植物组织培养学 - 云南农业大学 教务处

1、园艺植物组织培养园艺植物组织培养Horticultural plant in vitro cultureHorticultural plant in vitro culture 主讲教师介绍主讲教师介绍任课教师任课教师：王仕玉副教授王仕玉副教授主讲课程：主讲课程：园艺植物组织培养，园艺研究法，果树生理学，园艺植物组织培养，园艺研究法，果树生理学，园艺专业英语，果树种质资源学园艺专业英语，果树种质资源学联系电话：联系电话：0871-52277240871-5227724（O O），），0871-52286180871-5228618（H H）移动电话：移动电话：13354925645133549

2、25645EmailEmail：wsy wsy ； wsygfg wsygfg 通讯地址：通讯地址：云南农业大学园林园艺学院园艺系云南农业大学园林园艺学院园艺系课程简介课程简介学时：学时：4040 学分：学分：2.52.5授课形式：授课形式：理论讲授2020学时，实验操作20学时。授课时间：授课时间：理论讲授1-81-8周(2-4-4月)周二第2讲，双周四第5,6,6讲；实验时间在周末或其它课余时间。成绩评定：成绩评定：平时成绩占10%10%，期末笔试成绩占70%70%，实验成绩占20%20%。主要参考教材：主要参考教材：1 1王清连王清连. . 植物组织培养，中国农业出版社，植物组织培养，中

3、国农业出版社，200220022 2陈振光园艺植物离体培养学，中国农业出版社，陈振光园艺植物离体培养学，中国农业出版社，199619963 3王蒂植物组织培养，中国农业出版社，王蒂植物组织培养，中国农业出版社，200420044. 4. 王蒂王蒂. . 植物组织培养实验指导植物组织培养实验指导. . 中国农业出版社中国农业出版社. .5 5刘庆昌，吴国刘庆昌，吴国良植物细胞组织培养，中国农业大学出版社，20032003云南农业大学教材科云南农业大学教材科尤瑞麟尤瑞麟. 植物学实验技术教程植物学实验技术教程组织培养、细胞化学和染色体技术组织培养、细胞化学和染色体技术. 北京大学出版社北京大学出版

4、社巩振辉巩振辉. 植物组织培养植物组织培养. 化学工业出版社化学工业出版社李胜李胜. 植物组织培养原理与技术植物组织培养原理与技术. 化学工业出版社化学工业出版社钱子刚钱子刚. 药用植物组织培养药用植物组织培养. 中国中医药出版社中国中医药出版社何松林、李青何松林、李青. 观赏植物组织培养观赏植物组织培养. 中国林业出版社中国林业出版社.沈海龙沈海龙. 植物组织培养植物组织培养. 中国林业出版社中国林业出版社刘庆昌刘庆昌. 植物细胞组织培养植物细胞组织培养. 中国农业大学出版社中国农业大学出版社李浚明李浚明. 植物组织培养教程（第植物组织培养教程（第3版）版）. 中国农业大学出版社中国农业大学

5、出版社胡繁荣胡繁荣. 植物组织培养植物组织培养. 中国农业出版社中国农业出版社曹春英曹春英. 植物组织培养植物组织培养. 中国农业出版社中国农业出版社王振龙王振龙. 植物组织培养植物组织培养. 中国农业大学出版社中国农业大学出版社彭星元彭星元. 植物组织培养技术植物组织培养技术. 高等教育出版社高等教育出版社李永文、刘新波李永文、刘新波. 植物组织培养技术植物组织培养技术. 北京大学出版社北京大学出版社陈世昌陈世昌. 植物组织培养（赠送电子教案）植物组织培养（赠送电子教案）. 重庆大学出版社重庆大学出版社吴殿星吴殿星. 植物组织培养（第二版）植物组织培养（第二版）. 上海交通大学出版社上海交通

