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文档简介

1、实验四实验四 小鼠的超数排卵及胚胎收集小鼠的超数排卵及胚胎收集 一、实验目的一、实验目的：利用外源生殖激素进行超数排卵处理，收集胚胎及胚胎形态学的观察。掌握超数排卵的各个技术环节，了解胚胎的发育及质量评估。 二、实验材料二、实验材料1动物动物 4-6周龄供体昆白系雌性小鼠，成年雄 性小鼠与之1:11:3配比（亦可利用 其它实验动物）2药品药品 PMSG、hCG、FSH、LH；生理盐水、 75%酒精。3器械器械 一次性注射器（10 ml、5ml、1 ml）、 手术刀、剪刀、镊子、表面皿、培养 皿、显微镜。三、鼠的超数排卵和胚胎收集三、鼠的超数排卵和胚胎收集 时间药物剂量方法配种Day 1PMSG

2、30 IU腹腔注射 Day 2 Day 3 Day 4HCG30 IU腹腔注射自然交配Day 5 收集胚胎 Day 6检栓分笼四、实验步骤1、超数排卵、超数排卵 取4-6周龄性成熟雌性小鼠，第1天注射30 IU PMSG, 第3天注射30 IU hCG，注射后与性成熟的公鼠同笼，次日早晨检查阴道栓（第4天），有栓的小鼠分开饲养。2、胚胎的收集、胚胎的收集 注射hCG后72-84 h（第6天）处死小鼠（颈椎脱臼法），将处死并固定好的小鼠，沿腹中线剪开腹腔，向前方揭去肠胃内脏，即可在肾脏后方看到两侧呈的卵巢、输卵管和子宫，找到输卵管壶腹部，剪下，置于表面皿或培养皿中，用细针将其划破，能看见一团物质

3、流出，此就是受精的胚胎。11 d1 d单核细胞（输卵管内）单核细胞（输卵管内）21.5 d 1.5 d 2 2细胞期（输卵管内）细胞期（输卵管内）32 d2 d4 4细胞期（输卵管内）细胞期（输卵管内）42.5 d2.5 d8-128-12细胞期（输卵管内）细胞期（输卵管内）53 d3 d桑椹期（输卵管桑椹期（输卵管子宫上部）子宫上部）63.5 d3.5 d囊胚初期（子宫内）囊胚初期（子宫内）74 d4 d囊胚期囊胚期3 胚胎鉴定胚胎鉴定 将培养皿置于解剖显微镜下，先用10X的镜头寻找胚胎，然后放大至40X上鉴定。1）未受精卵）未受精卵 呈圆球形，外周有一圈折性强且发亮的透明带，中央为质地均匀

4、色暗的细胞质，透明带和卵黄膜之间的空隙很小甚至看不到2）早期胚胎）早期胚胎 卵子受精后，经过卵裂过程，当处于桑椹胚或早期囊胚期的胚胎，卵裂细胞排列紧密，形态呈圆球形，其显著特征是透明带平坦而均匀，边缘整齐，形态清晰，卵裂球大小相等，颜色一致。 2022-1-2910胚胎鉴定胚胎鉴定发育阶段形态与匀称性细胞质大小透明带 2022-1-29122022-1-2913发育不同阶段的正常胚胎和退化变性胚具体时间安排具体时间安排周四（周四（11.7）：注射）：注射PMSG周五（周五（11.8）：注射）：注射HCG及合笼及合笼周六（周六（11.9）：检栓及分笼（上午）：检栓及分笼（上午）周二（周二（11.12）：收集胚胎

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