图 (103 开机和关机 (113.1开机步骤 (112关机步骤 (144 软件概览 (154.1桌面常用软件图标介绍 (154.3G1367/G4226自动进样器的快捷控制功能 (184.4二元泵的快捷控制功能 (204.5柱温箱的快捷控制功能 (214.6DAD的快捷控制

3、功能 (214.7VWD的快捷控制功能 (224.8TOF的快捷控制功能 (225 调谐和校正 (235.1配制调谐液 (235.2自动调谐介绍和比较 (245.3调谐界面功能概述 (245.4I NITIAL T UNE (265.5S TANDARD T UNE (275.6Q UICK T UNE (275.7C HECK T UNE (275.8C ALIBRATION (285.9保存调谐结果,返回采集界面 (296 方法编辑 (306.1P ROPERTIES (306.2自动进样器的参数设置 (306.3泵的参数设置 (326.5紫外检测器的参数设置 (346.6TOF采集参数的

4、设定 (366.7保存方法 (407 单针样品和工作列表的编辑和运行 (417.1运行单针样品 (417.2编辑和运行W ORKLIST (428 定性分析 (458.1定性软件的主要功能区和常用快捷键 (458.2放大或缩小谱图 (468.3提取色谱图 (468.4提取质谱图 (478.5提取和扣除质谱背景 (488.6改变质谱图离子显示的阈值 (498.7轮廓图转化为棒状图 (498.8提取紫外色谱图和光谱图 (498.9W ALK C HROMATOGRAM和S PECTRUM P REVIEW (508.10计算信噪比 (518.11积分 (518.12打印分析报告 (528.13计算

5、分子式 (538.14F ORMULA C ALCULATOR (548.15M ASS C ALCULATOR (549 仪器的日常维护 (559.1MS维护周期表 (559.2清洗维护雾化器组件(N EBULIZER (559.3每天清洗电喷雾雾化室 (559.4每周清洗电喷雾雾化室 (579.5卸下电喷雾雾化器 (589.6调整电喷雾雾化器针位置 (599.7机械泵的日常维护 (609.8检查废液桶 (609.9氮气发生器的维护 (619.10更换液氮时的注意事项 (61附录 (62附录1.1 电喷雾源 (ESI (62附录1.2带有Agilent喷射流技术的ESI源(Jet Strea

6、m (62附录1.3 大气压化学电离源(APCI (62附录2不同调谐液离子列表 (63附录3毛细管的维护 (64附录3.1 导电毛细管的清洗步骤,备件号G1960-80060 (64附录3.2 绝缘透明毛细管的清洗步骤,备件号59987-20040 (65附录4更换质谱切换阀内的滤芯 (66附录51100/1200/1260系列液相色谱仪常用消耗品 (67附录61290系列液相色谱仪常用消耗品 (68附录7质谱常用消耗品 (69附录8仪器配置I NSTRUMENT C ONFIGURATION (70附录9推荐学习资料 (73书籍 (73期刊 (73网站 (731 基本原理1.1 TOF的基

7、本原理为离子的飞行线速度,离子的质荷比越大,飞行速度就越慢。除以飞行时间是由仪器的飞行管所决定的常数。1.2 离子源技术和原理安捷伦专利的直角喷雾离子源设计,雾化器与离子传输毛细管轴呈90度角,这样大大减少了未离子化的中性溶剂液滴进入到质谱中,从而降低了噪音,并保证毛细管和离子光路更干净,更抗污染。固定位置的雾化器在分析方法要求改变流速或流动相组成时,无需对雾化器位置进行繁复的调整,大大提高了分析效率。安捷伦的离子源包括高流量的高温氮气反吹干燥气系统,可以加速喷雾的溶剂挥发,减少溶剂簇和流动相附加离子,提高了谱图的质量、灵敏度和重现性。在仪器不进样分析(处于Standby状态时,仍然维持一定的

8、干燥气温度和流量,可以避免用户实验室的空气被吸入质谱的真空系统,极大的减少了污染,降低了维护的周期。雾化器的喷雾针被带高电压的弧形电极环绕,带有被测物质离子的流动相,在雾化针尖端发生雾化。在弧形电极和毛细管间的电压不同,产生一个电场,使液滴表面富集与电场极性相反的离子,而与电场极性相同的离子则聚集在液滴内部,形成带电液滴细的喷雾。液滴在电场的作用下,飞向毛细管。加热的干燥氮气反向流动,带走液滴中的中性溶剂分子,从而收缩液滴。当电荷排斥的静电力超过液滴表面张力,会引起库仑爆炸,带电液滴分裂成更多更小的带电液滴。这个过程不断重复,直到待分析物离子最终变成气态分子离子进入毛细管。 ESI是目前应用最

