参赤提取物对BSA致大鼠实验性肝纤维化的作用研究

1、第卷第期年月南京医科大学学报（自然科学版）（）参赤提取物对BSA致大鼠实验性肝纤维化的作用研究明志君，曹莉，王文祥，陈可冀（苏州大学药学院，中国中医研究所，江苏苏州）摘要方目的：观察参赤提取物对牛血清白蛋白（）致大鼠肝纤维化的治疗作用，为临床应用参赤提取物提供理论依据。法：采用静脉注射免疫性诱导大鼠肝纤维化模型。造模后，给予大鼠胃饲参赤提取物。检测大鼠血清肝功能及与肝纤维化相关的部分指标、肝组织羟脯氨酸含量（），并对肝组织进行病理学观察。结果：参赤提取物可使免疫性诱导的肝组织纤维增生、变性和坏死明显减轻。参赤提取物各组大鼠血清、及肝组织羟脯氨酸含量与模型组比较均显著降低；除低剂量组外，其余各给

2、药组大鼠血清较模型组显著升高。结论：参赤提取物具有保护肝细胞，维护肝功能，抗肝纤维化的作用，其作用机理与胶原代谢有直接的关系。关键词参赤提取物；肝纤维化；牛血清白蛋白中图分类号文献标识码文章编号（），（，）：（），（，）：，（），（），（），（），（），（）（）（）：；，（）：肝纤维化是指肝脏的慢性、实质性病变，在病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、再生及再生结节形成，结缔组织增生，导致肝小叶结构破坏等。肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经阶段，有效地预防、逆转肝纤维化可以延缓或防止肝硬化发生。近年来，国内学者在中医药防治肝维化方面取得了一定的效果。参赤提取物为赤芍（）和丹参（）的提取物，国内

3、外已有赤芍和丹参治疗肝纤维化的相关报道。本文将它们的提取物按一定比例混合，对其进行了抗肝纤维化的实验研究，并进一步探索其作用机制，为新药的研发提供实验资料。材料和方法主要药物及试剂参赤提取物（丹参提取物和赤芍提取物按重量比混合），来源于北京金桥时代生物制品研究发展中心，批号：。将药物配制成不同浓度，南京医科大学学报第卷第期年月置冰箱保存。秋水仙碱购自昆明股份制药有限公司产品，批号：。牛血清白蛋白（）购自上海源聚生物科技有限公司，进口分装（上海罗氏制药出品），批号：。福氏不完全佐剂为上海检测西巴斯生物开发有限公司产品，批号：。试剂：、放免试剂盒为上海海军医学研究所常规检测试剂。肝组织羟脯氨酸检测

4、试剂购自南京建成生物工程研究所，批号：相应的药物，正常组和模型组给予等量的生理盐水，治疗天。观测指标末次给药后，乙醚麻醉，取血，检测血清、及胶原的含量；取肝脏称重，计算肝重系数；每只称取肝脏，制备肝匀浆，用于肝组织羟脯氨酸测定；取左叶肝脏置福尔马林溶液中固定，染色，进行病理组织学观测。血清、按常规临床检测方法检测，、用放射免疫法测定。肝组织羟脯氨酸按试剂盒方法测定。实验动物大鼠，雌雄各半，体重（±），由苏州大学实验动物中心提供。模型制备及给药分组统计学方法数据以均数±标准差（±）表示，采用大鼠只，雌雄各半，分为组（每组只）：正常组、模型组、秋水仙碱组、参赤高剂量组

5、、参赤中剂量组及参赤低剂量组。除正常组外，大鼠采用朱启贵等的方法制备免疫性肝纤维化模型：将牛血清白蛋白（）的生理盐水与等量福氏不完全佐剂充分混匀，制成乳悬液。给予大鼠皮下多点注射，共次。第、次间隔周，其后隔周次；末次免疫后周开始，尾静脉注射，首次每只，每周次，其后浓度逐渐升至每只每次多组资料间比较采用方差分析，软件进行处理。肝组织纤维化程度采用等级序值统计法。结果参赤提取物对肝功能指标的影响除参赤低剂量组外，其余给药各组血清较模型组有显著升高（），各给药治疗组大鼠的血清及均明显降低，与模型组相比差异均有显著性（，表）。（，±），共次。造模后，各给药组灌胃给予表组别正常组模型组秋水仙碱

6、组参赤高剂量组参赤中剂量组参赤低剂量组参赤提取物对所致免疫性肝纤维化大鼠肝功能检测的影响剂量（）（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±与正常组比较，；与模型组比较，。影响参赤提取物对血清中与肝纤维化相关指标的给药各组大鼠血清中、与模型组比较均显著降低（，），见表。表组别正常组模型组秋水仙碱组参赤高剂量组参赤中剂量组参赤低剂量组参赤提