6、大学出版社刘振祥刘振祥. 植物组织培养技术植物组织培养技术. 化学工业出版社化学工业出版社王水琦王水琦. 植物组织培养植物组织培养. 中国轻工业出版社中国轻工业出版社讲授的主要内容包括：讲授的主要内容包括：（1 1）园艺植物组织培养的概念、类别和发展简史；）园艺植物组织培养的概念、类别和发展简史；（2 2）植物组织培养的理论基础；）植物组织培养的理论基础；（3 3）植物组织培养实验室及基本操作技术；）植物组织培养实验室及基本操作技术；（4 4）植物器官和组织离体培养快繁技术）植物器官和组织离体培养快繁技术; ;（5 5）植物胚离体培养技术；）植物胚离体培养技术；（6 6）植物花粉花药离体培养技

7、术）植物花粉花药离体培养技术（7 7）植物细胞和原生质体培养及体细胞杂交技术）植物细胞和原生质体培养及体细胞杂交技术; ; （8 8）植物种质离体保存技术；）植物种质离体保存技术；（9 9）离体培育无病毒苗。）离体培育无病毒苗。绪绪 论论一园艺植物组织培养的基本概念一园艺植物组织培养的基本概念1 1园艺（园艺（HorticultureHorticulture）：是指果树、蔬菜、花卉及观赏树木的繁育与栽：是指果树、蔬菜、花卉及观赏树木的繁育与栽培技术。培技术。 园艺一词的英文园艺一词的英文HorticultureHorticulture起源于拉丁文起源于拉丁文 HortusHortus（庭园）和

8、（庭园）和CulturaCultura栽培两词，故园艺也被称为庭园栽培。栽培两词，故园艺也被称为庭园栽培。2 2园艺植物（园艺植物（Horticultural PlantsHorticultural Plants）：果树、蔬菜、花卉及观赏树木等。：果树、蔬菜、花卉及观赏树木等。广义上包括药用和香料植物。广义上包括药用和香料植物。 3 3植物离体培养（植物离体培养（plant culture in vitroplant culture in vitro）：在无菌和人工控制环境条：在无菌和人工控制环境条件下，利用适当的培养基，对植物离体器官、组织、细胞及原生质体进行件下，利用适当的培养基，对植物离

9、体器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞、器官、完整植株或生产有用生物代谢产物的过程。培养，使其再生细胞、器官、完整植株或生产有用生物代谢产物的过程。4 4园艺植物组织培养学（园艺植物组织培养学（Horticultural plant in vitro cultureHorticultural plant in vitro culture）：是：是研究果树、蔬菜和花卉等园艺植物离体培养的原理、方法技术和应用的一研究果树、蔬菜和花卉等园艺植物离体培养的原理、方法技术和应用的一门技术学科。门技术学科。5 5外植体外植体(explant(explant) )：是指离体培养中由活植物体上切取

10、下来以进行无菌培：是指离体培养中由活植物体上切取下来以进行无菌培养的各种植物体结构材料就叫做外植体。养的各种植物体结构材料就叫做外植体。如植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。1 1按外植体的类型即所培养植物材料的不同可分为：按外植体的类型即所培养植物材料的不同可分为：1 1）胚胎培养（）胚胎培养（embryo cultureembryo culture）：指以子房或胚珠中的成熟或未成熟胚：指以子房或胚珠中的成熟或未成熟胚或胚乳为目标外植体的离体无菌培养。或胚乳为目标外植体的离体无菌培养。包括原胚（包括原胚（proembryoproembryo）、幼胚）、幼胚（immature embry

11、oimmature embryo）、成熟胚（）、成熟胚（mature embryomature embryo）、胚珠（）、胚珠（ovuleovule）、子）、子房（房（ovaryovary）、胚乳（）、胚乳（endospermendosperm）培养及试管受精。可用于：）培养及试管受精。可用于：研究胚胎发生以及影响胚生长的因素，是研究生殖生理的有用方法；研究胚胎发生以及影响胚生长的因素，是研究生殖生理的有用方法；creating wide hybrids (creating wide hybrids (interspecific/intergenericinterspecific/interg

12、eneric) )：用试管受精用试管受精或幼胚培养可获得种间或属间远缘杂种；或幼胚培养可获得种间或属间远缘杂种；胚乳培养是研究胚乳的功能、胚乳与胚的关系，以及获得三倍体植株的胚乳培养是研究胚乳的功能、胚乳与胚的关系，以及获得三倍体植株的一个手段。一个手段。 shortening breeding cycles：提早休眠胚的萌发。提早休眠胚的萌发。haploid production via chromosome elimination：未授粉子房与胚珠培未授粉子房与胚珠培养，孤雌生殖。养，孤雌生殖。 二植物组织培养的分类二植物组织培养的分类 原胚期：原胚期：从受精卵从受精卵（a a）和原）和原