9、多的电离方式,具有极为广泛的应用领域。ESI属于浓度敏感型离子化技术,样品浓度越高,灵敏度越高。适合分析中等极性到极性的小分子;另外,由于其可以产生多电荷离子的特性和相对较低的离子化温度,因而也适合分析生物大分子,比如蛋白质和多肽的分析。APCI的电离是在常压下的气态化学电离(CI 过程, 是ESI电离的一种有效补充。溶剂或反应气在电晕针的作用下先带电,再把电荷转移给化合物形成离子。APCI一般只产生单电荷离子,且需要在高温的离子化环境下操作。它属于质量-流量敏感型离子化技术,样品分子量越大,性能越高;在相对较高的流速下灵敏度更高。适合分析中等极性到弱极性的化合物。 带有安捷伦喷射流技术的ES

10、I 源(简称Jet Stream 与普通的ESI 源的电离原理相同,提供和普通ESI 源相同的离子特征。另外,喷射流技术增加了加热的鞘流气,并可以在喷嘴处施加一个喷嘴电压。更高的温度可以提高流动相的蒸发率,更有利于气溶胶的形成和液滴的蒸发,减少了喷雾中大的液滴。由于使用了热梯度聚焦技术,同轴的鞘流气有助于减少离子扩散,将更多的离子引入到MS 中。减少中性溶剂束进入MS ,提高了灵敏度,降低了噪音。 1.3不同离子源的比较 2 硬件概览2.1典型配置图整套仪器包括液相色谱和质谱主机,以及与其配套的计算机和打印机。计算机、液相色谱和质谱之间通过网络协议通讯,并通过一个网络交换机(LAN Switc

11、h连接在一起。 2.2仪器序列号位置对于HPLC每个模块的型号和序列号在该模块的右下方。对于TOF,仪器的型号和序列号标示仪器的右下角。如下图所示。所有安捷伦的产品,Gxxxx代表的是该产品的型号,USxxxxxxxx, DExxxxxxxx,SGxxxxxxxx或者JPxxxxxxxx代表的是仪器的序列号。 注意:在您打电话到Agilent时,请事先务必记下您仪器的型号和序列号。这对于我们在系统里及时给您提供服务非常重要!比如上图所示的仪器,您的液相色谱泵有故障,请把泵的型号G1312B, 序列号DE63060245提供给我们;而如果您的质谱有故障,则请把其型号G6230A和序列号US849

12、20328提供给我们。2.3系统结构图示意图 离子源:将分析物中的中性化合物离子化,并将产生的离子在电场的作用下进入离子传输毛细管。离子传输毛细管:离子导入通道,将离子源产生的离子传输进入质谱。同时,隔离外部的常压与质谱内部的真空系统。离子光学组件:包括Skimmer 1,八极杆以及Lens 1和Lens 2。进一步除去溶剂和中性分子,高效的离子传输组件,并聚焦随机运动的离子进入四极杆。离子束整形器:将随机运动的离子压缩为一个薄层,进入飞行管。减少离子在纵向的扩散,提高分辨率。脉冲发生器:产生高频率的瞬间电压,使离子纵向加速进入飞行管。飞行管:离子在飞行管内纵向飞行,不同离子的质荷比通过飞行时

13、间的不同而区分。检测器:包括微通路板、闪烁器和光电倍增器。高增益,寿命长,线性范围宽。TOF的真空系统由一个前级真空泵(Edwards E2M28或者Agilent的MS40+和一个分子涡轮泵组成。前级真空一般在1.8-2.5 Torr之间。高真空在310-7 8.510-8 Torr之间。涡轮泵的转速在97 103%之间。3 开机和关机3.1 开机步骤如果使用液氮罐,打开液氮罐自增压阀门,调节液氮罐分压表的输出压力为约0.7 MPa (100psi,并确认前级泵的镇气阀处于关闭状态。如果使用氮气发生器,打开氮气发生器的电源,待压力输出稳定后,调节输出压力为约0.7 MPa (100psi。注

14、意:不同的氮气发生器,其操作可能不同。请咨询氮气发生器的供应商,以正确操作氮气发生器。安捷伦不对因氮气发生器的原因导致的仪器损坏和故障负任何责任。如果使用氮气发生器,请务必依照相应厂家的建议,定期维护,更换过滤芯等。防止氮气污染质谱,影响仪器的性能。氮气发生器的维护和维修由相应氮气发生器的厂家来进行。Agilent不负责其维修。如果使用的是Edwards机械油泵,请确认前级泵的镇气阀处于关闭状态。如果使用的是Agilent 的MS40+机械油泵,不需要此步骤。1. 打开计算机,网络交换机(LAN Switch电源。2. 打开液相各个模块电源。3. 打开质谱前面左下角的电源开关,这时可以听到质谱

