基因工程特训(教师版)

1、基因工程拔高训练一、选择题1人的血红蛋白中有一种一珠蛋白，它的基因有1700个碱基对，其中有3个外显子，2个内含子，能编码146个氨基酸，下列叙述正确的有翻译蛋白质的信使RNA碱基数量多于438个 三个外显子的碱基数量约占整个基因的26非编码区是两个基因之间没有遗传效应的区段 内含子将编码区和非编码区隔开RNA聚合酶的结合位点位于非编码区A B C D答案 A2.基因工程常用的受体细胞有 大肠杆菌 枯草杆菌 支原体 动植物细胞A. B. C. D.答案 D3甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是A甲方法可建立该细菌的基因组文库 B乙方法可建立该细菌的cDNA文库C

2、甲方法要以核糖核苷酸为原料 D乙方法需要逆转录酶参与答案C4 PCR技术通过对目的基因进行扩增，可以得到大量的目的基因，下面对该技术的叙述，不正确的是A遵循的基本原理是DNA半保留复制和碱基互补配对B扩增仪内必须加入引物、原料和DNA聚合酶C每扩增一次，温度都要发生907555的变化D成指数式扩增，约为2n（n为扩增次数）答案 C5（10白牛高中模拟）下图示真核生物染色体组成， 1、2、3、4分别表示（）A.胸腺嘧啶、非编码区、内含子、外显子 B.胸腺嘧啶、非编码序列、外显子、内含子C.尿嘧啶、非编码区、外显子、密码子 D.尿嘧啶、非编码序列、内含子、外显子答案A6.下列图中关于P、Q、R、S

3、、G的描述，正确的是 AP代表的是质粒RNA，S代表的是外源DNABQ表示限制性内切酶的作用，R表示RNA聚合酶的作用CG是RNA与DNA形成的重组质粒DG是转基因形成的重组DNA质粒答案D7DNA分子有两条链组成，两链是反向平行的。每条链连接磷酸基团的一端用5作标记。另一端标记为3，下列四条DNA分子片段中，可以和R片段之间通过粘性末端结合的是（ ）A B C D答案C8.下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是A、 B、 C、 D、答案 C.9.质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许多细菌体内。质粒上有标

4、记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置（插入点有a、b、c），请根据表中提供细菌的生长情况，推测三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是 细菌在含青霉素培养基上生长情况细菌在含四环素培养基上生长情况能生长能生长能生长不能生长不能生长能生长A是c；是b；是a B是a和b；是a；是bC是a和b；是b；是a D是c；是a；是b答案 A.10.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是GGATCC ，限制酶II的识别序列和切点是GATC

5、。根据图示判断下列操作正确的是 注：GeneI 和Gene 表示两种标记基因 表示限制酶仅有的识别序列放大GGATCCCCTAGGGATCCTAG目的基因GGATCCCCTAGGGene IGene IIGATCCTAGA质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割B质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割C目的基因和质粒均用限制酶切割D目的基因和质粒均用限制酶切割答案A11 “X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示，其中第种DNA分

6、子有几个：（ ）A、2 B、4 C、6 D、8答案D12.（10内乡一高月考）花粉粒通道法是指利用植物受精后花粉萌发形成的花粉管通道，将目的基因导入尚不具备细胞壁的合子，形成含有目的基因的胚。经培养、筛选，可获得有特定性状的转基因植株。下列有关说法中不正确的是( )A为了减少盲目性，可以通过人工合成的途径来获得目的基因B目的基因导入受体细胞后，通过植物组织培养才能获得相应的植株C所得转基因植株个体发育的起点是受精卵，形成该植株时无脱分化过程D将目的基因导入叶绿体DNA中，可避免目的基因通过花粉传递而造成“基因污染” 答案B13.基因工程技术也称为DNA重组技术，其实施必须具备的四个必要条件是A

7、.目的基因 限制性内切酶 运载体 体细胞 B.重组DNA RNA聚合酶 限制性内切酶 连接酶C.工具酶 目的基因 运载体 受体细胞D.模板DNA 信使RNA 质粒 受体细胞答案C14在DNA 测序工作中，需要将某些限制性内切核酸酶的限制位点在 DNA上定位，使其成为 DNA 分子中的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶 Hind，BamH和二者的混合物分别降解一个 4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA 分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。据此分析，这两种限制性内切核酸酶在该DNA 分子上的限制位点数目是以下哪