13、胚开始，直胚开始，直到心形期到心形期（a-ia-i）以）以前称为原胚前称为原胚期期心形期心形期（j j）成熟期成熟期（n n） ：一：一个具有子叶、个具有子叶、胚芽、胚轴、胚芽、胚轴、胚根的胚。胚根的胚。受受精精卵卵四四分分体体八八分分体体球球形形胚胚2 2）器官培养（）器官培养（organ cultureorgan culture）：指以植物的根、茎、叶、：指以植物的根、茎、叶、花器官及其原基的离体无菌培养。花器官及其原基的离体无菌培养。如根尖和根切段、茎尖、如根尖和根切段、茎尖、茎节和茎切段、叶原基、叶片、叶柄、叶鞘、子叶、花瓣、茎节和茎切段、叶原基、叶片、叶柄、叶鞘、子叶、花瓣、花丝、子

14、房的花柱和柱头、幼果的果肉等的离体无菌培养。花丝、子房的花柱和柱头、幼果的果肉等的离体无菌培养。其中微茎尖培养具有快速繁殖和去除病毒的优点。其中微茎尖培养具有快速繁殖和去除病毒的优点。植物茎的结构植物茎的结构3 3）组织培养）组织培养(tissue (tissue culture)culture)：指以分离出植物：指以分离出植物各部位的组织或已诱导的愈各部位的组织或已诱导的愈伤组织等为外植体的离体无伤组织等为外植体的离体无菌培养。菌培养。植物各部位的组织植物各部位的组织包括包括：表皮组织表皮组织（epidermis）皮层组织皮层组织（cortex）薄壁组织（薄壁组织（parenchymapar

15、enchyma）形成层组织（形成层组织（cambiumcambium）木质部（木质部（xylem xylem ）韧皮部（韧皮部（phloemphloem）髓部（髓部（medullamedulla）分生组织（分生组织（meristemmeristem）植物组织培养的英文为“ mericlone ”, 是 meri ( meristem =分裂组织)+ clone (营养繁殖系) 的合成语，即狭义概念。 4 4）细胞培养细胞培养(cell culture)(cell culture)：指体细胞以单个游离细胞、多细胞和细：指体细胞以单个游离细胞、多细胞和细胞的遗传转化体为外植体的离体无菌培养。胞的遗

16、传转化体为外植体的离体无菌培养。单细胞培养：单细胞培养：也称细胞克隆（也称细胞克隆（cell clonecell clone）技术，它培养单离的细胞，）技术，它培养单离的细胞，可诱导再分化，用于取得单细胞无性系，进行突变体的选育。可诱导再分化，用于取得单细胞无性系，进行突变体的选育。可采用看可采用看护培养法、微室培养法和平板培养法进行。护培养法、微室培养法和平板培养法进行。多细胞培养：多细胞培养：指保持较好分散性的很小细胞团的液体或固相化细胞培指保持较好分散性的很小细胞团的液体或固相化细胞培养。养。工业化植物细胞培养系统主要有悬浮细胞培养系统和固定化细胞培工业化植物细胞培养系统主要有悬浮细胞培

17、养系统和固定化细胞培养系统两大类。养系统两大类。多种生物发生器多种生物发生器(bioreactor)(bioreactor)用于批量培养增殖细胞。用于批量培养增殖细胞。 A A液体悬浮培养液体悬浮培养(suspension culture)(suspension culture) ：细胞处于悬浮、可动状态。：细胞处于悬浮、可动状态。又可分为成批培养、连续培养（工业化封闭式连续培养和开放式连续培又可分为成批培养、连续培养（工业化封闭式连续培养和开放式连续培养）、半连续培养。养）、半连续培养。连续培养连续培养（Continuous Culture）：）：用一定容积的但非密闭的反应器用一定容积的但非

