BALFDNA倍体分析在周围型肺癌中的诊断价值(精)

1、BALF DNA倍体分析在周围型肺癌中的诊断价值作者：杨力 , 周琴, 张立波 , 郭光云 , 陈功 , 邝军【关键词】肺癌;DNA 倍体分析；细胞学周围型肺癌是胸科常见病之一，虽然有各种 X 线征象，多肿瘤标志物 等检查的支持，但却因无病理学诊断而无法确诊。支气管肺泡灌洗液行常规细 胞学检查已开展多年，但由于常规细胞学检查时，光镜观察对细胞核形态只能 作大致的描述，容易受到病理科医生主观因素的影响，常使其不敢下肯定性结 论，致使其临床价值降低。细胞内 DNA 含量分析的出现，避免了主观因素的影响 为恶性肿瘤的诊断提供了一种较可靠的方法 , 并可弥补常规细胞学检查的不足 1 ，现报告如下。1资

2、料与方法1.1资料2005 年 10 月-2008 年 5 月期间 26 例患者中，男性 15 例，女性 11 例；年龄 4983 岁（平均 65.3 岁）。病变均位于段支气管开口以下肺野部位。上叶 11 例，下叶 12 例，中叶 3 例。术前或术后均经彩超或 CT 引导下穿刺活检 确诊为肺癌。仪器：OLYMPUSBF TYPE P30 纤支镜,兰丁麦克奥迪全自动细胞 DNA 倍体分析系统。1.2检查方法术前仔细阅读胸部 X 线片或胸部 CT,找到肿瘤所在相应引流支气管， 然后行支气管镜检查，先在引流支气管深部盲钳可能发生病变的支气管，然后 用无菌生理盐水 50100 mL 灌洗，收集灌洗液

3、2035 mL，送病理科行细胞 内 DNA 含量分析及细胞学检查，每例灌洗液 1030 mL 经离心后 （2 500 r/min,10 min）, 加适量上清液后用细胞涂片离心机 （武汉兰丁医学高科技有限公司 ） 离心涂片 , 制成 2 张薄层细胞片。 12 张玻片做瑞氏染色供常规 细胞学检查,另 12 张玻片行经福尔根（Feulgen） DNA 染色,用全自动细胞图 像分析系统（ AcCell ）。1.3判断标准常规细胞学诊断结果分为 3 类: 炎性细胞、核异质细胞和癌细胞DNA 分析系统：所有 Feulgen 染色片用 AcCell 全自动细胞图像分析系 统进行扫描处理。细胞片染色质量控制

4、用 HL 60 细胞株片作对照。 AcCell 系 统对每张玻片上 6 000 个以上的细胞核进行扫描测定。经扫描后的每个细胞核 均有 123 个特征值，包括形态特征、吸光特征、具体结构特征、 Markovian 和 非 Markovian 结构特征和长度特征等。 AcCell 系统根据不同细胞成分所具有的 不同特征参数来完成自动细胞分类和计数过程，如正常上皮细胞，增生或癌变 细胞，淋巴细胞，中性白细胞及未参与诊断的垃圾细胞(重叠细胞核，聚焦不 良细胞核和核碎片等)。标准对照细胞为同张玻片上的 100 个正常上皮细胞， 所测出的积分光密度(Intergrated Optical Density

5、,IOD)为 2C 的参考值，其 CV( Coefficientof Variation )值小于 5% DNA 旨数大于 2.5 的细胞进行核实，以排除垃圾和重叠的细胞核。的 DNA 旨数(DNA Index,DI)为 1,当 DI=2 时，多当15%细胞 DI 在 1.11.9 之间形成峰,即可 3 个以上 DI2.5 考虑癌细胞。1.4统计学处理 率的比较采用x2 检验,PV0.05 差异有显著性意义。2结果2.1细胞学检测结果发现癌细胞 7 例，高度核异质及核异质细胞 10 例，余发现炎性细胞及 红细胞。灌洗液常规细胞学检查总阳性率26.9%。2.2DNA 咅体分析结果DNA 图像分析