8、一组？AHind1个，BamH2 个 BHind2个，BamH3个CHind2个，BamH1 个 DHind和BamH各有2 个15下列有关“基因探针”的叙述，不正确的是 A基因探针的工作原理是碱基互补配对B待测的DNA分子首先要解旋变为单链，才可用基因探针测序C待测的DNA分子可以直接用基因探针测序 D基因探针技术可用于疾病诊断和环境监测答案C16细菌抗药性基因存在于 A核区的DNA B RNA C质粒 D小的直线型DNA答案C17在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（ ）模板DNA 模板RNA DNA解旋酶 耐高温的DNA聚合酶 引物 PCR缓冲液 脱氧核苷酸贮备液 核苷酸

9、贮备液ABCD答案A18人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体加工合成。通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是A大肠杆菌 B酵母菌 CT4噬菌体 D质粒DNA答案B19质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是： ( )能自主复制不能自主复制结构很小蛋白质环状RNA环状DNA能“友好”地“借居”AB CD答案C20.水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp.Gly.Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( )A.促使目的基因导入宿主细胞中 B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测出来 D.使目的基因容易

10、成功表达答案：C21限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示。请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是 答案：D22下图是将人的生长激素基因导入细菌D细胞内，产生“工程菌”的示意图。所用的载体为质粒A。若已知细菌D细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌后，其上的基因能得到表达。能表明目的基因已与载体结合，并被导入受体细胞的结果是()A在含氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上均能生长繁殖的细菌B在含

11、氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上都不能生长繁殖的细菌C在含氨苄青霉素的培养基上能生长繁殖，但在含四环素的培养基上不能生长繁殖的细菌D在含氨苄青霉素的培养基上不能生长繁殖，但在含四环素的培养基上能生长繁殖的细菌答案：C23(2011天津宝坻一模)下列有关基因工程的叙述，错误的是()A从基因组文库中获取的某种生物的部分基因，可以实现物种间的基因交流B从cDNA文库中获取的目的基因，既无启动子，又无内含子C用人的胰高血糖素基因制成的DNA探针，检测人胰岛B细胞中的mRNA，可形成杂交分子D基因表达载体中的标记基因。不能含有限制酶的切割位点答案：C24(2011北京东城示范校联考二)降钙素是一种

12、多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图：获得的双链DNA经EcoR (识别序列和切割位 点GAATTC)和BamH (识别序列和切割位 点GGATCC)双酶切后插入大肠杆菌质粒中。下列有关分析错误的是()AKlenow酶是一种DNA聚合酶B合成的双链DNA有72个碱基对CEcoR 和BamH 双酶切的目的是保证目的基因和

13、运载体的定向连接D筛选重组质粒需要大肠杆菌质粒中含有标记基因答案：B25.利用生物工程改造生物特性，从而生产人类所需的产品。下列关于生物工程的相关知识，叙述正确的是 若要生产转基因抗病水稻，可将目的基因先导入到大肠杆菌中，再转入水稻细胞中植物体细胞杂交，能克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出的新品种一定不是单倍体基因治疗主要是对具有缺陷的体细胞进行全面修复利用基因突变原理培育成生产人干扰素的酵母菌利用基因工程手段培育成生产人胰岛素的大肠杆菌利用细胞工程技术培育成生产单克隆抗体的细胞系A. B. C. D. 答案：B26.下列关于生物工程中常见的几种酶的叙述，正确的是 ADNA连接酶可把目的基因与载

14、体的黏性末端的碱基黏合，形成重组DNAB限制性核酸内切酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子CTaq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA连接酶D纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体，便于植物杂交育种答案：B二、简答题1下图为一种限制酶切割DNA分子示意图。请回答问题：(1)这种限制酶的切点是_，形成_个_末端，该末端的特点是 。(2)从题干中可知限制性核酸内切酶识别序列的特点是 (3)如果G发生突变，可能发生 。答案：(1)G和A之间2黏性碱基序列互补(2)只能识别某种特定的核苷酸序列(3)限制酶不能识别切割位点2科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏

15、云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，“放入”棉花的细胞中与棉花的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题：（1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是_ _，此工具主要存在于_中，其特点是_ _。（2）苏云金芽孢杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”。具体做法是：用_酶将苏云金芽孢杆菌的_切成许多片段，然后将这些片段_ _，再通过_转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量_，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把_分离出来。（3）进行基因操作一般要经过的四个步骤是_、_、_、_。2（1）限制酶 微生物 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定

