芪参益气滴丸对急性心肌梗塞大鼠转化生长因子-β1的影响

1、芪参益气滴丸对急性心肌梗塞大鼠转化生长因子-1的影响         作者：刘长玉 杜武勋 朱明丹 魏营 宋启刚 冯利民 苏金玲 【摘要】 目的观察芪参益气滴丸对急性心肌梗塞（AMI）大鼠不同时间点转化生长因子-1（TGF-1）的影响。方法制备AMI大鼠，随机分成假手术组、AMI模型组、芪参益气滴丸治疗组3.5 mg/ （100 g·d)-1芪参益气滴             

2、            作者：刘长玉 杜武勋 朱明丹 魏营 宋启刚 冯利民 苏金玲【摘要】  目的观察芪参益气滴丸对急性心肌梗塞（AMI）大鼠不同时间点转化生长因子-1（TGF-1）的影响。方法制备AMI大鼠，随机分成假手术组、AMI模型组、芪参益气滴丸治疗组3.5 mg/ （100 g·d)-1芪参益气滴丸混悬液灌胃给药、卡托普利治疗组1.012 5 mg/（100 g·d)-1卡托普利悬浊液灌胃给药，每组又分4个时点(3 d，2周，4周，8周

3、)，共16个组，每组9只。于实验结束后处死动物，分别取大鼠梗塞区及非梗塞区心肌，RT-PCR法检测TGF-1的mRNA表达水平。结果AMI组TGF-1 mRNA表达在梗塞区和非梗塞区与假手术组比较均呈现高表达趋势（P<0.05）；芪参益气滴丸治疗组与AMI组比较，梗塞区3 d，2周时TGF-1 mRNA高度表达（P<0.05）； 4，8 周时TGF-1 mRNA表达下降，但两组无显著性差异；非梗塞区各时间点TGF-1mRNA表达均下降（P<0.05）。卡托普利治疗组与AMI组比较，梗塞区各时间点TGF-1mRNA表达均下降，3 d，2周时两组有显著性差异（P<0.05）

4、；非梗死区各时间点TGF-1mRNA表达均下降（P<0.05）。芪参益气滴丸治疗组与卡托普利治疗组比较，在梗塞区各时间点TGF-1 mRNA表达均升高，3 d，2周，8周时两组有显著性差异（P<0.05）；在非梗死区各时间点TGF-1 mRNA表达均下降，但两组比较无统计学意义。结论 芪参益气滴丸具有促进梗塞区心肌早期修复，同时抑制非梗塞区心肌胶原的增生，从而延缓心室重构的作用。 【关键词】  芪参益气滴丸； 急性心肌梗塞； 转化生长因子-1； 心肌修复； 心室重构Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Qishenyiqi

5、 Dripping Pills on the expression of TGF-1 mRNA in rats with acute myocardial infarction(AMI) at different time point.MethodsMyocardial infarction model was replicated by ligation left anterior descending branch of coronary artery in Wistar rats.Rats were randomly divided into sham operation group,A

6、MI group,Qishenyiqi Dripping Pill group,Captopril group,and each group was divided into 4 different time points(3 days,2 weeks,4 weeks,8 weeks).The levels of TGF-1 mRNA in the no infarct and infract area of left ventricle were examined by RT-PCR.ResultsThe mRNA expression of TNF-in AMI group was sig

7、nificantly elevated as compared with sham rats (P<0.05). TNF- in Qishenyiqi Dripping Pills group and Captopril group were markedly attenuated compared with MI group and there were significant differences in 2nd week,4th week and 8th week(P<0.05). TNF-in  infarct area of Qishenyiqi Drippin

8、g Pills group was markedly attenuated as compared with Captopril group (P<0.05). TNF- in the no infract area of Qishenyiqi Dripping Pills group was markedly attenuated compared with Captopril group or 3rd day and in 2nd week (P<0.05).ConclusionQishenyiqi Dripping Pills can inhibit inflammatory