15、里面溶剂切换阀切换的声音。同时机械泵开始工作,仪器开始自检。等待大约两分钟,听到第二声溶剂阀切换的声音(表明质谱自检完成后,表示仪器自检完成,可以联机。4. 在桌面上双击图标,进入仪器诊断软件界面,在菜单上选择Connection Connect,自动会 5. 进入诊断软件后,界面如下。请切换到Parameters页面观察真空状态。TOF高真空前级真空TOF一接通电源,前级真空规就开始工作,监视前级真空值。但只有当涡轮泵的转速大于95%之后, TOF部分的高真空规才会开始工作,读取真空值。观察前级真空(典型值2.5Torr和TOF高真空(需要小于1.510-6Torr才可以正常工作情况。注意:

16、除非在Agilent的工程师指导下,切勿自行在诊断软件更改仪器的参数。这个软件只提供特殊的诊断用途,并非用于常规仪器操作。正常的操作需要在MassHunter软件下进行。在高真空没有达到1.510-6Torr之前,不要打开MassHunter工作站。否则仪器的真空度不够,无法达到理想的工作状态。6. 在TOF部分高真空1.510-6Torr之后,切换到Instrument ON/OFF标签栏,点击Condition HV按钮进行高压的Condition。请根据不同的情况选择不同的模式进行HV Condition。0.6 Hour Cycle (Quick Vent :适用于TOF短暂关机后的C

17、ondition,比如更换泵油,短时间停电等。2 Hour Cycle (Optics Service :适用于对TOF关机,进行简单维护后的Condition,比如清洗毛细管等。8 Hour Cycle (TOF Service :适用于对TOF关机,进行比较长时间的维修后的Condtion,比如仪器出现故障后Agilent工程师上门维修后再次开机。13 Hour Cycle (Installation :适用于TOF安装时第一次开机后的Condtion;或者是比如长假关机后再次开机。如果您的TOF高真空在您工作时间内未达到1.510-6Torr,您也可以选择合适的Condition模式后,

18、在System Turn-On下点击Start(不必选择Flush CDS,则仪器会自动等待TOF高真空达到要求后进行相应模式的HV Condition。注意:只有在关机(放掉真空,关闭仪器电源后重新开机时,才需要进行HV Condition;如果您不能确定应该选用哪一种HV Condition模式,请致电Agilent咨询。 在Condition过程中,随时可以观察Condition的进程。结束后,会显示Condition Completed。 7. 当Condition HV结束后,在File菜单上选择Connection Disconnect,然后关闭 TOF诊断软件。8. 在计算机桌面

19、上双击MassHunter采集软件图标,进入MassHunter工作站。2关机步骤关机前务必确认气镇阀(本页下方图所示处于关闭状态(顺时针拧紧,否则前级泵的泵油可能因此回流到质谱的真空腔内,损坏污染仪器。而在在日常操作时,必须每周逆时针拧开气镇阀到底,维持约20-30min ,把油气分离器内多余的泵油放回泵内,然后再顺时针拧紧,关闭气镇阀。并检查确认泵油液位在标识的最高和最低刻度之间。气镇阀的位置 如果使用的是Agilent 的MS40+机械油泵,Vent 前不必确认气镇阀。可以直接开始放空。 打开诊断软件,连接仪器。然后切换到Instrument ON/Off 界面,点击Vent ,软件会提

20、示是否Vent,点击Yes 按钮,系统开始放空。 此过程需要大约10-15min 。在Vent 过程中,可以在Parameter 页面观察涡轮泵的转速的变化。Vent 完成后,机械泵会停止工作,涡轮泵的转速都会下降到接近零。前级真空到大气压760 Torr 。仪器Vent 也可以在MassHunter 采集软件内点击TOF 的图标,选择Vent 来进行。 关闭TOF 及LC 各模块的电源。关闭电脑。如果使用液氮罐,同时关闭自增压阀门。 注意:如果长时间关机,拔掉质谱的电源线。否则仪器的某些电路仍然带电。Vent 过程中,在Parameter 页面观察涡轮泵的转速的变化4 软件概览4.1 桌面常

21、用软件图标介绍在仪器安装完成后,工程师一般都会将一些与MassHunter 工作站相关的图标放置于电脑桌面上,便于用户使用。 TOF 诊断软件定量分析软件 化合物库软件数据采集软件定性分析软件HPLC 诊断软件 4.2 软件功能区、状态区及快捷方式介绍采集软件从上到下分为三个不同的功能区,依次是仪器图标及状态区、离子流图和质谱图实时显示区、以及方法,工作列表和样品信息混合显示区。 在采集软件的最顶端有一些快捷按钮,介绍如下: 在锁定状态,如果有重名的数据文件,无法覆盖,必须使用不同的数据文件名。在非锁定状态,如果有重名的数据文件,可以选择覆盖原来的文件。点击Logbook可以查看详细的仪器运行