16、的位点切割（2）限制性内切 DNA 分别与运载体结合 运载体 复制 带有目的基因的DNA片段（3）提取目的基因 目的基因与运载体结合 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测和表达3.根据实验原理和材料用具，设计实验确定细菌质粒的抗菌素基因所控制的抗菌素的类别。实验原理：作为运载体的质粒，需要有标记基因，这一标记基因是抗菌素抗性基因。有抗性基因的质粒可用作运载体。材料用具：青霉素、四环素各10万单位溶液，菌种试管，灭菌的含细菌培养基的培养皿，酒精灯，接种环，一次性注射器，无菌水，恒温箱方法步骤：第一步：取3个含培养基的培养皿，分别编号为1、2、3号，用三支注射器分别向3个培养基中注入1ml无菌水

17、，青霉素液、四环素液，并使之均匀分布之整个培养基表面。第二步： 。第三步： 。结果预期： 。答案：第二步：将接种环在酒精灯上灼烧，在酒精灯旁用接种环挑取等量菌种，分别培养在三个不同的培养基上，置于恒温箱内，培养一段时间。第三步：将接种后的培养基放在37的恒温箱中培养24小时。预期结果：1号培养基内细菌正常生长，2、3号内的细菌死亡，说明细菌无抗青霉素基因，无抗四环素基因；1、2号培养基内细菌正常生长，3号培养基内细菌死亡，说明细菌有抗青霉素基因，无抗四环素基因；1、3号培养基内细菌正常生长，2号培养基内细菌死亡，说明细菌质粒无抗青霉素基因，有抗四环素基因；1、2、3号培养基内细菌都正常生长，说

18、明细菌质粒既有抗青霉素基因，又有抗四环素基因。4.下图为培育转基因小鼠的部分过程示意图。请回答下列问题：外源基因A细胞移植10-30个细胞到假孕母体内的输卵管中断尾分离DNA检测外源基因（1）若需在短时间内获得较多的外源基因，通常采用 技术。（2）图中的A细胞通常为 细胞，将外源基因导入该细胞常用的方法是 。（3）仔鼠出生后可用其尾巴进行DNA检测，通过 方法，检测出携带外源基因的小鼠。至于外源基因是否合成相应的蛋白质，可从转基因小鼠中提取蛋白质，并用相应的抗体进行 杂交，若有杂交带出现，则表明小鼠体内的外源基因 。（4）在外源基因导入小鼠的A细胞时，外源基因可能随机地插入到该细胞的DNA中。

19、这些细胞有的能发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析外源基因插入后导致有些A细胞死亡的最可能原因 。（1）PCR （2）受精卵 显微注射法 （3）DNA分子杂交 抗原抗体 已表达 （4）外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达（2分）5.大肠杆菌与人类的生产生活密切相关。据图表回答下列有关问题：图：利用lacZ基因失活筛选重组质粒示意图（1）科研人员用放射线处理某大肠杆菌获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如上表。突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是_。将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中，却能正常生长的最可能原因是_。（2）根据上表可知，营养物质甲、乙

20、对突变株A、B来说属于 （成分）（3）如图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列位于该质粒的lacZ基因中。若lacZ基因完整，便可表达出b-半乳糖苷酶，并能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，将形成白色菌落；pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。据此可知，作为受体的大肠杆菌应 ，以便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。图中获取人体基因时所用到的酶是 。试管中必需加入的酶是 。取用氯化钙溶液处理（增加其细胞壁的通透性）过的受体

21、大肠杆菌，置于试管中，并加入 。（4）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入_ _等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。（5）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果： 。 。【答案】（1）突变株A中缺乏合成营养物质甲所需要的酶使甲不能合成 B可以提供A生长需要营养物质甲，A可以提供B生长需要的营养物质乙 （2）生长因子 （3）不含氨苄青霉素抗性基因（或对氨苄青霉素敏感） 限制酶 DNA连接酶 在试管中制备好的DNA （4）IPTG和X-gal、氨苄青霉素 （

