依托泊苷白蛋白微球的制备

1、    依托泊苷白蛋白微球的制备        摘要：目的：制备依托泊苷白蛋白微球，并对其形态学性质、载药量、体外释药特性进行研究。方法：用乳化热固化法制备依托泊苷白蛋白微球。结果：微球平均粒径(13.61±4.80) m，含药量为(18.25±0.18)%，药物包封率为(45.45±1.27)%，体外释药符合Higuchi方程：Q0.01591+0.09837t1/2(r=0.9975)。结论：用乳化热固化法制备的依托泊苷白蛋白微球外观圆整，载

2、药量较高，体外释药符合长效制剂特征。关键词：依托泊苷；白蛋白；微球Preparation of etoposide-loaded albumin microspheresZhang Zhiqing (Zhang ZQ)Yang Xiuling (Yang XL)Sun Li (Sun L)(Department of Pharmacy,The Second Affiliated Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050000)ABSTRACT：OBJECTIVE：To prepare the etoposide-bovine s

3、erum albumin-microspheres (VP-BSA-MS) and to study the properties of its morphology,drug loading and release in vitro.METHODS：The VP-BSA-MS was prepared by emulsion-heat stabilization techniques.RESULTS：The mean diameter of VP-BSA-MS was (13.61±4.80) m.The drug loading was (18.25±0.18)% an

4、d the embedding ratio was (45.45±1.27)%.The in vitro release properties of VP-BSA-MS could be expressed by the Higuchi?s equation:Q=0.01591+0.09837t1/2 (r=0.9975).CONCLUSION：The VP-BSA-MS prepared by emulsion-heat stabilization techniques was regular in its morphology with a high drug loading a

5、nd in vitro release properties conformed to long-acting preparations.KEYWORDS：etoposide,albumin,microspheres依托泊苷(etoposide,4-去甲基表鬼臼毒素-D乙叉吡喃葡萄糖苷，简称Vp-16)为鬼臼毒素的糖代谢产物，属细胞周期特异性抗肿瘤药物，主要用于治疗小细胞肺癌、淋巴癌等12，其主要毒性为骨髓抑制嗜中性白细胞严重减少3。选用牛血清白蛋白为载体采用乳化热固化法制备依托泊苷白蛋白微球(etoposide-bovine serum albumin-microspheres,VP-BSA

6、-MS)，通过控制微球粒径使其浓集于肺部，并在靶部位释放，以期提高依托泊苷在肺组织中的浓度，用于肺部肿瘤的治疗，提高疗效并降低其全身毒副作用。1仪器与药品UV-3000型分光光度计(日本岛津)；753BI微机型分光光度计(上海光学仪器厂)；ZRS-4智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)；XW-80A涡旋混合器(上海精科实业有限公司)；光学显微镜(重庆光学仪器厂)；S-450型电子扫描显微镜(日本日立)；依托泊苷(石家庄市协和药厂)；牛血清白蛋白(北京奥博星生物技术责任有限公司)；胃蛋白酶(北京市海淀区微生物培养基制品厂)；乙醚、氯仿等均为分析纯。2实验方法2.1依托泊苷白蛋白微球的制备依托泊苷具

7、有较好的热稳定性，故选用乳化热固化法制备依托泊苷白蛋白微球。采用序贯分析，以微球粒径、粒径分布、球型为指标，依次对乳化功率、蛋白浓度、超声时间、水/油比例进行单因素考察。固定以上条件，以微球载药量为指标，进行正交设计，见表1。经单因素考察和正交设计，确定为搅拌速度500 r.min-1，蛋白浓度 25%，超声时间为10 min，水/油比例为150，A，B，C三因素均选择水平3，D因素选择水平1，即：A3B3C3D1。依托泊苷白蛋白微球的最佳制备工艺为：将50 mg依托泊苷和25%牛血清白蛋白溶液超声混匀，搅拌下将其滴入50 ml精制大豆油中，乳化30 min，超声10 min得初乳。将初乳在搅

8、拌下缓缓加入到已预热至(85±5)的等量精制大豆油中，恒温固化40 min，搅拌冷至室温，离心，分离微球，用乙醚洗涤34次，自然风干。表1L9(34)正交试验因素水平表水平因素药物白蛋白乳化时间固化时间固化温度(A)/%(B)/min(C)/min(D)/120102085230203010534030401252.2依托泊苷白蛋白微球的形态学性质用电子扫描显微镜和光学显微镜观察微球的外观形态，采用显微计数法4考察微球的粒径及粒径分布，每次计数500个微球。2.3依托泊苷白蛋白微球的载药量2.3.1标准曲线的制备根据依托泊苷氯仿溶液紫外扫描谱，选定285 nm为检测波长。精密称取依托