7、取物对所致免疫性肝纤维化大鼠血清中相关指标的影响剂量（）（，±）（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±与正常组比较，；与模型组比较，。第卷第期年月明志君等：参赤提取物对致大鼠实验性肝纤维化的作用研究参赤提取物对大鼠肝组织羟脯氨酸的影响给药各组肝组织羟脯氨酸含量与模型组比较均讨论有显著降低（，），且呈较为明显的剂量依赖性（表

8、）。表参赤提取物对所致免疫性肝纤维化大鼠肝组织羟脯氨酸的影响组织正常组模型组秋水仙碱组高剂量组中剂量组低剂量组几乎所有的慢性肝病均具有肝纤维化，进一步发展可形成肝硬化，严重影响患者健康与生命。肝纤维化是一个动态的过程，属可逆性病变。阻断、抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的重要目标。目前治疗主要从三方面入手：去除病因，防止原发病的损伤病因治疗是抗肝纤维化最有效措施之一；针对肝星状细胞（）活化和胶原代谢的抗纤维化治疗；肝纤维化细胞因子和基因的治疗。中医抗肝纤维化是我国的特色和优势，临床应用广泛。其作用机制常包括保护肝脏功能、抑制炎症反应、调节免疫反应、促进肝细胞再生、抑制胶原合成和促进胶原分解等多

9、个环节。有研究表明，中医活血化瘀法能显著减少肝胶原纤维总量及、型胶原沉积作用，并有明显的保护肝细胞作用。有临床报道静脉滴注丹参注射液可明显降低患者血清（，±）剂量（）肝羟脯氨酸（）±±±±±±与正常组比较，；与模型组比较，。参赤提取物对静脉注射引起的肝纤维化正常组大鼠肝组织未见异常，模型组大鼠肝组大鼠肝脏病理组织学的影响织绝大部分呈级纤维化，有肝细胞脂肪变性和灶性坏死。参赤提取物各剂量组治疗效果显著，且高剂量组最好，大部分大鼠肝组织为级纤维增生，肝细胞变性和坏死均有不同程度的减轻，与模型组比有统计学意义（，表，图，封三）。表

10、、一水平。丹参还可以抑制的活化与增殖，减少的合成，减低肝组织匀浆羟脯氨酸的含量，抑制胶原纤维特别是型胶原的增生，阻止纤维化的过程。也有研究表明复方的赤芍汤可显著降低大鼠血清、水平，减轻肝细胞脂肪变性及炎性细胞浸润，抑制（）肝纤维化坏死参赤提取药物对致肝纤维化大鼠的病理观察肝细胞组别水肿脂肪变正常组模型组秋水仙碱组高剂量组中剂量组低剂量组与正常组比较，；与模型组比较，。胶原纤维的合成与沉积的作用。参赤提取物为丹参和赤芍提取物，配伍临床上治疗肝纤维化，具有良好的疗效。本研究用尾静脉注射诱导建立实验性肝纤维化模型，其主要原理是异种血清蛋白进入机体引发免疫应答，在肝脏主要是在门静脉汇管区形成免疫复合物

11、沉积，沉积的免疫复合物引起局部炎性反应，激发各种细胞因子的产生，使肝星状细胞转变为肝纤维母细胞，分泌大量胞外基质，发生纤维化，此类模型为免疫性损伤，相对其他模型，整体损伤更小，更接近肝纤维化临床病例的发病机制，是一种理想的实验性肝纤维化模型。本研究利用该种肝纤维化动物模型，考察了参赤提取物对肝纤维化的治疗作用。实验结果表明：参赤提取物可明显改善肝纤维化模型大鼠的肝功能，降低血清中、水平，并可降低肝组织匀浆羟脯氨酸的含量。病理组织学检查结果显示：大鼠长期注射后，肝细胞受到损伤，局部出现南京医科大学学报第卷第期年月炎症、坏死，发生纤维化。参赤提取物各剂量组治疗效果显著，肝细胞变性和坏死均有不同程度

12、的减轻，说明参赤提取物对诱导的免疫性大鼠肝纤维化具有一定的治疗作用。其作用机理还有待进一步的探讨。参考文献合杂志，（）：宋家武，李绍白，张文荣血府逐瘀汤抗大鼠肝纤维化作用的研究中西医结合肝病杂志，（）：叶峰，刘昳，邱根全，等不同剂量丹参注射液治疗肝硬化的临床研究中药材，（）：蔡方刚，林永堃，翁山耕，等丹参对大鼠肝量状细胞转化生长因子与型胶原表达的影响中国现代医学杂志，（）：陶艳艳丹参及其化学成分抗肝纤维化作用机制研究进展中西医结合学报，（）：，：李延昌，孙玉凤，冯志杰，等赤芍抗肝纤维化的实验研究中国中西医结合杂志，（）侯长利复方甘草酸苷联合丹参抗肝纤维化疗效观察中国药房，（）：朱启贵，方步武，竺稽能牛血清白蛋白致免疫性肝纤维化动物模型