光学显微镜的使用和革兰氏染色

1、光学显微镜的使用和革兰氏染色作者：郭森 地址：山东大学生命科学学院微生物楼341微生物实验室 摘要：这次实验我们进行的是微生物革兰氏染色，并用光学显微镜中的油镜对其进行观察，目的是了解并掌握革兰氏染色和光学显微镜的原理和简单操作。首先我们使用接种环和酒精灯将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌三种微生物固定到一个载玻片上；然后使用革兰氏染色法对其进行染色；最后使用光学显微镜对其形态和颜色进行观察。实验结果是枯草杆菌和金黄色葡萄球菌显紫色为革兰氏阳性菌，大肠杆菌显红色为革兰氏阴性菌。结果表明，不同微生物的细胞壁有着两种不同的结构和组成，因此，可以通过革兰氏染色对微生物进行分类和鉴别。关键词：革兰氏

2、染色；光学显微镜；油镜前言：微生物的细胞壁由于其肽聚糖层厚度、脂质的含量以及其结构的不同，对染料有着不同的滞留能力，分别显革兰氏阳性和革兰氏阴性，经过革兰氏染色后分别显蓝紫色和红色，本次实验即通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌进行革兰氏染色，希望可以通过颜色分辨其为革兰氏阳性还是阴性，以此来增进我们对革兰氏染色的理解和掌握。本次实验首先要进行制片然后对三种微生物进行革兰氏染色，之后是使用光学显微镜中的油镜（为了不使通过物镜的光线因折射和反射而减少，点上香柏油和二甲苯）对经过革兰氏染色后的三种微生物进行形态和颜色的观察。本实验报告首先介绍了本次实验的材料和方法，然后是实验结果及其分析，最后

3、是对实验的小结。1 材料与方法1、1 材料1、1、1 菌种金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌1、1、2 溶液和试剂香柏油，二甲苯，革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液等1、1、3 仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），接种环，试管架，镊子，滤纸，滴管等。1、2 步骤和方法1、2、1 制片在洁净玻片上分别滴上三滴蒸馏水，取活跃生长期菌种按常规方法（使用接种环刮取菌苔和酒精灯）涂片、干燥和固定，注意，涂片要均匀，使之成一薄层，要使用镊子夹着玻片将其放到酒精灯上干燥和固定，以免烫伤。1、2、2 染色1、2、2、1 初染滴加

4、草酸铵结晶紫染液覆盖凃菌部位，染色12 min后倾去染液，水洗至流出水无色。1、2、2、2 媒染先用卢戈式碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1 min，倾去碘液，水洗至流出水无色。1、2、2、3 脱色将玻片上残留水用吸水纸吸去，在白色背景下用滴管流加95%的乙醇脱色（一般2030s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。1、2、2、4 复染将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2 min，水洗，洗去残水晾干。1、2、3 镜检在玻片凃菌部位滴加香柏油后，使用光学显微镜中的油镜进行观察。2 结果与分析2、1 实验结果见表1和图13 表1 革兰氏染色结果记录表 菌名菌体颜色菌体形态结果（G+,G-）金

5、黄色葡萄球菌紫红色球状，多聚集成团G+大肠杆菌红色椭圆状G-枯草芽孢杆菌紫色双杆状G+图1 金黄色葡萄球菌显微观察图图2 大肠杆菌显微观察图图3 枯草芽孢杆菌显微观察图2、2 结果分析本次实验的结果让我们对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的外部形态以及革兰氏阳性与阴性有了一个初步的了解。实验结果表明，金黄色葡萄球菌为一般聚集成团，大肠杆菌为椭圆状杆菌而枯草芽孢杆菌为双杆菌，同时他们分别为革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。因此，金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的细胞壁中肽聚糖的含量较高，壁比较厚且脂质含量低；大肠杆菌的细胞壁中肽聚糖含量低，交联度底，壁比较薄且脂质含量高。因此，通过革兰

6、氏染色和显微观察，可以对三种不同的微生物的外部形态和细胞壁结构有一个初步的了解。3 小结本次实验主要是通过对三种微生物菌种进行革兰氏染色并在油镜下进行观察，来使我们对革兰氏染色和光学显微镜有一个更深的了解并掌握该过程中的制片、染色及油镜观察等实验方法。本次实验中，有几点需要注意的地方，分别是：在制片时，一开始蒸馏水的量应当适中，之后用接种环涂片时要涂布均匀，使之成一薄层；对玻片上菌种进行干燥和固定时应当注意要用镊子夹住玻片，以免烫伤皮肤；对菌种进行革兰氏染色时，注意不要让染料沾到自己的衣物上；进行革兰氏染色的时间不可过长；使用酒精时注意避免靠近火焰；使用接种环刮取菌苔时注意无菌操作，要在酒精灯火焰旁对试管“封口”；染色结束后要洗手；使用油镜前后要注意对油镜镜头的清洁。经过这次实