22、5）如果长出蓝色菌落，说明自连的运载体pUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体（或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌） 如果长出白色菌落，说明重组质粒已导入受体大肠杆菌6下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题：（1）若限制酶的识别序列和切点是GATC，限制酶的识别下列和切点是GGATCC，那么在过程中，应用限制酶 切割质粒，用限制酶 切割抗虫基因。过程在 （体内/体外）进行。（2）将通过过程得到的大肠杆菌涂布在含有 的培养基上，能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入，该培养基从功能方面属于 培养基。（3）重组质粒导入大肠杆菌的目的是 。（4）

23、经筛选分析，该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的 。（5）过程所用技术称为 ，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有 。6（1） （和） 体外 （2）四环素 选择 （3）大量复制目的基因（抗虫基因）（4）3/4 （5）植物组织培养 发育成完整个体的全部遗传物质7.抗旱植物体内的抗旱基因为R，旱敏基因为r。研究表明，多数抗旱性农作物能通过细胞代谢，产生一种代谢产物，调节根部细胞内的渗透压，此代谢产物在叶肉细胞内很难找到。（1）抗旱性农作物的叶肉细胞内难以找到与抗旱有关的代谢产物的原因是 。（2

24、）现已制备足够多的R探针和r探针，通过探针来检测某植物相关的基因型。请据图分析回答：某植物总DNAA B C扩增处理R或r基因单链DNA转移到滤膜上与滤膜上的探针进行DNA分子杂交R探针r探针在滤膜上形成的杂交斑图中扩增基因常用的方法是 。若已提取到某抗旱植物Rr的叶肉细胞总DNA， （能或不能）以DNA为模板直接扩增抗旱基因，扩增过程中寻找抗旱基因的位置依靠 。图中处理基因获取单链DNA常用的方法有 。滤膜上DNA分子杂交发生在 两者之间。若被检植物只发生A现象，则被检植物的基因型为 。7.（1）基因选择性表达 （2）PCR技术 能 引物 解旋酶处理或加热 探针与R或r基因 RR 8.为实现

25、目的基因与载体结合，以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质，研究人员进行了如图所示操作。请分析回答下列问题： （1）将_同时用BamH I切割并混合，加入_进行连接，再与大肠杆菌感受态细胞混合，最后，将混合物接种在含有_的平板培养基上。（2）切割后的载体用碱性磷酸酶处理，除去末端的5磷酸，可防止载体自我连接，目的基因片段不用碱性磷酸酶处理，仍然能与用碱性磷酸酶处理过的载体连接。在5组平板培养基上接种了不同操作的大肠杆菌感受态细胞，如下表所示。组别平板培养基上接种的大肠杆菌感受态细胞结果（菌落数）1未进行操作（只接种大肠杆菌感受态细胞）02导入未切割的载体10003导入切割并连接的载体4354导入

26、切割后用碱性磷酸酶处理并连接的载体255导入切割后用碱性磷酸酶处理，并与目的基因连接的载体34 第1组实验目的是确认_是否符合实验要求。第2组平板培养基菌落数目最大，说明大肠杆菌感受态细胞能够_。第3组实验用来检验_酶是否具有活性。第4组实验用来检验_酶是否具有活性。实验中用碱性磷酸酶处理载体可以降低仅有载体的菌落数，增加携带_ _的菌落比例。8.（1）含目的基因的DNA与载体（或质粒）（2分） DNA连接酶（1分） 氨苄青霉素（2分）（2）大肠杆菌感受态细胞和平板培养基（2分） 摄取载体（或质粒、外源DNA）（2分） DNA连接酶和限制（2分） 碱性磷酸（2分） 重组质粒（或重组DNA）（2

27、分）9.图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I、BzmH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题 (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 连接。(2)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 。(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有 种不同

28、长度的DNA片段。(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。在导人重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 。9答案（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖（2）平 537bp、790bp、661bp（3）4 （4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向链接10将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。请根据以上图

29、表回答下列问题。（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 。（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？_。（3）图1步骤所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ 。（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤转基因所用的细菌B通常为 。（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结

30、果作出判断。采用EcoR和Pst酶切，得到_种DNA片断。采用EcoR和Sma酶切，得到_种DNA片断。10答案：（1）耐高温 2）引物对B （3）否 （4）农杆菌 （5）2 111如图所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对碱基)上相应的EF区域 (0.2kb)，形成重组质粒pZHZ2。（1）所形成的重组质粒pZHZ2_。A既能被E也能被F切开 B能被E但不能被F切开C既不能被E也不能被F切开 D能被F但不能被E切开（2）已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点08kb，限制酶H切

