志贺氏菌检验

1、志贺氏菌检验革兰氏革兰氏阴性短杆菌阴性短杆菌增菌增菌增菌增菌分离分离初步生化试验初步生化试验血清凝集试验血清凝集试验革兰氏染色革兰氏染色增菌稀释瓶或具稀释瓶或具塞广口瓶塞广口瓶固体样品：固体样品：25g（电子天平）（电子天平）液体样品：液体样品：25mL（25mL吸量管）吸量管） + 225mLGN增菌液（量筒），混匀。增菌液（量筒），混匀。 培养（于培养（于361培养培养68h）注意：液体样品先用无菌注意：液体样品先用无菌NaOH或或HCl调节调节PH至至7.0。从阳性增菌液中用接种环取从阳性增菌液中用接种环取1环环HE琼脂平板，划线琼脂平板，划线1环环麦康凯琼脂平板，划线麦康凯琼脂平板，划

2、线361 1824h培养培养麦康凯琼脂麦康凯琼脂平板平板HE琼脂平琼脂平板板分离开始处开始处开始处开始处平板划线示意图平板划线示意图HEHE琼脂平板上的典型琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落不发酵乳糖菌落麦康凯琼脂平板上的麦康凯琼脂平板上的典型菌落特征：呈透典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落明，不发酵乳糖菌落初步生化试验取有明显典型菌落的取有明显典型菌落的HE或麦康凯琼脂平板或麦康凯琼脂平板（在放阳性物品处）（在放阳性物品处）或或典型菌落典型菌落（同一菌落）（同一菌落）三糖铁斜面：先划线，后穿刺三糖铁斜面：先划线，后穿刺葡萄糖半固体：穿刺葡萄糖半固体：穿刺于于

3、361培养培养1824h于于361培养培养1824h斜面划线方法斜面划线方法斜面穿刺方法斜面穿刺方法三糖铁斜面培养结果：三糖铁斜面培养结果：上层红色，下层黄色上层红色，下层黄色（产酸）（产酸）对照试验对照试验红色：产碱红色：产碱黄色：产酸黄色：产酸黑色：产硫化氢黑色：产硫化氢葡萄糖半固体培养葡萄糖半固体培养结果结果：沿穿刺线：沿穿刺线生长，无动力生长，无动力对照试验对照试验葡萄糖半固体葡萄糖半固体革兰氏染色结果：革兰氏染色结果： G-（红色，短杆菌，无荚膜，（红色，短杆菌，无荚膜，无芽孢）无芽孢）从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面取取1环，染色。环，染色。 在无菌室中固在

4、无菌室中固定，到微生物定，到微生物实训室染色实训室染色血清凝集试验从有典型志贺氏菌的从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面上用接种三糖铁斜面上用接种环取环取1环环玻片玻片用记号笔在玻片用记号笔在玻片中间画条线中间画条线 滴滴12滴灭菌滴灭菌生理盐水生理盐水滴滴12滴志贺滴志贺氏菌多价血清氏菌多价血清结果：志贺氏菌多价血清：凝固结果：志贺氏菌多价血清：凝固 灭菌生理盐水：不凝固灭菌生理盐水：不凝固革兰氏染色步骤： 涂片涂片 火焰固定火焰固定结晶紫初结晶紫初染染 水洗水洗 碘液媒染碘液媒染 乙醇乙醇脱色脱色 水洗水洗 吸干吸干 番红或番红或沙磺复染沙磺复染 水洗水洗 干燥干燥 镜镜检检 涂片：在载玻片中央滴

5、一滴生理盐水，用无菌操作法挑取涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。宜过多；涂片必须均匀。 火焰固定：载玻片通过火焰火焰固定：载玻片通过火焰1 2 次固定，不可过热，以载次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。玻片不烫手背为宜。 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，滴，染色染色1min。 水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。 碘液媒染：加碘液媒染碘液媒染：加

6、碘液媒染1min，然后用水冲洗至冲下的水，然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。呈无色为止。 乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要约需要20 30s。立即用自来水冲洗乙醇约。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水，用吸水纸吸干水分。纸吸干水分。 番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色滴，染色1 2 min。 水洗：用水水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。冲洗至冲下的水呈无色为止。 干燥：于室温下自然干燥。干燥：于室温下自然干燥。