18、密闭的反应器进行的，在培养过程中不断注入新鲜培养基，而使其营养物质连续得到进行的，在培养过程中不断注入新鲜培养基，而使其营养物质连续得到补充，细胞的生长和增殖连续进行。补充，细胞的生长和增殖连续进行。 封闭式连续培养封闭式连续培养（Closed continues Closed continues cultureculture）：同时对排出：同时对排出液中的细胞用机械方法液中的细胞用机械方法收集起来后，又放入原收集起来后，又放入原培养器，培养器中的细培养器，培养器中的细胞数量不断增加。胞数量不断增加。开放式连续培养（开放式连续培养（Open Open Continuous CultureCon

19、tinuous Culture）：培养细胞随同培养液一培养细胞随同培养液一起流出后不再放回原培起流出后不再放回原培养器。养器。 恒化培养恒化培养（ChemostaticChemostatic CultureCulture）：新鲜培：新鲜培养基的某一种营养液养基的某一种营养液或成份被调节成限制或成份被调节成限制因子的浓度，并以恒因子的浓度，并以恒定速率输入而建立一定速率输入而建立一个恒定状态。常取的个恒定状态。常取的限制因子有限制因子有NONO3 3- -、磷、磷酸盐、葡萄糖、尿素。酸盐、葡萄糖、尿素。恒浊培养恒浊培养（TurbidostaticTurbidostatic CultureCult

20、ure）：用比浊：用比浊计来定量测定培养液计来定量测定培养液中的细胞混浊度，通中的细胞混浊度，通过控制培养液的流入过控制培养液的流入量使悬浮液浊度恒定量使悬浮液浊度恒定的细胞培养方法。的细胞培养方法。成批培养（成批培养（Batch Culture）：把细胞接种到与外界隔绝的只）：把细胞接种到与外界隔绝的只允许气体和挥发性的代谢物质交换的、营养液体积保持不变的允许气体和挥发性的代谢物质交换的、营养液体积保持不变的密闭系统中培养。密闭系统中培养。小型细胞培养生物反应器小型细胞培养生物反应器(250ml(250ml，500ml500ml，1L1L，3L)3L)数字控制数字控制系统系统Control

21、Control Tower Tower 支支持单元持单元磁力搅拌器和加热垫磁力搅拌器和加热垫磁力搅拌培养和转瓶培养装置磁力搅拌培养和转瓶培养装置细胞转瓶培养器细胞转瓶培养器固定细胞培养固定细胞培养(immobilized cells Culture)(immobilized cells Culture)：细胞固定：细胞固定在一种隋性基质如琼脂、藻酸盐、聚丙烯酰胺、纤维或膜上面在一种隋性基质如琼脂、藻酸盐、聚丙烯酰胺、纤维或膜上面或里面，呈固定不动的状态，营养液可流动于不能运动的细胞或里面，呈固定不动的状态，营养液可流动于不能运动的细胞间，供应其营养。间，供应其营养。5 5）原生质体培养（）原生

22、质体培养（protoplast cultureprotoplast culture）：指以原生质体、：指以原生质体、原生质融合体和原生质体的遗传转化体为外植体的离体无菌原生质融合体和原生质体的遗传转化体为外植体的离体无菌培养。培养。去壁后质膜包裹着的裸露的原生质体比完整细胞易于去壁后质膜包裹着的裸露的原生质体比完整细胞易于摄取外来的遗传物质、细胞器以及病毒、细菌等，常应用于摄取外来的遗传物质、细胞器以及病毒、细菌等，常应用于体细胞杂交和转基因的研究。体细胞杂交和转基因的研究。叶肉原生质体愈伤组织叶肉原生质体愈伤组织6 6）花药和花粉培养）花药和花粉培养：以花药或花粉为外植体诱导单倍体细胞系和单

23、倍体以花药或花粉为外植体诱导单倍体细胞系和单倍体植株的无菌培养。植株的无菌培养。花药是花的雄性器官，花药培养属器官培养；花粉是单花药是花的雄性器官，花药培养属器官培养；花粉是单倍体细胞，花粉培养与单细胞培养相似。倍体细胞，花粉培养与单细胞培养相似。production of haploids for genetic analysis and shortening breeding programmes，单倍体植株经过染色体加倍就成为纯合二倍体植株，可缩单倍体植株经过染色体加倍就成为纯合二倍体植株，可缩短育种周期，获得纯系。短育种周期，获得纯系。creation of genetic varia