22、信息和出错信息。当仪器出错时请首先参考Logbook的相关信息。最顶端的是最近的信息。改变了各个功能区的大小,或者改变了窗口布局后,如果切换到其他界面或者关闭软件时,软件会提示是否要保存该软件布局(Layout 。这允许不同的用户依据自己的爱好调整软件的界面布局。 仪器 图标及状态区离子流图和质谱图实时显示区方法,工作列表和样品信息显示区方法,工作列表和样品信息在同一个区域显示。通过点击相应的按钮切换页面软件布局格式选择软件功能区切换在Actuals 处点击鼠标右键,选择setup。在弹出的Actuals Setup对话框,选择前级真空、高真空、干燥气流量和压力以及涡轮泵转速、毛细管电流等重要

23、参数到实时状态显示窗口。对于重要参数还可以选中该参数,然后点击Background Color按钮和Text按钮设定背景及字体颜色等。 在软件中,仪器模块的不同的颜色代表了仪器的不同状态:绿色:Ready,表示仪器准备就绪,处于空闲状态,可以随时进行样品分析。蓝色:表示仪器正在运行样品。紫色:表示仪器处于等待运行的状态,或预运行状态。黄色:Not Ready,表示仪器的状态还没准备好或者仪器条件还没达到设定值。灰色:表示仪器处于Standby By或Shut Down状态。红色:表示仪器出错。TOF图标下部的颜色表示在样品运行过程中参比离子的状态。TOF运行过程中的颜色状态绿色:所有的参比离子

24、均找到了黄色:找到了部分参比离子红色:所有的参比离子均未找到灰色:没有使用参比A瓶装的是参比液。当A瓶是灰色时表示参比没有打开,而是亮起后表示参比打开。B瓶装的是调谐液。当B瓶是灰色时表示参比没有打开,而是亮起后表示调谐液打开。指示在每采集一个数据点参比离子的发现状态。指示在每个样品运行时参比离子的发现状态。指示在工作列表运行时参比离子的发现状态。在仪器的各个模块上,单击鼠标右键可以弹出快速控制仪器的菜单。注意:如果您的仪器的相应模块菜单与下图所示有所不同,那么则说明您的某些模块没有此功能或者您的软件版本不支持此功能。4.3 G1367/G4226自动进样器的快捷控制功能在Control 页面

25、,有如下功能。Injector Program :设定程序进样,即手动设定自动进样器一步步做什么,很少用到。 Home Arm :把自动进样器的手臂移动到Home 位置。即自动进样器最右后方的位置。 Reset Sampler :自动进样器重新自检。Wash Needle :自动进样器的进样针移动到洗针位置,洗针液会自动冲洗进样针的外壁。当怀疑进样针比较脏的时候可以使用此功能。Needle Up :自动进样器的进样针抬起。可以做清洗针座或进样针的表面的操作。Switch Valve to Bypass/Main Pass :自动进样器的进样阀切换到Main Pass 或Bypass 的位置。在

26、默认的操作条件下,除了在进样的过程中,自动进样器都是在Main Pass 的流路。这样的流路设计使进样针和针座的内表面一直都在被流动相连续冲洗,最大程度减小了样品的残留和交叉污染。设定找不到样品瓶时如何处理。一般勾选此选项,即仪器运行过程中找不到样品瓶时会继续运行下一个样品。如果不勾选此选择,则仪器运行过程中找不到样品瓶时会自动停止打开或关闭自动进样器内的照明灯。如果分析怕光样品时,应该关闭此照明灯。 关闭洗针用的蠕动泵。或者设定打开冲洗的时间。 一般用于更换洗针用的溶剂的时候,或者洗针溶剂管路中有气泡需要冲洗时。每个模块左上角有一开关按钮,可以单独控制该模块该开关可以控制同时开/关所有的LC

27、 模块和TOF Main Pass BypassSwitch off/on Tray Illumination :打开或关闭自动进样器内的照明灯。对于怕光的样品,应该关闭。 Edit Wellplate Type :定义和编辑微孔板的类型。只有支持Wellplate 的G1367/G4226型号的自动进样器才有此功能。使用此功能可以自己定义和编辑微孔板的类型。很少会用到。Assign Wellplates :对于G1367/G4226型号的自动进样器,需要正确设置样品盘 (Plate 的类型。G1313和G1329型标准进样器的Tray 不需要设置,软件会自动识别。下图是G1367/G4226

28、型号的自动进样器的Tray 示意图。其中最右侧的是位置1-10;左侧可以放置前后两个样品盘。仪器自带的是两个54位的样品盘,用于放置Agilent 的1.5 mL 标准进样瓶。除此之外还支持多种微孔板,如96孔板,384孔板等。必须使用列表中的微孔板;如果使用非列表中的微孔板,则必须使用Edit Wellplate Type 的功能精确输入其各种尺寸数据,否则可能会损坏进样器。110Plate 2。放在此样品盘上的样品编号为P2-XYPlate 1。放在此样品盘上的样品编号为P1-XYX-字母序号 Y-数字序号如右图标星号的位置,其编号应该为:P2-D5P2:表示是第2个样品盘,即后面的样品盘