31、割位点距限制酶F切割位点O5kb。若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样 品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为 kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中。（3）若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需将重组质粒pZHZ2导入至山羊的_细胞中。若pZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子山羊的方式是_ _。（4）上述目的基因模板链中的。TGA序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是_。一般而言，一个核糖体可同时容纳_分子的tRNA。（5）下列四幅图中能正确反映目的基因转录产物内部结构的是_。TSS：转录

32、起始位点，TTS：转录终止位点，STC：起始密码子，SPC：终止密码子【答案】（1）A（2）1.2 见右图 （3）受精卵 转基因山羊间相互交配 （4）UGA 2（或3） （5）B中（3端加上一个50200个的多聚腺苷酸序列，即 polyA尾，在5端加上一个7-甲基鸟苷三 磷酸的“帽”结构）12.请回答基因工程方面的有关问题：（1）利用PCR技术扩增目的基本因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物中为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占比例为 。在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。（2）设计引物是

33、PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如上图），请分别说明理由。第一组： ； 。（3）PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能反映DNA聚合酶的功能，这是因为_ 。（4）用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。12. （1）15/16 三 （2）引物I和引物II局部发生碱基互补配对而失效 引物I自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 （3）DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上 （4

34、）见右图13重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。右图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(图中引物2、引物3)，分别PCR，获得有重叠链的两种叫A片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。结合所学知识，分析下列问题：(1)引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性，引物中G+C的含量越高，结合稳定性 。(2)在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的

35、过程中，必须将引物1、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为 。(3)引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生 种双链DNA分子。(4)在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过 次复制。(5)若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括： 、 、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因。14.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma 切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点

36、越多，质粒的热稳定性越 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna 切割，原因是 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH 和Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。14【答案】（1）0、2（2）高（3）Sma会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）质粒和

37、含目的基因的外源DNA片段自身环化（5）DNA连接（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 （7）蔗糖为唯一含碳营养物质15.苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。 (1)将图中的DNA用HindIII、BamH I完全酶切后，反应管中有 种DNA片段。 (2)图中表示HindIII与BamH I酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得 种重组质粒；如果换用Bst l与BamH l酶切，目的基因与质粒连接后可获得 种重组质粒。 (3)目的基因插入质粒后，不能影响质粒的 。 (4)图中的Ti质粒调控合成的

38、vir蛋白，可以协助带有目的基因的TDNA导入植物细胞，并防止植物细胞中 对TDNA的降解。 (5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞 。 (6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的 基因频率的增长速率。15(1)4 (2)2 1 (3)复制 (4)DNA水解酶 (5)表面无相应的特异性受体(6)抗性16下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，图1中Cmlr表示氯霉素抗性基因，Ner表示新霉素抗

39、性基因。请回答下列问题：(1)将提取的质粒与外源DNA分别加入缓冲液中，选用相应的限制酶处理时，影响处理效果的外界因素主要是 等(写出两点)。(2)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，能否使用MspI与BamHI同时切割质粒与外源DNA?答： ，原因是 。(3)可选用 (两种)限制酶同时酶切质粒与外源DNA，酶切并连接后可获得 种含目的基因的重组质粒，筛选含有该重组质粒的大肠杆菌时，需要在含 的培养基上培养。(4)研究发现当CCGG序列在X酶作用下，其内部胞嘧啶残基发生变化后，MspI仍能识别并切割，但Hpa则不能识别，而BamHI和SmaI对类似变化也十分敏感，KpnI则不敏感。若在含有

40、图1所示质粒和X酶的缓冲液中，同时加入KpnI、Hpa、MspI和SmaI并完全酶切后，则最可能得到 种DNA序列。(5)为了从基因文库中分离获取T1噬菌体抗性基因，将重组质粒导入对T1噬菌体敏感的大肠杆菌，然后将含有该大肠杆菌的菌液分别接种在预先涂有 的培养基上培养，从而初步检测目的基因的表达。16(1)温度、pH (2)不能(1分) MspI会切割破坏质粒上的两个标记基因(1分)，而BamHI会切割破坏目的基因(1分) (3)KpnI、Smal 2 新霉素 (4) 4 (5)Tl，噬菌体1718右图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoR、BamH的酶切位点，amp

41、R为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoR、BamH在内的多种酶的酶切位点。据图回答：(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoR酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_、_、_三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行_。(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_。(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是_，其合成的产物是_。(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_。答案：(1