血府逐瘀汤促急性心肌缺血大鼠心肌血管新生及对血管内皮细胞生长因子的影响

1、血府逐瘀汤促急性心肌缺血大鼠心肌血管新生及对血管内皮细胞生长因子的影响         11-04-28 13:31:00     编辑：studa20                  作者：张秋雁1,王权礼1,苏剑峰1,邓冰湘1,蔡光先1,李雅【摘要】  目的 探讨血府逐瘀汤对急性心肌缺血大鼠缺

2、血心肌血管新生的影响及其分子学机制。方法 雄性SD大鼠,结扎冠状动脉左前降支复制急性心肌缺血模型,随机分为模型组、血府逐瘀汤组、麝香保心丸组,并设假手术组。造模后24 h各组灌胃给予相应药物或蒸馏水,每日1次,连续7 d,于第7日灌胃后1 h断头处死动物,取出心脏。用免疫组化法测定缺血心肌内皮细胞数和微血管密度,检测缺血心肌局部血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果 血府逐瘀汤组内皮细胞数、微血管密度及VEGF表达均明显升高,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 血府逐瘀汤能够促进心肌缺血大鼠缺血心肌血管新生,对缺血心肌具有保护作用,其作用机制可能与上调心肌局部VEGF蛋白

3、表达有关。 【关键词】  血府逐瘀汤；急性心肌缺血；血管新生；血管内皮细胞生长因子；大鼠Abstract：Objective To explore the protective effects of Xuefu Zhuyu Decoction of myocardial angiogenesis and molecular mechanisms rats with acute myocardial ischemia. Methods The left anterior descending coronary artery was ligated to make the model o

4、f myocardial ischemia in SD rats. The rats were divided into 4 groups at random：the model group, Shexiangbaoxin pills group, Xuefu Zhuyu Decoction group and the sham operation group, with 8 rats in each group. All groups were treated for 7 days by corresponding drug. After 7 days, all rats were kill

5、ed and the hearts were taken for detecting cardiac endothelial cell and the microvessel vascular density (MVD). The expression of VEGF at protein level was studied by immuneohistochemical method. Results Compared with model group, Xuefu Zhuyu Decoction could significantly enhance the levels of MVD a

6、nd expression of VEGF (P0.05). Conclusion Xuefu Zhuyu Decoction can promote angiogenesis in ischemic myocardium of rats. It has protective effect on acute myocardial ischemia in rats. Upregulating the expression of VEGF may be one of its mechanisms.Key words：Xuefu Zhuyu Decoction；acute myocardial is

7、chemia；angiogenesis；VEGF；rats 有研究表明,血府逐瘀汤可以明显减轻急性心肌缺血模型大鼠血清和心肌组织脂质过氧化损伤,有效减少缺血心肌酶的外漏；通过调节相关因子的蛋白表达,抑制缺血心肌细胞凋亡及坏死；明显提高心肌缺血大鼠血浆一氧化氮水平,降低内皮素含量,保护血管内皮细胞；改善血瘀模型大鼠的血液流变性1-3。本实验旨在探讨血府逐瘀汤对急性心肌缺血大鼠缺血心肌血管新生及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,现报道如下。1  实验材料1.1  动物清洁级SD大鼠,雄性,体重为(200±50)g,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,动

8、物许可证号：SCXK(湘)2009- 0004。1.2  药物    血府逐瘀汤处方组成：桃仁、红花、当归、生地黄、川芎、赤芍、牛膝、柴胡、桔梗、枳壳、甘草等,保持医林改错原方的剂量比例不变,由湖南省中药超微工程技术研究中心提供。麝香保心丸,由上海和黄药业有限公司生产,批号090208。1.3  仪器  DH-140动物人工呼吸机,浙江医科大学医疗仪器实验厂生产；四道生理记录仪(包括RM6280多导生物信号处理系统),成都仪器厂生产；HHS-2电子恒温不锈钢水浴锅,上海南阳仪器有限公司生产；LEICA DM LB2型双目显微镜,德国L

9、EICA公司生产；Haier医用微波炉,Haier集团生产；MIAS医学图像分析系统,北航公司生产；S2-93自动双重纯水蒸馏器,上海亚荣生化仪器厂生产；Shandon325型石蜡切片机,英国Shandon公司生产；DNP-9162型电热恒温培养箱,上海精宏实验设备有限公司生产；Motic B5显微摄像系统,麦克奥迪实业集团公司生产。1.4  试剂CD34兔源性多克隆抗体,批号BA0532；DAB显色试剂盒,批号AR1021；VEGF兔源性多克隆抗体,批号BA0407；即用型SABC免疫组化染色试剂盒,批号SA1022。以上试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供。2  实

10、验方法2.1  造模参照文献4方法,腹腔注射20%乌拉坦(0.5 mL/100 g)麻醉大鼠,固定,连接四道生理记录仪。行气管插管术,连接动物呼吸机。沿胸骨正中线左侧旁开12 mm处切开皮肤,暴露肋骨,从第4、5肋骨间剪开,轻轻插入开胸器,暴露心脏,用止血钳将心包膜前部轻轻剥开,然后用止血钳将左心耳轻轻提起,再用持针器持无创性小圆弯针在左冠状动脉前降支根部穿一根零号医用缝合线结扎血管。以心电图ST段的改变及左室前壁向外膨胀发绀为结扎成功标志。术后腹腔注射青霉素8万U/只×3 d,抗感染。2.2  分组与给药  成活大鼠随机分为模型组、血府逐瘀汤组、麝香保

11、心丸组,并设假手术组,每组8只。造模后24 h灌胃给药,每日1次,给药剂量10 mL/kg,连续7 d。假手术组及模型组灌胃蒸馏水；血府逐瘀汤组灌胃血府逐瘀汤13.68 g/(kg?d)；麝香保心丸组灌胃麝香保心丸悬溶液0.03 g/(kg?d)。于第7日灌胃后1 h麻醉大鼠后断头处死。2.3  缺血心肌内皮细胞数和微血管密度的测定    应用免疫组织化学法对各组大鼠缺血心肌组织中CD34进行测定,阳性点在光学显微镜呈黄色至棕褐色。操作按试剂盒说明书进行。用CD34多克隆抗体免疫组化染色后,血管内皮细胞被染成棕黄色。用Motic B5显微摄像系统400倍光镜视野下在心肌梗死边缘区随机选取5个视野,用MIAS医学图像分析系统分析计数内皮细胞,同时计数微血管,以5个视野的平均值为该份标本的内皮细胞数和微血管数(MVC),以MVC/mm2表示微血管密度(MVD)。2.4  心肌梗死边缘区血管内皮细胞生