24、nts via gametoclonal variation，隐性突变体隐性突变体。草莓花药愈伤组织培养草莓花药愈伤组织培养愈伤组织分化不定芽愈伤组织分化不定芽植物的细胞、组织和器官培养成植株的过程植物的细胞、组织和器官培养成植株的过程2 2按培养基状态可分为：按培养基状态可分为：固体培养固体培养(solid culture)(solid culture)：即用即用0.7-1%0.7-1%琼脂固化培养基来琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。固体培养的优点是现在最常用的方法。固体培养的优点是使用方便，简单易行，除培养室外无需特殊的设备，缺点是是使用方便，简

25、单易行，除培养室外无需特殊的设备，缺点是养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。 液体培养液体培养(liquid culture)(liquid culture)：用不加固化剂的液体培养基培用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。养植物材料的方法。液体中氧气含量较少，故又分两种：液体中氧气含量较少，故又分两种：静置培养静置培养：用滤纸条做成纸桥，把材料放在桥面上。：用滤纸条做成纸桥，把材料放在桥面上。振荡培养振荡培养：将培养基置于转床或摇床上进行培养，通过搅动：将培养基置于转床或摇床上进行培养，通过搅动或振动培养液的方法以

26、确保氧气的供给或振动培养液的方法以确保氧气的供给。采用往复式摇床或旋采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，速度一般为转式摇床进行培养，速度一般为50-100r50-100rminmin，这种定期浸没，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。大大型型双双层层旋旋转转式式摇摇床床卧卧式式旋旋转转式式恒恒温温恒恒湿湿摇摇床床 往复式摇床往复式摇床三园艺植物组织培养的发展简史三园艺植物组织培养的发展简史 1 1植物组织培养的开创植物组织培养的开创：从：从1919世纪初至世纪初至2020世纪世纪3030年代中为植物年代中为植物离体培养的探索阶

27、段。离体培养的探索阶段。l 1838-18391838-1839年，德国科学家年，德国科学家M. J. SchleidenM. J. Schleiden（許來登）和（許來登）和Theodore Theodore SchwannSchwann （史旺）发表了细胞学说（史旺）发表了细胞学说（Cell theoryCell theory）。）。German German cytologist cytologist and and physiologistphysiologist(1810 -1882 (1810 -1882 ）l19021902年，德国植物学家哈伯兰特年，德国植物学家哈伯兰特(G.

28、(G. HaberlandtHaberlandt 根据细胞学说，预言植物体根据细胞学说，预言植物体的任何一个细胞，都有长成完整个体的潜的任何一个细胞，都有长成完整个体的潜在能力，这种潜在能力就叫植物细胞的在能力，这种潜在能力就叫植物细胞的“全能性全能性”（totipotencytotipotency），奠定了组），奠定了组织培养的理论基础。织培养的理论基础。l19041904年，年，HanningHanning 最先成功地培养了萝最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。卜和辣根菜的胚。l1912，HWinkler用番茄与狗酸浆嫁用番茄与狗酸浆嫁接，由砧木与接穗的细胞核融合而产生嫁接，由砧木与接穗的细

29、胞核融合而产生嫁接杂种，获得一个具有接杂种，获得一个具有48条染色体的植株，条染色体的植株，其染色体数目恰等于番茄（其染色体数目恰等于番茄（2n=24）与狗）与狗酸浆（酸浆（2n=72）染色体和的半数（）染色体和的半数（1236=48），属于体细胞杂种。），属于体细胞杂种。 l19221922年，年，Knudson Knudson 采用胚培养法获得大采用胚培养法获得大量兰花幼苗。量兰花幼苗。The father of plant tissue cultureGerman Botanist HABERLANDT 2 2植物组织培养的奠基植物组织培养的奠基：从上世纪：从上世纪3030年代中至年代中

