原花青素对大鼠实验性血栓形成的影响

1、原花青素对大鼠实验性血栓形成的影响         08-03-04 10:40:00     编辑：studa20               作者：蒋辛, 赵良中, 张海龙, 张军, 王化洲【摘要】  本研究旨在探讨原花青素（PC）抗血栓形成的作用及其机制。麻醉动物，然后给颈动脉局部施以20%三氯化铁溶液 20分钟，以造成大

2、鼠颈动脉血栓模型。实验分6组：假血栓（对照）组、血栓模型组、阿斯匹林10 mg/（kg·d）组、PC 100 mg/（kg·d）组、PC 200 mg/（kg·d）组及PC 400 mg/（kg·d）组。假血栓（对照）组和血栓模型组用生理盐水灌胃，其它各组分别用阿司匹林和PC低、中、高3个不同剂量悬液灌胃，每日2次，连续4周。观察各组药物对实验性血栓形成的大鼠血浆中的血栓烷（TXB2）和6酮前列腺素F1（6KetoPGF1）及血小板P选择蛋白（GMP140）含量的影响。结果发现： 与假血栓对照组比较，血栓模型组血浆TXB2和血小板P选择蛋白（GMP140

3、）含量明显升高，血浆6KetoPGF1含量明显降低，差异非常显著（P0.01）；与血栓模型组比较， 3个PC组和阿司匹林组大鼠血浆TXB2和血小板P选择蛋白（GMP140）含量明显降低，差异非常显著（P0.01），血浆6KetoPGF1含量明显升高（P0.01）；与阿司匹林组比较，3个PC组血浆TXB2和血小板P选择蛋白（GMP140）含量均不同程度降低，而血浆6KetoPGF1含量升高，其中尤以PC 400 mg/（kg·d）组最为显著（P0.01）。结论： PC具有明显的抗血栓形成作用，其抗血栓形成的机制与抑制血小板活化、聚集及保护血管内皮细胞密切相关。PC抗血栓形成作用有明显的

4、剂量依赖性。PC 400 mg/（kg·d）组的抗血栓作用优于阿司匹林10 mg/（kg·d）组。 【关键词】  原花青素血栓形成血小板活化血栓烷6酮前列腺素F1血小板P选择蛋白 Effects of Procyanidin Oligomers on Experimental Thrombosis in Rats        Abstract    The study was aimed to investigate the potential effect of

5、 procyanidins (PC) as antithrombotic agent  and   its mechanism. 48 male SD rats  were randomized into 6 groups, which include 8 rats each. Group A was normal control, group  B was model control  (no treatment),   group C was group treated with  aspirin&#

6、160; 10mg/（kg·d） ,  groups D, E and F were treated with low, medial and high dose 100, 200 and 400 mg/（kg·d） of PC  respectively.  In accordance with Kurzs protocols,  rats model of thrombosis of common carotid artery was contructed with FeCl3, but for goup A  

7、;  0.9% of normal saline was used  for 20 minutes.  The thromboxane B2 (TXB2), 6KetoPGF1 and GMP140 contents in plasma were measured. The results showed that  compared with the normal control group,  the contents of TXB2 and GMP140 in plasma markedly increased in  all o

8、f PC groups and aspirin group,   and the contents of 6KetoPGF1 in plasma decreased. Compared with the model group, the contents of TXB2 and GMP140 in plasma markedly decreased in all of PC groups and aspirin group, and  the contents of 6KetoPGF1 in plasma increased. Compared with the

9、aspirin group, the contents of TXB2 and GMP140 in plasma reduced in all of PC groups  and  the contents of 6KetoPGF1 in plasma increased which was obvious in PC 400 mg/（kg·d） group. It is  concluded that PC shows obvious antithrombosis effect, its mechanism closely correlates wit

10、h inhibition of  platelet activation and aggregation as well as protecting vasoendothelial cells. Antithrombosis of PC shows significant dosedependence.   The effect of the PC 400 mg/（kg·d）  surpass the aspirin, but  there is no significant difference between the PC 200

11、 mg/（kg·d）  and  aspirin. This study   provides experimental basis for clinical  prevention and treatment of thrombosis.    Key words    procyanidins；thrombosis； platelet activation； TXB2；6ketoPGF1 ； GMP140    原花青素（procyanidi