29、。D :表示为横排的第4排。 5:表示为竖排的第5列。 用户输入时,可以直接输2D5即可,软件会自动识别为P2-D5Upper Plate 指前面的(即靠近操作者的样品盘。Lower Plate 指后面的样品盘。4.4 二元泵的快捷控制功能Control :可以控制泵的On ,Off ,Standby 功能。另外提供了可以设置在某个预设的时间自动打开运行的功能。对于1290的泵,还可以控制Purge 和Prime 的功能。Switch Pump On/Off: 把泵的状态切换到On 或者Off 。这个功能也可以通过上面的Control 来实现,或者直接点击泵图标的电源按钮。Switch Sol

30、vent Selection Valve A: 只有配备溶剂选择阀的二元泵有此功能。可以快速切换使用的流动相A 。如果当前使用的是A1,则可以快速切换到A2;反之亦然。Switch Solvent Selection Valve B: 只有配备溶剂选择阀的二元泵有此功能。可以快速切换使用的流动相B 。如果当前使用的是B1,则可以快速切换到B2;反之亦然。Bottle Fillings :设定溶剂瓶的容量以及瓶内实际溶剂的量。并设定如何处理溶剂低于设定量的情况。如果不启用“Prevent analysis if level fall below”和“Turn pump off if runnin

31、g out of solvent”,则不需要设置此界面。如果启用的话,必须正确设置溶剂的实际体积。每次添加或改变流动相时,必须打开此界面正确设置各个通道流动相的正确体积。软件会根据流速的设定自动计算溶剂瓶内剩余溶剂的量。不正确设置实际流动相体积时会造成分析意外终止,并会导致泵报错。此时重新设定流动相体积并重新把泵设定到ON 即可解决。各个通道溶剂的实际体积。如果更换或添加,需要手动更改其数值。只有带溶剂选择阀的二元泵才会显示A1, A2, B1, B2。可以设置泵在预设的时间自动打开运行设置泵打开、关闭或待机 只有1290的泵有此功能设定Purge 的流速,时间以及流动相的组成比例其他的泵需要

32、手动开关Purge 阀进行此操作只有1290的泵有此功能Prime 是比Purge 更剧烈的排气泡的方式。当常规的Purge 无法完全排除管路中的气泡时使用各个通道的溶剂瓶的体积容量如果选中此项,则仪器会自动在计算出的溶剂剩余量低于此设定量的时候停止样品分析如果选中此项,则仪器会在计算出的溶剂溶剂剩余量为零时自动关闭泵的运行。Purge On, Prime On (仅适用于1290泵: 用于排掉管路中的气泡,或者更换不同的流动相时使用。一般来说,Purge 用于日常的流动相排气泡,在更换流动相或者每天刚开机的时候使用;Prime 用于比较剧烈的冲洗,如果系统中有明显的气泡,在做Purge 无法

33、除去时建议使用。注意:如果排气不彻底,泵头内残留有微小的气泡,则会导致压力不稳定。如果Prime 和purge 都不能使压力稳定下来,请尝试使用甲醇或者乙腈冲洗系统。水有时因为表面张力大,比较难排气泡。4.5 柱温箱的快捷控制功能Switch Thermostat On/Off :打开或关闭柱温箱的控温功能。 Control :包含柱温箱的一些控制功能。4.6 DAD 的快捷控制功能Control :包含开灯等功能。另外包含一些其他的控制功能。Balancing :对DAD 检测器进行基线调零。Switch UV Lamp on/off :选择打开或关闭紫外灯 (UV Lamp 。手动打开或者

34、关闭柱温箱的控温功能 设置电源开启时是否自动打开柱温箱的控温功能设置预定时间自动打开柱温箱的控温功能设置是否打开柱温箱的漏液检测功能。默认打开。但是如果柱温箱的设定温度低于室温,且环境湿度比较大,建议最好关闭。以防冷凝水的凝结造成误报。控制氘灯的打开或关闭选择使用的氘灯的类型 一般选自动设置在预定的时间自动开灯模拟输出的设置。设置模拟信号的输出范围。只有在使用第三方的软件控制时,或使用积分仪记录信号时才可能用到打开DAD 的电源开关时自动打开氘灯。一般不必选此选项4.7 VWD的快捷控制功能Control: VWD的某些控制和配置选项。Switch On/Off:打开或关闭氘灯。Balanci