9、泊苷37.5 mg于250 ml量瓶中，氯仿定容。分别取此液1，2.5，5，10，15，20 ml于25 ml量瓶中，氯仿定容。所得梯度溶液以氯仿作空白，在波长285 nm处测定吸光度A，回归出标准曲线方程。2.3.2回收率实验精密称取依托泊苷及空白微球适量于50 ml量瓶中，加0.5%胃蛋白酶溶液4 ml，分散均匀，(52±1)恒温水浴4 h。消解液以蒸馏水定容，精密吸取6 ml，加氯仿3 ml，涡旋混合，离心，吸取氯仿层，以氯仿作空白在285 nm波长测吸光度，按标准曲线方程计算含药量及回收率。2.3.3依托泊苷白蛋白微球载药量的测定精密称取依托泊苷白蛋白微球20 mg于50 m

10、l量瓶，按回收率方法消解后测定吸光度，按标准曲线方程计算微球载药量。2.4依托泊苷白蛋白微球的体外释药特性采用动态渗析法5：精密称取依托泊苷白蛋白微球50 mg置于透析袋内，加pH7.4磷酸缓冲液3 ml封口，装入转篮中，以250 ml pH7.4磷酸缓冲液作释放介质，(37±0.1)恒温释放(100r.min-1)，定时吸取介质6 ml，加氯仿3 ml涡旋混合，离心，取氯仿层在285 nm处测吸光度，并按标准曲线方程计算累积释放百分率(Q)。同时作依托泊苷原料释放实验。 3结果3.1微球的形态学性质依托泊苷白蛋白微球为白色粉末，流动性良好。电子扫描显微镜观察结果见1。由1可见微球外

11、观圆整，大小均匀，无粘连。微球粒径分布情况见表2，微球平均粒径(13.61±4.80)m，最小粒径2 m，最大粒径34 m。1依托泊苷白蛋白微球电子扫描显微镜观察结果A-×1000；B-×3000表2依托泊苷白蛋白微球粒径分布情况表粒径范围/m微球个数百分率/%26397.73696813.469129518.81121515330.3015187514.8518215110.102124203.96243030.59303410.20合计505100.003.2微球的载药特性经回归，得标准曲线方程A=5.692×10-4+6.883×10-3

12、C(r=0.9999,线性范围为6150 g.ml-1)。根据标准曲线方程计算微球载药量和药物包封率，结果见表3。依托泊苷白蛋白微球平均载药量为(18.25±0.18)%，药物包封率为(45.45±1.27)%。该方法回收率结果见表4。 表3依托泊苷白蛋白微球载药量和药物包封率.%批号载药量包封率980501118.15443446.81980501318.0644.64980501418.4646.22平均值18.25±0.1845.45±1.27表4回收率实验加入量/g测得量/g回收率/%平均值/%1514.724198.1

13、6073030.4856101.61876059.404699.007699.61±1.28120119.298499.4153120119.465299.87213.3微球的体外释药特性微球的体外释药情况见2。经拟合，释药曲线符合Higuchi方程：Q=0.01591+0.09837t1/2，r=0.9975,96 h累积释药百分率为94.39%，微球释药符合长效制剂特征。依托泊苷原料4 h累积释放97.81%。2依托泊苷白蛋白微球(.)及依托泊苷(°)体外释放曲线4讨论与结论血清白蛋白作为药物载体具有可生物降解、无抗原性、理化性质稳定等特点，在靶向微球制剂中被广泛应用，

14、并获得较满意的结果。抗癌药物靶向释放的关键是控制微球粒径。试验中发现，搅拌速度500 r.min-1，白蛋白浓度25%，超声10 min可制得粒径符合要求的微球，搅拌速度增快，微球粒径减小；白蛋白浓度越高，微球粒径越大；适当的超声可防止微球聚积和凝集，使微球粒径分布均匀，与文献报道一致67。微球的载药量还受固化温度的影响(P0.05)，随着固化温度的升高，微球载药量明显下降，且微球颜色逐渐加深：85固化得微球为白色，125为米黄色，160固化得微球则为深黄色。采用乳化热固化法制备的依托泊苷白蛋白微球，外观圆整，载药量较高，在接近体内环境的pH7.4磷酸盐缓冲液中具有明显的缓释作用。作者单位：张

15、志清(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）杨秀岭(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）孙莉(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）李素民(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）董佳丽（河北医科大学药学院94级实习生)樊德厚(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）蒋俊康(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）王川平(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）王淑梅(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000）参考文献：1Stahelin HF,von Warturg A.The chemical and b

16、iological route from podophyllotoxin glucoside to etoposide.Cancer Research,1991,51(1):15.2Aisner I,lee EJ.Etoposide:Current and future status.Cancer,1991,67(Suppl 1):215.3刘瑞林，李滨，杨铭，等.高效液相色谱法检测人血浆中的依托泊甙.药物分析杂志，1994，14(5)：40.4Gallo JM,Hung CT,Perrier DG.Analysis of albumin microsphere preparation.Int J Pharm,1984,22:63.5魏树礼，高智慧，