6、系统结果显示：6 例均为 DNA 旨数在 0.91.2 的细胞，7 例有大量 DI 值在 1.22.5 倍体异常细胞，并形成峰，13 例有 DI 值2.5 的异 倍体细胞。其中 7 例常规细胞学检查发现癌细胞者其 DI 值均2.5，DNA 图像 分析系统检测的阳性率为 76.9%。2.3DNA 咅体分析系统与常规细胞学诊断比较常规细胞学阳性率为 26.9%,DNA 图像分析系统检测的阳性率为76.9%，两种方法的阳性率差异有显著性 (x2=11.01,PV0.05) 。其中 7 例常规细胞学检查发现癌细胞者其 DI 值均2.5，另 6 例 DI 值 均2.5 及 3 例 DI 值分别为 1.9

7、、2.2、2.3 者，当将 DNA 定量检测的结果反 馈给细胞病理学医生后，最终确定为癌细胞。两者结合阳性率 61.5%，与单纯 细胞学检查相比差异有显著性 (x2=7.12,PV0.05) 。3讨论二倍体细胞 (G1/G0)为四倍体细胞 (G2/M 期)2 。诊断为 DNA 咅体异常细胞，有BALF佥查已广泛用于肺疾病的诊断，特别是对某些周围型肺部肿块不 能行肺穿刺或开胸活检者，BALF 检查可直接取得肺局部病变之信息，故有学者 将 BALF 检查称为“液相肺活检”。但是细胞学检查的局限性仍使其作用受限使很多周围型肺癌得不到确诊。用 DNA 咅体分析系统进行子宫颈癌及癌前病变的诊断在国外已有

8、大量 报道3。国内学者孙小蓉等开展了相应工作4，但将这项检查运用于 BALF 却 少有报导。正常细胞及肿瘤细胞在生长增殖时，细胞核内 DNA 吉构及含量都会发生 变化。 通过对细胞核内的 DNA 测定能了解正常细胞周期变化及发现恶性增殖的 肿瘤细胞。DNA 咅体分析系统是一种快速、简单的检测手段,能测定 Feulgen 法 染色细胞核 DNA含量,检测结果可以用简单直观的直方图表示,从制备样本到得 到 DNA 勺直方图一般只要 2030 min,同时还能检测细胞增殖周期。本研究结果表明，DNA 定量检测的阳性率(76.9%)，两者结合阳性率(61.5%) ，均显著高于常规细胞病理 (26.9%

9、)，并具有统计学意义。 7 例常规细 胞学检查发现癌细胞者其 DI 值均2.5，显示出高度一致性，当将 DNA 定量 检测的结果反馈给细胞病理学医生后，本组 6 例通过 DNA 咅体分析其 DI 值 2.5，另有 3 例高度核异质细胞其 DI 值分别为 1.9、2.2、2.3,并最终被确定为 癌细胞。故两者结合起来可以让细胞病理学医师获得单纯从形态上难以得到的 肿瘤生物学特征信息 , 为用形态学评估肿瘤生物学特征提供了有价值的补充 , 弥 补细胞病理形态学诊断的不足，为其结论提供理论依据， 从而提高细胞病理学 阳性率， 也有助于提高对形态学的认识水平 4 。DNA 咅体分析出现假阴性有 4 例

10、，其原因可能为 5 :肿瘤为二倍体肿 瘤；灌洗液中异倍体肿瘤细胞数量极少时，异倍体峰可能被正常的二倍体细胞 所掩盖；一些肿瘤细胞有染色体缺失，但其复制可平衡，使肿瘤细胞净 DNA 倍体在 DNA 分析时正常。在进行支气管肺泡灌洗(BAL 时，应仔细阅读胸片或 CT 片，找准所 需支气管或亚段支气管，必要时行病理检查 , 以提高阳性检测率。【参考文献】1Saha I,Dey P,Vhora and imagecytometry on 0,22(2):81-C,Anca M.Image cytometry:an aid forpleural effusionsJ.Diagn Cytopathol,2N,Pomjanski N,et al.Prognostic signif in carcinomaof the uterine cervixFIGO Stage IB and IIJ.Anal CellPathol,2001,23(3-4):97-105.4孙小蓉，汪键,AlfredBoecking.DNA 倍体分析系统用于宫颈癌及上皮内瘤变 的诊H,et al.Role of DNA flow cytometryeffusion fluidJ.Diagn Cytopathol,20085.2Osterheld MC,Liettecytological diagnosis of0