HPLC测定心宁胶囊中葛根素含量

1、HPLC测定心宁胶囊中葛根素含量摘要目的：采用HPLC测定心宁胶囊中葛根素含量，以控制该制剂的质量。方法：用十八烷基键合硅胶柱分离葛根素，以甲醇-水-磷酸(2807200.15)为流动相，检测波长250nm。结果：葛根素峰与其它组分峰的分离度大于1，理论塔板数以葛根素峰计算为8310；线性范围0.22g(r=0.9999)；平均回收率99.4%，RSD=2.47%(n=5)。结论：本法简便、快速，适用于该产品质量分析检验。关键词心宁胶囊；葛根素；HPLCDetermination of puerarin in Xinning capsule by HPLC assayWang Yonglin

2、(Wang YL),Tao Ling (Tao L),Zhou Baozhu (Zhou BZ) (Department of pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang,550004)ABSTRACTOBJECTIVE:To domminate the quality of Xinning capsule,the contents of Puerarin in Xinning capsule was determined by HPLC.METHOD:Puerarin was separated on Spherisorb C18 column and

3、detected at 250nm,by using methanol-water-phosphoric acid (2807200.15)as mobile phase.RESULTS:The resolution was greater than 1. The number of theoretical plates calculaled for Puerarin peak was 8310;The standard curve was linear over the range of 0.22g with the correllation coefficient 0.9999.The a

4、verage recovery was 99.4% with RSD=2.47%(n=7).CONCLUSION:The method is simple and fast,and can be used for quantitative analysis of Xinning capsule.KEY WORDSXinning capsule,puerarin,HPLC心宁胶囊系由葛根、丹参等中药经提取加工制成的胶囊剂，具有补气活血、通脉镇痛的功能。临床用于治疗冠心病、心绞痛。药理试验研究及文献资料12表明，葛根素是心宁胶囊中的主要有效成分。本实验采用HPLC对心宁胶囊中葛根素的含量测定方法进

5、行了研究，结果表明，该法操作简便、快速、重现性好，可用于心宁胶囊的质量控制。1仪器与试药LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外-可见分光光度检测器，C-R6A色谱数据处理机(日本岛津)。甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用)。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品25mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。2.2供试品溶液的制备取本品10粒的内容物，混匀，取约0.1g,精密称定，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理1h，放冷，称量，用甲

6、醇补足减失的重量，摇匀，取上清液离心作为供试品溶液。同法制备不含葛根的阴性样品溶液。2.3色谱条件岛津Shim-Pack CLC-ODS色谱柱(0.156.0 )；流动相：甲醇-水-磷酸(2807200.15)；流速：1ml/min;柱温：室温；检测波长：250nm(葛根素的最大吸收波长13)。2.4系统适用性试验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试液注入色谱仪，记录色谱(1)，从中可见葛根素峰保留时间约为12min，阴性样品谱在葛根素峰位置处无假阳性峰，即本试液条件下葛根素峰与其它组分分离完全。理论塔板数以葛根素峰计算为8310，葛根素峰与其它组分峰的分离度大于1。1心宁胶囊中葛根素HPL

7、CA对照品；B供试品；C阴性样品；1葛根素峰2.5线性关系考察精密吸取葛根素对照品溶液(0.1008mg/ml)2，4，6，8，10l进样，记录色谱，以峰面积(v.s)对重量(g)进行线性回归，回归方程为：c(g)=4.98610-6A-9.3510-4(r=0.9999)拟合成过原点的方程为：c(g)=4.979910-6A，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别代入两方程计算，结果的相对偏差为0.005%， 由此可看出截距近似为零，故采用外标一点法计算含量。线性范围0.22g。2.6精密度试验取一供试品按供试品溶液的制备方法制备供试液，重复进样5次，RSD为0.8%。2.7重现性试验取一供试

8、品按供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，RSD为0.85%。2.8回收率试验采用加样回收，精密称取已测定含量的同一样品7份，分别精密加入葛根素对照品，按供试品溶液的制备方法制备供试液，进样，记录色谱，计算回收率。平均回收率为99.4%，RSD为2.47%。2.9样品测定按供试品溶液的制备方法制备供试液，对照品溶液，分别进样，记录色谱，测定峰面积。测定了5批样品中葛根素含量，测定结果见表1。表15批样品含量测定结果.n=3批号含量/gRSD/%9703121.230.479704191.350.829704231.460.339705081.410.519705161.270.533讨

9、论 3.1葛根主要含黄酮类化合物(大豆苷、大豆苷元、葛根素等)、尿囊素、-谷甾醇、胡萝卜苷、香豆素等成分4，其中葛根素含量较高，文献报道56不同产地、生长季节及品种含量差异较大，鉴于大生产中的原料受产地、来源、品种等因素的影响，使测定结果产生较大的差异，故对葛根药材中葛根素的含量作了限度规定，葛根素含量以(C21H20O9)计，不得少于2.20%。3.2经稳定性试验考察，样品溶液在室温下(25)放置，每隔2h测定1次，5次测定的结果RSD为1.87%。说明样品液中葛根素含量在10h内稳定。3.3提取条件试验表明，选择不同浓度的乙醇、甲醇，在超声波浴中超声(功率125W)处理，结果基本相同(1.170.03)%。但乙醇作溶剂的供试液在色谱分离中柱效不如甲醇提取液好，由于流动相是甲醇体系，葛根素在柱中分离过程中乙醇有一定的展宽影响，甲醇则无此现象。故采用甲醇作溶剂超声处理提取分离样品中葛根素，具有操作简便、提取率高、杂质少等优点。含量测定方法的回收率、精密度高，重现性好。作者单位：王永林陶玲周宝珠 (贵阳550004贵阳医学院药学系)参考文献1阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用(1).北京：北京学苑出版社，1993：626.2王晓青，傅静.葛根的药理作用研究进展.北京中医药大学学报，1994，17(3)：39.3中国药典一部.1995：6