大黄素对泼尼松致大鼠脂代谢异常的预防作用研究

1、大黄素对泼尼松致大鼠脂代谢异常的预防作用研究 08-05-15 15:20:00 作者：刘钰瑜 崔燎编辑：studa20【摘要】 目的观察不同浓度大黄素对泼尼松致大鼠脂代谢异常的预防作用。方法3月龄大鼠给予泼尼松和药物90 d。观察血清生化指标、器官指数和骨髓基质细胞体外的成脂能力。结果给予泼尼松和药物90 d后大鼠高密度脂蛋白胆固醇降低，骨髓基质细胞体外成脂能力增强。大黄素90 mgkg- 1d- 1和大黄素270 mgkg- 1d- 1可升高高密度脂蛋白胆固醇和骨髓基质细胞体外成脂能力。结论大黄素对泼尼松引起的脂代谢异常有预防作用。 【关键词】 大黄素 糖皮质激素 血脂 骨髓基质细胞 大鼠

2、Abstract:ObjectiveTo determine whether emodin can completely prevent dyslipidemia in rats treated with prednison. MethodsThirty-five Sprague-Dawley male rats at age of 3 months were divided into five groups and treated for 90 days as follows: intact rats were given with vehicle as control; Prednison

3、e was given orally to the rats at dose of 3.0 mg/kg/d as the model group; Emodin at dose of 90mg/kg/d or 270 mg/kg/d were plus to the prednison treated rats and Integrated medicine (Calcium 375 mg/kg/d+VitD3 250 U/kg/d ) were plus to the prednison treated rats. The blood serum was separated for test

4、ing biochemistry indices. the MSCs were isolated by density-gradient centrifugation and cultured.ResultsRats treated with GC decreased serum HDL-Cholesterol and significantly increased serum sulfur compared with vehicle controls. Treatment with emodin markedly increased in the serum HDL-Cholesterol

5、level and decreased serum sulfur. Emodin prevented adipogenic differentiation of MSCs from prednisone-treated rats.ConclusionEmodin shows effect of prevention against Glucocorticoid -induced dyslipidemia in rats.Key words:Emodin; Glucocorticoid; Dyslipidemia; Marrow stromal cells; Rats 糖皮质激素在临床上应用极为

6、广泛，但长期大剂量使用可造成一系列严重的不良反应，脂代谢异常便是糖皮质激素长期应用的严重不良反应之一。脂代谢异常可以导致许多心血管疾病发生，如冠脉粥样硬化和中风等，同时也可能是糖皮质激素性骨质疏松的重要发病机制之一。大黄素(emodin)化学名为1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌(1,3,8-trihydroxy-6- methylan-thraquinone)，属于羟基蒽醌类。有降血脂作用1；能抑制3T3 L1小鼠前脂肪细胞分化为脂肪细胞，以及抑制脂肪酸合成酶的活性2。本实验观察大黄素对长期用糖皮质激素大鼠的脂蛋白水平和骨髓基质细胞的成脂分化能力的影响，为阐明糖皮质激素对脂代谢的影响和大黄素对

7、此的对抗作用提供进一步的实验依据。1 材料与方法1.1 材料DMEM（L）培养基购自Gibco公司；Percoll液购自amersham pharmacia公司；大黄素对照品由陕西省物资产业集团总公司提供；醋酸泼尼松（浙江仙琚制药股份有限公司，批号030605）；碳酸钙（广州化学试剂二厂，批号2002041201）；维生素D3（上海第九制药厂，批号020903，30万单位/ml）。高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒购自宁波市慈城生化试剂厂；总胆固醇测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司；碱性磷酸酶测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。1.2 仪器酶标仪（Bio-ELx-800型，美国）；电

8、感偶合等离子体直读光谱仪（日本岛津公司）；752紫外光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂）；AE240电子天平（Mettler-Toledo instr.shanghai Ltd）。NAPCO二氧化碳恒温培养箱：5420-1， Precision Scientific USA；XD-101倒置相差显微镜，江南光电股份有限公司。1.3 动物及其分组3月龄雄性SD大鼠（广东医学院实验动物中心提供）35只，普通级；分笼饲养，饲养于室温23，相对湿度80%的清洁环境中，自由摄食和摄水；使用标准饲料，其中钙含量1.33%，磷含量0.95%。随机分成5组，1组（对照组，7只）；2组（模型组，7只）；3组（阳