30、至5050年代末是植物年代末是植物组织培养技术的奠基阶段。组织培养技术的奠基阶段。l19341934年，年，White White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系，从而使用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系，从而使非胚器官的培养首先获得成功。非胚器官的培养首先获得成功。l19581958年，英国科学家斯图尔德年，英国科学家斯图尔德(Steward)(Steward)和赖纳特和赖纳特(Reinert(Reinert) ) 用胡萝卜根的用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，为愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，为组

31、织培养的技术程序奠定了基础且证实细胞全能性理论。组织培养的技术程序奠定了基础且证实细胞全能性理论。3 3园艺植物组织培养的建立园艺植物组织培养的建立：从上世纪：从上世纪6060年代至现在是植物年代至现在是植物组织培养迅速发展的阶段。组织培养迅速发展的阶段。l 19621962年，年，MurashingeMurashinge和和SkoogSkoog在烟草培养中筛选出在烟草培养中筛选出MSMS培养基。培养基。l 19601960年科金年科金(Cocking)(Cocking)等用真菌纤维素酶分离番茄幼根原生质等用真菌纤维素酶分离番茄幼根原生质体获得成功。体获得成功。l 1964-19661964-

32、1966年，印度科学家古哈年，印度科学家古哈 GuhaGuha和和MaheswariMaheswari在曼陀罗花在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。l 19711971年塔克伯年塔克伯(Takebe)(Takebe)等用烟草叶肉细胞分离原生质体，并再等用烟草叶肉细胞分离原生质体，并再生完整植株。生完整植株。l 19721972年卡尔森（年卡尔森（CarlsonCarlson）等通过两个烟草品种之间原生质体）等通过两个烟草品种之间原生质体的融合，获得了第一个体细胞杂种。的融合，获得了第一个体细胞杂种。l 19781978年梅尔彻斯年梅尔彻斯(

33、Melchers(Melchers) )等首次获得了番茄和马铃薯的属间等首次获得了番茄和马铃薯的属间体细胞杂种体细胞杂种“PotamatoPotamato”。四园艺植物组织培养的应用四园艺植物组织培养的应用1园艺植物良种离体快繁园艺植物良种离体快繁：名贵品种、稀优种质、优良单株或新育成品名贵品种、稀优种质、优良单株或新育成品种的快速繁殖，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。种的快速繁殖，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例如一例如一株葡萄一年繁殖到株葡萄一年繁殖到3 3万多株，一株兰花一年繁殖到万多株，一株兰花一年繁殖到400400万株，万株，形成了形成了20世纪世纪60年代风靡全球

34、的年代风靡全球的“兰花工业兰花工业”。 牡丹、香石竹、唐菖蒲和菊花牡丹、香石竹、唐菖蒲和菊花等难以扦插的名贵品种以及无籽西瓜、草莓、猕猴桃、葡萄、菠萝、等难以扦插的名贵品种以及无籽西瓜、草莓、猕猴桃、葡萄、菠萝、柑橘、樱桃等的无性系快速繁殖。柑橘、樱桃等的无性系快速繁殖。 2无病毒园艺种苗培育无病毒园艺种苗培育：病毒分布不一致，新生组织及器官病毒含量很病毒分布不一致，新生组织及器官病毒含量很低，生长点几乎不含病毒，以低，生长点几乎不含病毒，以0.20.20.5mm0.5mm、带、带1 12 2个叶原基的茎尖为个叶原基的茎尖为外植体组织培养，可获得无病毒种苗。外植体组织培养，可获得无病毒种苗。病

35、毒使马铃薯减产病毒使马铃薯减产50%左右，左右，中国马铃薯的无病毒种苗栽培面积已超过总栽培面积的中国马铃薯的无病毒种苗栽培面积已超过总栽培面积的1/10，目前仍，目前仍在继续扩大之中。另外，在香蕉、苹果、甘蔗、葡萄、草莓、甜瓜、在继续扩大之中。另外，在香蕉、苹果、甘蔗、葡萄、草莓、甜瓜、花卉上均通过试管脱毒，建立了试管苗工厂及无病苗圃花卉上均通过试管脱毒，建立了试管苗工厂及无病苗圃。3 3培育新品种或创制新物种培育新品种或创制新物种：利用体细胞杂交、胚培养和遗传转基因工：利用体细胞杂交、胚培养和遗传转基因工程等可使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种。程等可使难度很大的远缘杂交