35、ng:对检测器进行基线调零。4.8 TOF的快捷控制功能On,Standby:把TOF设置到开或者待机状态。注意:无论是On还是Standby,机械泵和涡轮泵等真空系统都不会关闭。仪器在不运行样品时,请设置到Standby状态。在质谱仪开机的情况下,切不可使用堵住毛细管的办法来省气,否则可能造成机械泵油蒸气进入真空系统,污染和损坏仪器。Calibrant:可以在采集界面打开或关闭调谐液。如果Calibrant前面有的符号,表示调谐液打开;否则表示调谐液关闭。默认是在关闭状态。当样品不出峰怀疑仪器有问题时,可以非常方便的使用此功能来判断质谱是否正常。如果打开调谐液,可以看到调谐液出峰正常,就说明

36、质谱是正常的。LC:可以方便的选择从LC 流出的流动相是进入质谱还是直接流到废液。两种状态下TOF 图标处显示如右图。Vent,Pump Down:Vent指把MS的真空系统卸掉,关闭机械泵和涡轮泵的工作;而Pump Down 直把真空系统开起来,即启动机械泵和涡轮泵。取决于仪器现在的状态,二者只有一个可以使用。Reset Ion Source Type: 重置离子源的类型。打开或关闭氘灯是否打开VWD内置的温控。一般选择打开,检测器更稳定模拟输出的设置。设置模拟信号的输出范围。只有在使用第三方的软件控制时,或使用积分仪记录信号时才可能用到设置在电源开关开启时是否自动开灯一般不需要选择此项设置

37、在预定的时间自动开灯调谐液关闭调谐液打开设置在预定的时间自动开灯紫外灯Tag的识别方式选择,选默认自动模式即可流通池Tag的选择方式默认选择使用5 调谐和校正5.1配制调谐液对于不同的离子源,调谐时需要使用不同浓度的调谐液。对于使用Dual ESI离子源的TOF,在做Initial Tune时不需要稀释调谐液;而对于使用带有安捷伦喷射流技术的Jet Stream ESI源的TOF,在做Initial Tune时,调谐液需要稀释10倍后使用。具体参考下表及注解。 注1:如果离子丰度过高(大约650K且质量准确度差,无法通过校正时,请把调谐液稀释4倍。注2:如果离子丰度过高(大约650K且质量准确

38、度差,无法通过校正时,请把调谐液稀释40倍。稀释调谐液配置方法见下表(以配制100mL调谐液计算。请先加入乙腈和水,混合均匀后再加入调谐液原液及HP-0321,以防止引起溶解性的问题。然后混合均匀后使用。 0.1 mM HP-0321包含在大分子参比标样包(备件号:G1969-85003 中。注意下图, TOF在仪器的左下方有两个瓶子,B瓶放置调谐液,A瓶放置参比离子溶液。右键点击TOF图标,选择On。然后在Context下拉框中选择Tune,切换到Tune界面,如果出现Method Editor和Agilent MS Acquisition Worklist Pane对话框,以及是否保存La

39、yout对话框的话,根据用户是否需要保存当前的方法、工作列表以及界面布局,选择Yes或No。 5.2 自动调谐介绍和比较对于TOF仪器,调谐和校正有下面几种模式:Initial Tune,Standard Tune,Quick Tune,Check Tune,Set Detector Gain以及Calibration。Initial Tune做的项目最多,所需时间最长;Standard TOF Tune次之;Quick Tune最少。Check Tune只是检查仪器状态,不会修改任何参数;Calibration只校正质量轴。Set Detector Gain一般在调谐的过程中会自动进行,一般

40、不需要手动做调节。TOF在Extended Dynamic Range模式下,可以运行所有的调谐和校正,包括Initial Tune、Standard Tune、Quick Tune、Check Tune以及Calibration;而在High Resolution模式下只能运行Calibration、Quick Tune和Check Tune。所以,在需要进行Standard Tune或Initial Tune时,请先把仪器改为Extended Dynamic Range操作模式。注意:建议每天仪器运行之前运行Checktune (或Calibration,来检查和验证仪器的状态是否正常。如

41、仪器工作正常,不需要频繁做其他的调谐。当仪器的分辨率不好时,首先尝试做Quick Tune;如果Quick Tune也不能解决时可以做Standard Tune;在Standard Tune仍然无法通过的时候,可以运行Initial Tune。5.3 调谐界面功能概述在Manual Tune下面,可以手动更改各个参数来调节仪器的响应和状态。一般不需要客户操作。 Initial TuneStandard TuneQuick Tune Calibration在诊断界面,可以查看TOF 仪器的状态,包括TOF 部分的真空度,涡轮泵的转速、功率等参数。并且可以在此Vent 仪器。 仪器状态界面用来选择

42、仪器的操作模式。最常用的是High Resolution (4 GHz, High Res Mode 和Extended Dynamic Range (2 GHz 两种模式。在High Resolution 和Extended Dynamic Range 模式下,TOF 的质荷比有3200和1700两个范围可选。在Minimum Storage Size 模式下,对于G6520B 和6530A/B ,质荷比可以测定到20000;而对于G6538A 、G6540A/B 和G6550A ,质荷比测量范围可以到10000。使用默认设置即可。如下图所示:不要选择“Adjust abundances f