9、性对照组，7只）；4组（大黄素低剂量组，7只）；5组（大黄素高剂量组，7只）。1组每天上、下午灌胃给予含0.1%吐温80的生理盐水（溶剂对照）；，2组每天上午灌胃给予含0.1%吐温80的生理盐水，下午灌胃给予泼尼松3 mg/kg，其余3组每天下午以醋酸泼尼松3 mg-1kgd-1灌胃，上午给予下列药物：3组灌胃碳酸钙375 mg/kg +VitD3250 U/kg，4组灌胃大黄素90 mg/kg，5组灌胃大黄素270 mg/kg。所有动物给药时间为90 d。1.4 标本的制备和处理用戊巴比妥钠麻醉后心脏抽血处死，分离血清，用电感偶合等离子体直读光谱仪测定钙、磷、硫含量；分别采用连续监测法、磷钨

10、酸-镁沉淀法、酶比色法(CHOD-PAP法)测定血清中碱性磷酸酶、高密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇的含量。取出肝脏、胸腺、脾、左肾、左脑称湿重。1.5 大鼠骨髓基质细胞的制备及培养在1，2，3，5组动物中每组随机选取4只动物，分离股骨收集骨髓基质细胞。具体步骤：在无菌条件下分离大鼠股骨，切除股骨两端。用4C的DMEM(L)培养液从股骨上端往下冲出骨髓，8根股骨冲出的骨髓收集于同一烧杯中，混匀吹散细胞，2 000 r/min离心10 min，弃上清。沉淀用DMEM(L)培养液充分混匀，制成细胞悬液，轻轻叠加到等体积的密度为1 073 g L-1的4的Percoll分离液上，2 000 r/min离心

11、30 min后收集界面层细胞，用不含血清的DMEM(L)培养液离心洗涤后重悬，吹打均匀后以4105cm-2密度接种，37，5%CO2，饱和湿度的CO2孵箱静置培养。细胞融合后用0.25%胰酶消化传代。1.6 统计学处理计量资料以 表示。SPSS11.0软件行方差分析并行Bonferroni组间比较，双侧P0.05为统计检验显著性标准。2 结果2.1 大黄素对糖皮质激素大鼠内脏指数的影响大鼠处死后取下各器官称其湿重，以器官湿重除以体重得器官重量指数。实验结果显示各组动物的内脏指数无明显变化。表1 大黄素对糖皮质激素大鼠内脏指数的影响g(略)2.2 大黄素对糖皮质激素大鼠血清微量元素含量的影响给予

12、泼尼松90 d后，大鼠血清中硫含量明显升高。大黄素对此有预防作用，高、低剂量组可使血硫降低（P0.05），而复方钙组对此无预防作用，血硫含量与模型组相当。给予泼尼松90 d后，大鼠血清中钙、磷含量无明显变化。表2 大黄素对糖皮质激素大鼠血清微量元素含量的影响(略）2.3 大黄素对糖皮质激素大鼠血清生化指标的影响给予泼尼松90 d后，大鼠高密度脂蛋白胆固醇含量降低，碱性磷酸酶含量有下降的趋势。大黄素和复方钙均可升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL)含量和碱性磷酸酶含量，高密度脂蛋白胆固醇含量和碱性磷酸酶含量与对照组相当。表3 大黄素对糖皮质激素大鼠血清生化指标的影响(略）2.4 大鼠骨髓基质细胞自发成脂能力比较骨髓基质细胞传代后对照组和加药组梭形或三角形细胞较多，且细胞胞核较大，胞浆丰富。只看到小部分细胞自发分化为脂肪细胞，细胞内出现脂滴。激素组除了成纤维样细胞外，还有部分细胞变圆变大，细胞内出现密布的脂滴，细胞聚集处可见较多代谢产物堆积。见图14。图14为体内灌胃给予泼尼松和药物90 d后的各组大鼠的骨髓基质细胞传代培养时的细胞形态。3 讨论3.1 长期给予糖皮质激素可致大鼠脂代谢异常给予泼尼松90 d后，大鼠高密度脂蛋白胆固醇(HDL)含量降低。总胆