亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与低出生体重关系

1、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与低出生体重关系         11-05-19 16:52:00     编辑：studa20                 作者：吴涤 李静 杨艳芳 关明杰 王琨 秦荣【摘要】  目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与新生儿低出生体重的关系。 方法 采用

2、病例对照研究方法，收集108例正常体重儿和57例低出生体重儿和母亲的流行病学资料及母亲的静脉血标本，用PCRRFLP方法分析母亲MTHFR基因型，采用 Iogistic回归法分析母亲MTHFR基因型与新生儿出生体重的关系。 结果 调整主要混杂因素后，未发现MTHFR CT/TT基因型与低出生体重之间存在统计学关联(OR=1.13，95 % CI： 0.611.78 )。 结论 母亲 MTHFR基因多态性与低出生体重不存在统计学关联。 【关键词】  亚甲基四氢叶酸还原酶;多态性;基因;低出生体重【Abstract】 Objective To investigate the associ

3、ation between genetic polymorophisms of the methylenetetrahydrofolate reductase gene (MTHFR) in mother and low birth weight in the newborn.Methods A casecontrol design was used. Fiftyseven newborns with low birth weight were recruited as the case groups, and 108 newborn with normal birth weight as t

4、he control group. A facetoface questionnaire was administered to collect demographic and relevant information. Blood samples were collected from mothers of both groups. PCRRFLP method was applied to examine MTHFR polymorphisms. Logistic regression was used to analyze the association between genetic

5、polymorphisms of MTHFR gene in the mother and low birth weight in the newborn, while controlling for potential confounding factors. Results After adjustment for the main confounding factors, no statistical association was not found between MTHFR CT / TT genotype and low birth weight (OR=1.13, 95 %CI

6、: 0.61 1.78). Conclusion No statistical association between genetic polymorphisms of MTHFR gene and low birth weight was noted in this population.【Key words】 Methylenetetrahydrofolate reductase; Polymorphism; Gene; Low birth weight低出生体重作为早产、宫内发育迟缓、或二者兼有的表现结果，是新生儿死亡的主要因素之一 ,中国低出生体重儿发生率为活产婴儿的 5.87 %1。

7、低出生体重的发生存在很大的个体差异，但人们对导致这些差异的因素却知之甚少。许多环境因素被证明与低出生体重有关，但这些环境因素仅能解释极小的一部分差异。大量证据表明,低出生体重的发生是由遗传和环境因素共同作用的结果。有研究报道,先天性蛋氨酸同型半胱氨酸(methionine homocysteine，MetHcy)代谢异常引起的血管病变可导致胎儿宫内发育迟缓2。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)为同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)代谢途径的关键酶，MTHFR基因突变可使酶活性下降，造成血中Hcy增高。本研究通

8、过检测母亲MTHFR基因多态性，探讨该基因突变与新生儿出生体重的关系，为低出生体重发生机制研究提供科学依据。对象与方法一、对象20032006年在包钢集团第三职工医院住院分娩的108例正常体重儿(正常组)和57例低出生体重儿(低出生体重组)及其母亲。低出生体重儿的入选标准：(1)孕周>28周，体重<2 500 g;(2)正常分娩，剔除意外情况引起的早产儿;(3)剔除双胎或多胎、先天畸形儿。正常体重儿入选标准：选择同一医院出生的孕周28周、体重2 500 g、出生时间相差 <7 d、单胎正常活产婴儿;2组剔除妊娠期有合并症及并发症孕妇和新生儿。二、方法1.问卷调查：项目课题组成

9、员根据文献检索结果，考虑影响出生体重的相关因素设计调查问卷。采用统一问卷调查表，由经培训的调查员对每个孕妇进行面对面询问调查，获得详细社会人口学资料，同时询问母亲怀孕期间情绪、紧张程度、多梦、失眠状况、家人关照程度及怀孕期间每天使用计算机时间、看电视时间等自我感觉和行为因素。根据产房病例记录新生儿出生孕周、出生体重。母亲体重和血压为孕前健康体检时所检测结果。2.血样收集及DNA提取：用EDTA抗凝管经无菌操作取母亲外周血2 ml,4 保存, 24 h内按标准法 3 提取基因组DNA。3.基因型检测:(1)MTHFR(C677T)。聚合酶链式反应(polymerase chain reactio

10、n, PCR)扩增引物5CAAAGGCCACCCCGAAGC35AGGACGGTGCGGTGAGAGTG3(引物由上海生物工程公司合成)。12.5 l PCR反应体系中含有10×Buffer (Mg2+ 15 mmol/L )1.25 l, dNTP ( 0.2 mmol/L)0.25 l,上游引物 (5 mol/L)0.1 l,下游引物 (5 mol/L)0.1l,基因组 DNA 2.0 l, Taq DNA聚合酶 (2 MU/L) 0.5 l,灭菌双蒸水 8.3 l。反应条件为94 、5 min，94 、45 s，62 、40 s，72 、45 s，扩增35个循环，最后72延伸7

11、 min。PCR扩增产物245 bpDNA片段。(2)限制性内切酶消化。PCR扩增产物10 l,酶切缓冲液2 l,无菌去离子水7. 5 l,HinfI限制性内切酶5 U,37 水浴酶切6 h,2 %琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色(TaqDNA聚合酶、dNTP Mixture、Marker、购自大连TaKaRa宝生物公司，琼脂糖等试剂购自上海生物工程公司)。CC基因型显示245 bp片段;CT基因型显示245 bp、175 bp、70 bp 3条片段;TT基因型显示175 bp和70 bp 2条片段。4. 统计学处理：用SPSS 11.0统计软件进行统计分析。计数资料采用2检验，计量资料采用t检验

12、。根据等位基因的频率，用2检验对MTHFR基因型分布进行遗传平衡检验。用多因素Iogistic回归分析母亲MTHFR基因型与新生儿出生体重的关系，并调整身高、体重、文化程度、健康状况、收缩压、舒张压、分娩孕周、情绪、失眠、多梦、紧张、使用计算机时间、看电视时间及家人关照程度14个对出生体重可能产生影响的因素。结 果一、2组母亲及新生儿生理因素比较低出生体重组母亲收缩压、舒张压、心率、首次月经年龄(简称月经首龄)高于正常组，睡眠时间长于正常组，分娩孕周和新生儿体重低于正常组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。表1 2组母亲及新生儿生理因素比较二、2组母亲社会和行为因素比较低出生体

13、重组初中以下文化程度比例高于正常组，每天看电视时间少于1 h者高于正常组，心情愉快的比例低于正常组，有时失眠的比例高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)。三、母亲MTHFR基因多态性与低出生体重关系MTHFR基因型分布，108例正常体重组母亲中，MTHFR基因CC型为48.1 %(52/108)，CT/TT型为51.9 %(56/108)，57例低出生体重儿母亲中，MTHFR基因CC型为45.6 %(26/57)，CT/TT型为54.4 %(31/57)，2组构成比差异无统计学意义(2=0.75,P>0.05),符合HardyWeinberg平衡。表2 2组母亲社会和行为因素比较 例(%)四、母亲MTHFR基因多态性与低出生体重关系单因素分析，57例低出生体重儿母亲与108例正常体重组母亲MTHFR基因第677位点CT/TT基因型与CC基因型相比，未发现MTHFR基因CT/TT基因型与新生儿低出生体重发生危险之间存在统计学关联(P=0.75，OR=0.90，95 %CI：0.491.68) ;将单因素分析