43、or optimal calibration”这一选项。否则负离子调谐很可能会无法通过。更改仪器模式或质量范围后,必须点击Apply 按钮才会应用到仪器上不要选择此选项。否则负离子调谐很可能无法通过 做Tune 时,默认会做Calibration请勾选此选项可把当前调谐文件另存为其他名字。或调用其他的调谐文件此模式可得到最高的分辨率此模式可以得到更好的线性范围5.4 Initial Tune注意:初次安装、仪器更换主要的备件或Standard Tune通不过时可以使用Initial Tune。Initial Tune需要在Extended Dynamic Range状态下进行。只有在Exten

44、ded Dymamic Range模式下,才可以做Initial Tune。如果仪器原来不在Extended Dynamic Range模式,切换到Instruments State选项卡,选择Extended Dynamic Range,Mass Range 为3200 m/z,Fast Polarity Switching为Disabled。然后点击右上角的Apply按钮。 切换到Autotune选项卡,根据需要选择调谐极性Positive、Negative或同时选中。如果您的TOF 使用的是Jet Stream ESI源,并且选择了正、负模式同时调谐的话,由于正负模式所使用的调谐液浓度不

45、同,请选中Pause Between Autotunes (for Calibration Solution Swapping,以便在正、负模式调谐之间更换调谐液。选中Initial Tune,然后点击 Start Autotune按钮,接下来会弹出下面的窗口,点击Yes确认,开始调谐。调谐完成后会自动生成报告。请选择此项,否则校正完成后不会自动关闭调谐液做Initial Tune之前需要确认仪器是ExtendedDynamic Range模式更改仪器的操作模式之后切记要点击Apply按钮。否则仪器的模式不会改变5.5 Standard Tune注意:在质谱分辨率不好,且Quick Tune不

46、能解决的情况下可以尝试做Standard Tune。 Standard Tune也需要在Extended Dynamic Range模式下进行。Standard Tune的操作步骤与Initial Tune相同,唯一的区别是在Autotune的选项卡选择Standard Tune, 然后选择需要调谐的极性,再点击Start Autotune按钮开始调谐。调谐完成后会自动生成报告。 5.6 Quick Tune注意:在质谱分辨率不好时,可以首先尝试做一下Quick Tune。Quick Tune 可以在Extended Dynamic Range或High Resolution模式下进行。操作步

47、骤与Initial Tune和Standard Tune相同,唯一的区别是在Autotune的选项卡选择Quick Tune, 然后选择需要调谐的极性,再点击Start Autotune按钮开始调谐。调谐完成后会自动生成报告。 5.7 Check Tune注意:Check Tune可用于检查仪器状态,但不会调整任何参数,仅仅是调用当前调谐文件的参数来检查仪器状态。Check Tune可以在任何操作模式下进行。操作时只需选择Check Tune,然后选择需要调谐的极性,再点击Start Autotune按钮开始调谐。调谐完成后会自动生成报告。 5.8 Calibration注意:Calibrat

48、ion 只校正质量轴的偏差,不改变其他任何参数。可以在任何操作模式下进行。建议每天运行样品前运行Calibration (或Checktune ,确保仪器的状态正常。切换到TOF Mass Calibration 选项卡,Calibration Bottle 选择B ,等待TOF 图标变绿后,选择要校正的极性是正(Positive还是负(Negative,点击Calibrate 按钮。校正完成后会弹出下面的窗口。校正结果和调谐不同,不会自动存储报告。所以如需打印或保存Calibration 结果,请用鼠标点中Calibration 报告的窗口,然后按键盘上的alt + Print Screen

49、 键,复制该报告,然后可以打开Paint 、WordPad 或Excel 程序,在Edit 菜单选择Paste ,则该报告就出现在该程序里面了,可以选择打印或者保存。这里选择需要校正的极性点击Calibrate 按钮开始校正校正后最大的残差应该小于2ppm如果要查看详细的残差曲线,点击此按钮使用B 瓶的调谐液5.9 保存调谐结果,返回采集界面在Context下拉框中选择Acquisition,切换回Acquisition界面,弹出Instruments State Confirmation对话框,确认这是你需要操作的仪器状态后,点击Yes按钮。否则,点击No,更改到你需要的状态。 接下来弹出的

50、窗口点击OK。 如果要保存校正或调谐的结果,则在下面的窗口点击Yes。回到MassHunter的数据采集界面,如果不想保存,请选择No。 6 方法编辑方法是进行样品分析的LC 、MS 的参数的集合,以及分析某个特定样品所需的前运行和后运行任务。下面我们对方法的建立的详细步骤进行阐述。在桌面上双击数据采集软件图标,打开MassHunter 采集软件,在左上角的 “Conte x t”项,确认仪器在Acquisition 界面。在这个界面中完成所有HPLC 和TOF 的方法参数设置。6.1 Properties在采集软件界面左下角点击Method Editor ,在此处编辑所有LC 和TOF 的方