12、ns，PC）是植物界中广泛存在的一大类多酚化合物的总称，起初统归于缩合鞣质或黄烷醇类，随着分离鉴定技术的提高和研究的深入，现已成为一大类物质1-4，其化学结构式如下3：法国教授Jacques Masquelier 于1951年首次发现了PC的抗氧化性能。自上世纪60年代开始，欧洲的医生就知道用葡萄籽的提取物治疗枯草热和过敏症，并获得满意的效果；上世纪80年代初，法国医生用它治疗毛细血管脆化，慢性外周性静脉机能不全和视网膜微血管病等微循环疾病。PC作为一种天然强力抗氧化剂，安全无毒副作用。近年来，对原花青素的研究热点主要集中在抗氧化、抗心肌缺血再灌注损伤、抗高血压及调节血脂等方面5-9，而PC抑

13、制血栓形成的研究比较少见10,11，其作用机制尚需进一步阐明和验证。    中国实验血液学杂志  J Exp Hematol 2007; 15(3)原花青素对大鼠实验性血栓形成的影响  材料和方法    材料    原花青素粉剂（批号20040719）天津尖峰集团提供。阿司匹林粉剂（批号20040225）山东新华制药股份有限公司提供。血浆血栓烷（TXB2）放射免疫分析药盒（批号20050101）和血浆6酮前列腺素（6KetoPG）放射免疫分析药盒（批号20050101）均购置于北京市福

14、瑞生物工程公司。人血浆血小板P选择蛋白（GMP140）酶标试剂盒（批号20041210）购置于苏州大学血液研究所。这3种试剂盒均为人鼠通用。    实验分组和给药    48只健康SpragueDawley（SD）大鼠，雌雄各半，体重240-300 g，由锦州医学院实验动物中心提供。SD大鼠随机分为6组，假血栓（对照）组、血栓模型组、阿司匹林组、原花青素100  mg/（kg·d） 组、原花青素200 mg/（kg·d） 组和原花青素400 mg/（kg·d） 组，每组8只。原花青素和阿司匹林粉

15、末准确称量后用蒸馏水新鲜配制为悬浊液，按照表1分组与给药。    大鼠急性颈总动脉血栓模型的制备    依照Kurz13提供的方法诱导产生急性颈总动脉血栓模型。大鼠按照动物体重，以10%乌拉坦（1 /）腹腔注射进行全身麻醉。将麻醉后的动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，暴露一侧颈总动脉。将吸有20%三氯化铁溶液10 l的1 cm×1 cm的滤纸小片包裹在此段颈总动脉上，计时20分钟取下。假血栓组(正常对照）除不滴加三氯化铁溶液，而应用生理盐水代替外，其余手术步骤同模型组。    大鼠血

16、浆指标检测    末次给药后半小时，在麻醉下，暴露另一侧颈总动脉，用注射器抽取大鼠血液约6 ml，严格按照试剂盒说明书操作并检测各项指标，包括： TXB2、 6KetoPGF1、血小板P选择蛋白（GMP140）。    统计学分析    在Windows XP操作环境下，用SPSS  11.0统计软件进行分析与检验。各组实验值以均数±标准差（±SD）表示，数据应用t检验。其他组间比较采用单因素方差分析（F检验）及LSDt检验。P0.05被认为有显著性差异，P0.01被认为有非

17、常显著性差异。    结    果    大鼠血浆血栓烷B2（TXB2）和血浆6KetoPGF1含量的测定    血浆血栓烷和血浆6KetoPGF1含量测定结果见表2和图1。 由表2和图1可以看出，与假血栓（正常对照）组相比较，血栓模型组血浆中TXB2含量明显升高，有非常显著差异 （P0.01）；与模型组比较，PC 200 mg/（kg·d）、PC 400 mg/（kg·d）组及阿司匹林组10 mg/（kg·d）血浆中TXB2含量明显降低，有非常

18、显著差异（P0.01）；与阿司匹林组10 mg/（kg·d）比较，PC 400组血浆中TXB2含量未见显著差异（P0.05）。正常大鼠颈总动脉血浆6KetoPGF1含量保持较低水平。与假血栓组比较，血栓模型组血浆6KetoPGF1含量明显下降，具有非常显著差异（P0.01）；与血栓模型组相比，PC 200 mg/（kg·d）组和PC 400 mg/（kg·d）组血浆6KetoPGF1含量明显升高，差异具有显著性（P0.01）。与阿司匹林组10 mg/（kg·d）相比，PC 200 mg/（kg·d）组和PC  400 mg/（kg·d）组血浆6KetoPGF1含量明显升高，差异具有显著性（P0.01），并呈剂量依赖性。    大鼠颈总动脉血浆