厚朴酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用与γ-氨基丁酸的关系

1、厚朴酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用与-氨基丁酸的关系         08-06-03 11:24:00     作者：刘可云，黄贤珍    编辑：studa20【关键词】  厚朴酚；,脑缺血再灌注；,-氨基丁酸；,谷氨酸摘要：目的研究厚朴酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用与氨基丁酸（GABA）的关系。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，用高效液相荧光法测定大鼠脑组织谷氨酸（GLU）和GABA的含

2、量。结果厚朴酚可以明显降低脑缺血再灌注后GLU含量，增加GABA的含量。结论 厚朴酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用，该作用与其提高抑制性氨基酸GABA的含量，产生抑制性保护作用有关。关键词：厚朴酚；  脑缺血再灌注；  -氨基丁酸；  谷氨酸 Neuroprotective Effect of Magnolol against Focal Cerebral Ischemia-reperfusion Injury and the Relation to GABA in Rats Abstract：Objective To study the

3、protective effect of magnolol against focal cerebral ischemia-reperfusion injury and the relation to gamma- aminobutyric acid （GABA）in rats. MethodsThe middle cerebral artery occlusion(MCAO) model in rats was established to investigate the role of magnolol. The levels of glutamate (GLU) and GABA in

4、cerebral tissue were measured by high performance liquid chromatography-fluorometer (HPCLFR) method. ResultsThe levels of GLU markedly decreased while the levels of GABA obviously increased by magnolol in MCAO rats.ConclusionMagnolol could prevent MCAO rats from ischemia-reperfusion injury, the pret

5、ective effect is related to magnolol keeping dynamic balance of excition-inhibition ,and persisting inhibitiondepended effect.Key words：Magnolol;  Cerebral ischemia-reperfusion injury;  Gama-aminobutyric acid;  Glutamate    缺血性脑血管疾病是临床常见、多发且预后较差的疾病。脑缺血再灌注损伤的机理非常复杂，目前研究提

6、出的兴奋抑制失衡假说认为：脑缺血时脑内氨基丁酸(aminobutyric acid,GABA)的含量进行性下降，内源性抑制作用降低，兴奋性毒性增加，引起兴奋抑制失衡，是脑缺血损伤的重要因素之一1。另有报道，GABA及其拟似剂可以治疗脑缺血后因兴奋性氨基酸大量释放引起大脑的神经损伤2。因此抑制性神经递质可能成为临床防治脑缺血损伤新的靶点。厚朴酚(magnolol)是中药厚朴的主要活性成分，有报道3对脑缺血有保护作用。另有研究发现厚朴酚在体外对GABAA受体有激动作用4。但有关厚朴酚对脑缺血再灌注损伤保护作用与GABA的关系的研究目前国内外还没有报道。本实验采用大鼠大脑中动脉栓塞(middle c

7、erebral artery occlusion, MCAO)模型，观察厚朴酚对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用与GABA的关系。1  材料与方法1.1  主要药品和试剂厚朴酚由重庆医科大学药学院提供，纯度>90。甲醇(色谱醇)购自上海凌峰化学试剂厂。谷氨酸 (GLU)和GABA标准品购自上海试剂三厂。1.2  主要仪器美国惠普公司HP1050型高效液相色谱仪。德国BeckmanJ221型高速离心机。1.3  实验动物分组及给药方法40只健康清洁级Wistar大鼠，体重为（300±20）g，雌雄不限，购自重庆医科大学实验动物中心。随机分为

8、假手术组、脑缺血再灌注模型组、小剂量厚朴酚预处理组、大剂量厚朴酚预处理组，每组10只。其中厚朴酚预处理组于实验前3 d开始灌胃给药，给药剂量分别为25 mg/kg和75 mg/kg。1.4  大脑中动脉闭塞(MCAO)模型的制作    参照Longa等5的线栓法，用10水合氯醛(4 ml kg1，ip)麻醉大鼠，将麻醉后的大鼠仰卧位固定，消毒皮肤，铺无菌孔巾，颈正中切口，分离左侧颈总动脉，颈外动脉，颈内动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉切口处向颈内动脉插入栓线约(18.5±0.5) mm，感觉有阻力即达大脑中脉起始部，完全阻断其血流，

9、结扎颈内动脉。2 h后拔出栓线，再灌注24 h，即造成缺血再灌注模型。所用栓线为直径0.2 mm尼龙渔线，头段烧圆，顶端直径约0.250.28 mm。术中室温在（27±0.5）。术后缝合伤口，动物回笼。术中保持肛温恒定。动物清醒后出现以左前肢偏瘫为主的神经功能缺失表现为模型成功的标志。凡呼吸困难、术中出血量较大、术后30 min仍未苏醒者均弃之不用。假手术组除了不插栓线外，其余步骤同手术组。1.5  标本处理全部大鼠剪断头部，迅速取脑，在冰盘上分离缺血侧脑组织，电子天平准确称重，即刻冻存在-20冰箱。取脑组织于匀浆器内用甲醇反复充分溶浆3次，转移合并提取液至离心管内，置超声

10、波上处理30 min，10 000 rmin1，10以下冷冻离心30 min，将上清液转入液闪瓶内，80水浴使甲醇蒸发干,瓶内准确加入1.35 ml 0.1molL1的HC1，再超声处理30 min，使氨基酸充分溶出。将溶出物再次冷冻离心30 min，取上清液用于氨基酸分析。1.6  氨基酸分析 色谱条件：HP Hypersil ODS (4 mm×125 mm)5m ，流动相A：8.0 mmolL1磷酸缓冲液(pH 7.2)，流动相B：8.0 mmolL1 磷酸缓冲液(pH7.2)+甲醇+乙腈(50+35+15)，流量1.0 mlmin1，柱前自动衍生程序：设置自动进样程序为依次吸取1l OPA试剂，5l 0.1 molL1，pH 10.4硼酸缓冲液和1 l样品，梯度洗脱程序：0 min，0B