51、法参数。 6.2自动进样器的参数设置点击自动进样器页面,设置自动进样器的参数。Agilent 的自动进样器有2种不同的进样方式: Standard injection 标准进样:是指进样器吸取样品后直接进样分析。Injection with Needle Wash 洗针进样:是指进样器吸取样品后,会自动清洗进样针的外壁,然后再进样分析。一般建议用户使用这种方式,可以显著减少样品交叉污染和进样残留。High Throughput :其作用是在当前样品正在分析时,同时准备好下次进样的样品。可以减少两次进样的间隔时间,加快样品分析的速度。一般选择Disable Overlapped injectio

52、n 。使用High Throughput 可以减少每次进样运行之间的等待时间,但若设置不当也可能会增加交叉污染和进样残留,降低重现性。请慎用。注意:如果您使用的是G1329型号的自动进样器,请忽略此部分内容。对于微盘自动进样器,可以设置进样方式,进样体积等。Injection Volume 处来设置进样体积。如果在样品信息或者工作列表中设置了进样体积,那么这里设置的进样量会被忽略,而采用样品信息或者工作列表中的设置。为了减少交叉污染和进样残留,进样方式一般选择洗针进样。洗针方式可以使用某个固定位置的样品瓶(Wash needle in wash-vessel ,也可以使用清洗端口洗针(Wash

53、 needle in Flush Port 。相对来说使用清洗端口可以取得更好的洗针效果。一般都选择这种模式,清洗时间3-10秒钟就足够了。当前调用的方法。下拉可以显示最近使用过的方法列表更改参数后,点击Apply 按钮才会应用到仪器。 撤销对方法参数的更改 方法的保存路径以及名称可以设定方法运行前后的操作。比如方法运行完后仪器自动Standby可以给方法添加一些注释取样位置可以调整进样针的插入位置,默认为零。使用标准样品瓶时针尖距离瓶底的距离约为2-3mm 。当样品量比较多并且担心有沉淀的时候,可以选择把针的位置抬高(最多比默认位置抬高5mm 。当样品量很少时,也可以考虑把进样针的位置降低(

54、最多比默认位置降低10mm 。 注意:如果设置降低针的位置的时候,请特别小心操作,每个自动进样器可以降低的数值是不一样的。防止进样针降的过低扎坏样品瓶,损坏进样针和自动进样器。另外一个选择就是使用自动瓶底检测功能。如果使用此功能的话,请把样品放在两个样品盘上,而不要放在最右侧1-10的位置。并且注意自动瓶底检测功能不能和取样位置调整同时使用。另外,在使用内插管的时候,最好不要使用Bottom Sensing 的功能。注意:如果您使用的是G1367或G1377型号的自动进样器,请忽略此部分内容。 在Setup 界面可以设置进样方式,进样体积等。为了减少交叉污染和降低进样残留,进样方式一般选择洗针

55、进样。这时需要选择洗针的样品瓶号位置,并需要在该位置放置一个装有合适溶剂的样品瓶。如果在样品信息或者工作列表中设置了进样体积,那么这里设置的进样量会被忽略,而采用样品信息或者工作列表中的设置。取样位置可以调整进样针的插入位置,默认为零。使用标准样品瓶时针尖距离瓶底的距离约为2-3mm 。当样品量比较多并且担心有沉淀的时候,可以选择把针的位置抬高。当样品量很少时,也可以考虑把针的位置降低(最多比默认位置降低10mm 。两种进样方式: - 标准进样 - 洗针进样洗针方式:- 某个固定样品瓶 - 清洗端口一般选择清洗端口 只建议有经验,且的确需要的客户使用进样器的吸样和推样速度,一般不要调整选择是否

56、启用瓶底自动检测功能 进样体积 洗针只能选择使用某个位置的样品瓶来进行 高通量:一般不要使用进样体积停止时间。一般设置为和泵一样 (As Pump进样针插入深度调整停止时间。一般设置为和泵一样(As Pump进样针取样位置调整两种进样方式: - 标准进样 - 洗针进样一般使用洗针进样注意:如果设置降低针的位置的时候,请特别小心操作,每个自动进样器可以降低的数值是不一样的。防止进样针降的过低扎坏样品瓶,损坏进样针和自动进样器。在泵的参数设置界面可以设置泵的流量、流动相比例、数据停止采集时间等。下图是一个带有溶剂选择阀的二元泵设置界面,它有两个A 通道和两个B 通道。如果没有溶剂选择阀,则只有一个A 一个B 通道。带有溶剂选择阀的二元泵给用户提供了更多的功能选择,可以选择使用A1-B1、A1-B2、A2-B1以及A2-B2四种溶剂组合方式,但是,不能同时使用A1-A2或者B1-B