H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用(精)

1、H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用.txt铁饭碗的真实含义不是在一个地方吃 辈子饭，而是一辈子到哪儿都有饭吃。就算是一坨屎，也有遇见屎壳郎的那天。所以你大可不必为今天的自己有太多担忧。H7 在脑损伤后血脑屏障损害中的作用2010-01-15 李良平 徐如祥 王清华 杨志林 摘要： 目的 探讨蛋白激酶 C(PKC 抑制剂 H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用。方法雄性 SD 大鼠 48 只，随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和治疗组。治疗组于大鼠脑损伤后0.5小时腹腔注射 PKC 抑制 H7(1mg/kg,12 小时重复注射 1 次，伤后 24 小时应用分光 光度计定量检测伊文氏兰渗出。结果脑

2、损伤后伊文氏兰明显渗出，治疗组渗出明显减少。结论应用 PKC 抑制剂 H7 能明显阻止血脑屏障开放，可望在血脑屏障保护作用中提供新的治疗措施。关键词：脑损伤；血脑屏障；信号转导中图分类号：R651.102文献标识码：A 文章编号：1009-4237(200004-0210-03 Effects of H7 on blood-bra in barrier damage in brain injury LI Lia ng-pi ng,XURu-xia ng,WANG Qin g-hua,et al. (Departme nt of Neurosurgery,Zhujia ng Hospital,F

3、irstMilitary Medical Un iversity,Gua ngzhou 510282Abstract: Objective To explorethe effects of H7,a protein kinase C(PKC inhibitor,on BBB damage in brain injury.MethodsForty-eight male SD rats were devided into 4 groups:c on trol on e,sham- operati on on e,brain injury one and H7-treatme nt on e.The

4、 rats of the treatme nt group were periton eally administered H7(1mg/kg0.5h after brain injury and did the same 12h after brain injury.Thepermeati on of Eva ns blue was observed qua ntitatively with a spectrophotometer.ResultsEvans blue was significantly permeated in the injured group while in sig n

5、ifica ntly in theH7-treated rats.C on clusi on H7 can preve nt BBB ope nin g,which may provide a new wayin BBB protectio n.Key words:braininjury;blood-brain barrier;signal transduction细胞内蛋白激酶 C(PKC 激活可导致细胞通透性增加，脑微血管内皮细胞的PKC 激活可导致血脑屏障的开放，脑水肿形成。研究脑损伤后 PKC 的信息转导通路可阐明血脑屏障损害的机理。本研究采用伊文氏兰定量观察，探讨PKC 抑制剂 H7

6、 在脑损伤后血脑屏障损害中的作用。材料与方法 1 实验分组雄性 SD 大鼠 48 只，体重(250 0g，随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和H7 治疗组，每组 12 只。治疗组于伤后 0.5 小时腹腔注射 H7（1mg/kg ,12 小时后重复注射 1 次，H7 的剂量选择参照 Joo 的方法1。动物均于伤后 24 小时处死。2 脑损伤模型的建立 采用改进的 Feeney 氏2自由落体硬膜外撞击方法。实验动物用10%水合氯醛（0.35g/kg 体重腹腔内注射麻醉后，头部固定于立体定向仪上，剪去顶部皮毛，消毒皮肤后，沿中线左侧切开头皮，分离骨 膜，用牙科钻于中线旁 2mm 处，紧挨冠状缝后

7、开一直径 5mm 的圆形窗，硬膜保 持完整。用 20g 砝码于 30cm 高处通过一金属导杆坠落，撞击置于硬膜上的5mm直径的圆形锥上制成脑损伤模型，致伤冲击力为600gcm,硬膜外置明胶海绵止血，骨窗用锌汀粉封闭，缝合头皮，置鼠笼畏养。正常对照组不做任何处理。假手术组仅切开头皮和颅骨开窗，不致脑损伤，术后24 小时处死。3 脑组织伊文氏兰含量的测定大鼠均于处死前 1 小时股静脉注射 2%伊文氏兰3ml/kg。取脑时，为清除血液中染料，用生理盐水左心室灌注至右心耳流出清亮液 体。取损伤侧皮质、海马，对侧皮质、海马分别称重，加入二倍体积二甲基甲酰 胺，50C 水浴中孵育 72 小时， 1500g

8、 离心 10 分钟， 取上清， 应用分光光度计在伊 文氏兰最大吸收光谱 635nm处检测吸光度，从标准曲线上查得伊文氏兰含量结果 以卩 g/g 脑组织表示。4 统计学处理应用单因素方差分析和各组均数 t 检验处理，PV0.05 为显著性差异。结 果脑组织伊文氏兰定量测定结果：脑损伤后损伤侧皮质、海马，对侧皮质、海马伊文氏兰含量都明显高于正常对照组和假手 术组。治疗组损伤侧海马、对侧皮质、海马，伊文氏兰含量接近正常，损伤侧皮质 伊文氏兰含量明显高于正常对照组和假手术组，但明显低于脑损伤组（见附表、附图。附表 H7 治疗后脑组织伊文氏兰含量的变化（组 别 n 伊文氏兰含量（卩 g/g 脑组织 左侧

9、皮质 右侧皮质 左侧海马 右侧海马正常对照组 12 10.15 .0610.31 .22 10.62 09 11.67 04 假手术组 1210.96 43 10.87 07 10.61 0610.55 .49 脑损伤组 12237.41 5.48* 20.97 08 20.38 09* 15.67 19* H7治疗组 1275.64 .21* 11.67 31 11.96 76 10.43 85* : Pv0.05，* : Pv0.01，与正常组相比较； : Pv0.05，: Pv0.01 与脑损 伤组相比较 L-左侧皮质 R-右侧皮质 LH-左侧海马 RH-右侧海马 N-正常组 S- 假手

10、术组 B-脑损伤组 H-H7 治疗组附图 H7 治疗后脑组织伊文氏兰含量的变化讨论PKC 是内皮细胞信息转导通路的一个重要环节，调节内皮细胞通透性，在脑微血管内皮细胞中参与了血脑屏障通透性调节，与脑水肿的发生发展密切 相关。Patterson 3报道，在牛肺动脉内皮细胞单层，应用 PKC 抑制剂和下调 PKC 都能明显抑制百日咳毒素诱发的细胞间裂隙形成和通透性增加。Joo 1报道在大鼠脑缺血模型中双侧颈内动脉结扎后，脑组织明显水肿，应用PKC 抑制剂H7 后，脑水肿明显减轻，提示 PKC 参与了血脑屏障开放的调节作用。本文通过对大鼠脑损伤后伊 文氏兰渗出的定量研究，证明 H7 能明显阻止血脑屏

11、障的开放。脑损伤后血脑屏障 破坏分为可逆性损害和不可逆损害。各种介质作用的非直接损伤区，如同侧海马，对侧皮质、海马，血脑屏障可逆性开放，H7 几乎能完全阻断血脑屏障可逆性开放。从本实验结果可知损伤侧周围皮质不可逆性损伤严重，存在血管断裂，伊文氏 兰渗出最明显，H7 部分阻断伊文氏渗出，达到 60%。H7 在脑损伤后血脑屏障损害 中起着重要作用，有明显阻断血脑屏障开放的作用。脑损伤后血脑屏障开放的主要方式是内皮细胞间裂隙形成，通透性增加，可能有二方面调节机制：（1 轴向的收缩，主要由肌球蛋白轻链激酶（MLCK 调节作用；（2 束缚力量，即细胞-细 胞，细胞-基质粘附作用。 PKC 可使粘着斑蛋白激酶激活， 作用于粘着斑蛋白和踝 蛋白 （vinculin and