9、 reaction after acute myocardial infarction,relieve degree of myocardial injury, so as to protect cardiac function.Key words：Qishenyiqi Dripping Pills;  Acute myocardial infarction;  Tumor Necrosis Factor-;   Inflammatory reaction    芪参益气滴丸主要成分为黄芪、丹参、三七、降香，具有益气通脉、活

10、血止痛的功效，临床上广泛用于治疗心血管疾病。本研究通过建立大鼠急性心肌梗塞（AMI）模型，观察芪参益气滴丸对转化生长因子-1（TGF-1）的影响，探讨其促进AMI后心肌修复、抑制心肌纤维化，减轻心室重构的机制。1  器材与仪器1.1  动物  Wistar大鼠，雄性，体重200250 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2007-0001。1.2  药品和试剂及仪器芪参益气滴丸药物，由天士力医药集团公司提供（批准文号：国药准字Z20030139）。卡托普利药物由施贵宝药品公司提供（批准文号：国药准字H31022986）。Ta

11、KaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0由宝生物工程（大连）有限公司提供。Trizol由InvitroGen公司提供。主要仪器设备包括：PCR仪（Hybaid Limited Equipent class1，英国），紫外分光光度计 uV530（BECKMAN公司），DDY-11B型三恒电泳仪（北京六一仪器厂），凝胶成像系统 （英国 syngene公司），台式低温高速离心机（BECKMAN公司）。2  方法2.1  动物模型制备 按照文献1方法稍加改进，结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)建立AMI模型。手术前后均记录体表心电图，以导ST段弓背向上抬高0.2 m

12、m以上为结扎成功的标志。另设假手术组36只，其方法除不结扎冠状动脉外，余操作与AMI模型组动物相同。于术后给予青霉素4万U，肌肉注射1次/d，共3 d。2.2  分组及给药 24 h存活大鼠随机分为假手术组、AMI模型组、芪参益气滴丸治疗组、卡托普利治疗组，每组又分4个时点(3 d，2周，4周，8周)，共16个组，每组9只。芪参益气滴丸组大鼠实验前称取一定量的浸膏，用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成3.5mg/ml浓度的芪参益气滴丸混悬液，按3.5 mg/（100 g·d)给药。卡托普利组用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成1.012 5 mg/ml浓度的

13、悬浊液，按1. 012 5 mg/(100 g·d)给药，AMI模型组、假手术组予以生理盐水灌胃，至实验结束。2.3  心肌总RNA的提取和细胞因子的检测2.3.1  心肌总RNA的提取于3 d，2周，4周，8周实验结束后处死动物，分别取大鼠梗塞区及非梗塞区心肌100 mg用Trizol法提取总RNA，提取的总RNA用紫外分光光度仪分别测定A260，A280数值，所测得RNA样品吸光度A260/A280为1.82.0。2.3.2  RT-PCR方法检测mRNA的水平PCR具体步骤是： 94预变性2 min， PCR扩增35个循环(94变性30 s，退火3

14、0 s， 72延伸2 min)。PCR产物经2%琼脂糖电泳分析结果，用光密度扫描计算TGF-1与内参的比值。引物序列参照Genebank提供的cDNA序列，用Primer 5·0设计，由上海生物工程公司合成。    TGF-1：sense 5，-gcc tcc gca tcc cac ctt tg-3，；antisense 5-gcg ggt gac ttc ttt ggc gt-3，。退火温度61.2，产物长度396bp 。内参-actin：sense5，-cca acc gtg aaa aga tga cc-3，；antisense5，-cag ga

15、g gag caa tga tct tg-3，退火温度58.1；产物长度660 bp。           2.4  统计学方法 实验数据以±s表示，采用SPSS 10.0软件包，做单因素方差分析进行组间比较。3  结果     AMI组TGF-1 的mRNA表达在梗塞区和非梗塞区与假手术组比较均呈现高表达趋势，两组之间有显著性差异（P<0.05）。    芪参益气滴丸治疗组梗塞区在3 d，2 周时TGF-1  mRNA表达与AMI组比较高度表达，有显著性差异（P<0.05）；2周时更明显；4，8周时TGF-1 mRNA表达