36、取得成功，从而育成一些罕见的新物种。利用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋利用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。白等优良性状的品种。甜橙甜橙( (C.sinenisC.sinenis Osbeck cv.Shamouti Osbeck cv.Shamouti) )胚性愈伤组织原生胚性愈伤组织原生质体和酸橙质体和酸橙( (Citrus aurantiumCitrus aurantium L.) L.)叶肉原生质体电融合再生叶肉原生质体电融合再生体细胞杂种；体细胞杂种；马铃薯种间体细胞杂种；马铃薯种间体细胞杂种；狗枣猕猴桃（狗枣猕猴桃

37、（Actinidia kolomiktaActinidia kolomikta) )与中华猕猴桃（与中华猕猴桃（A. A. chinensischinensis) )的对称体细胞杂种。的对称体细胞杂种。花培和单倍体花培和单倍体育种：育种：花药和花粉离体培育，使配子体的生长恢复为孢子体的生长，诱导花粉发育形成单倍体植株，以便快速地获得纯系，缩短育种周期、且有利于隐性突变体筛选，提高选择效率。 4 4园艺植物种质资源的离体保存园艺植物种质资源的离体保存：使用生长延缓剂或在液氮（使用生长延缓剂或在液氮（-196-196）条件下，加入冷冻保护剂，可使组织培养物的代谢水平降低，有利于条件下，加入冷冻保护

38、剂，可使组织培养物的代谢水平降低，有利于细胞、胚状体、试管苗、愈伤组织等的长期保存。细胞、胚状体、试管苗、愈伤组织等的长期保存。l 枇杷种质资源离体保存枇杷种质资源离体保存 ：多效唑多效唑(PP333)2-5mg/L(PP333)2-5mg/L、矮壮素、矮壮素(CCC)25mg/L(CCC)25mg/L、脱落、脱落酸酸(ABA)10mg/L (ABA)10mg/L 等生长抑制剂延缓枇杷试管苗的生长速度，延长保存时间。等生长抑制剂延缓枇杷试管苗的生长速度，延长保存时间。l 苹果试管苗苹果试管苗：MS+0.5mg/L BA+0.2mg/L IAA+0.5%MS+0.5mg/L BA+0.2mg/L

39、 IAA+0.5%甘露醇，甘露醇，44黑暗条件保存黑暗条件保存1212个月，存活率达个月，存活率达87%87%。l 铁皮石斛苗铁皮石斛苗：44黑暗条件保存黑暗条件保存1212个月后恢复正常生长。个月后恢复正常生长。 l 怀山药带芽茎段玻璃化法超低温保存怀山药带芽茎段玻璃化法超低温保存：继代生长继代生长60d60d的怀山药无菌苗置的怀山药无菌苗置44冰箱冰箱低温锻炼低温锻炼7d7d；在无菌条件下切取；在无菌条件下切取1-1.5cm1-1.5cm的带芽茎段，转至含的带芽茎段，转至含5%5%蔗糖蔗糖3%3%甘露甘露糖的培养基内，置糖的培养基内，置44冰箱预培养冰箱预培养2d2d；用；用60%60%的

40、的PVS1PVS1（22%22%甘油甘油13%13%乙二醇乙二醇13%13%聚乙二醇聚乙二醇10%10%二甲基亚砜）在室温下处理二甲基亚砜）在室温下处理60min60min，再用，再用100%100%的的PVS1PVS1在在00条件下处理条件下处理60min60min，随即迅速投入液氮；保存，随即迅速投入液氮；保存24h24h后，在后，在3737水浴中快速化冻，水浴中快速化冻，用含用含5%5%蔗糖的蔗糖的MSMS培养液洗涤培养液洗涤4 4次，每次停留次，每次停留10min10min；转至再生培养基（；转至再生培养基（MSMSKT KT 2mg2mgL LNAA 0.02mgNAA 0.02mgL L）再培养，成活率可达）再培养，成活率可达77.14%77.14%，再生苗与常温苗形态，再生苗与常温苗形态指标差异不大。指标差异不大。5生物制品工厂化生产：药物和次生代谢物质，如抗癌药物、