分光光度法测定中药及制剂成分含量时空白液制备方法研究

1、    分光光度法测定中药及制剂成分含量时空白液制备方法研究         摘要：建立薄层洗脱方法制备中药及制剂的空白液，考察药典载马钱子、槐米、复方银黄口服液的分光光度测定法，结果表明空白液的干扰占其含量的16%以上。建议用分光光度法测定中药及制剂中成分含量时，应考虑被测药本身所含的干扰成分。关键词：分光光度法； 空白液制备； 含量测定中分类号：R927.2A Study on the Method for the Preparation of Blank Solutio

2、n in the Assay of Chinese Medicines and Preparations by SpectrophotometryZhang Lanzhen(张兰珍), Zhang Hui(张辉), Liu Yang(刘洋)(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)A method for the preparation of blank solution of Chinese medicines and preparations by thin layer wash was esta

3、blished. The survey of pharmacopia spectrophotometry assay methods for Semen strychni pulveratum, Flos sophora immaturus and Fufang Yinhuang oral liquid indicated that interferential constituents of blank solution hold more than 16% of the content. It is suggested that the interferential constituent

4、s should be considered in the assay of Chinese medicines and preparations by spectrophotometry.KEY WORDS: Spectrophotometry; Blank solution; Assay分光光度法测定中药制剂成分含量时，通常要配制去掉被测药的群药作为空白群药考察干扰，没有考虑被测药本身所含的干扰成分12。中药材的测定经常不配空白液或只以其中的某一成分作为干扰进行考察3，致使测定结果偏高45。如何准确配制空白液以及被测药所含干扰成分对测定的影响，至今没有研究报道。因此我们建立了薄层洗脱方法制

5、备空白液，研究被测药干扰成分对分光光度测定法的影响，结果表明药典载马钱子、槐米、复方银黄口服液的分光光度测定法，没有消除掉被测药材本身的干扰，空白干扰高达16%以上。1仪器与试药紫外-可见分光光度计：日立UV-2000（日本）；马钱子粉 Semen strychni pulveratum由北京中医药大学炮制室提供；槐米Flos sophorae immaturus由北京中医药大学鉴定室张桂燕老师鉴定；复方银黄口服液由北京东升制药厂生产，批号为981014；薄层用硅胶GF254由青岛海洋化工厂生产；士的宁、芦丁、黄芩甙均购自中国生物制品检定所；试剂均为分析纯。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精

6、称士的宁3 mg、芦丁3 mg、黄芩甙4 mg分别用甲醇溶解定容于10 mL容量瓶中备用。2.2样品液的制备取马钱子粉1.6 g ，精密称定，加氯仿20 mL，浓氨水0.3 mL于锥形瓶中，超声提取约40 min , 过滤。回收溶剂至干，无水乙醇转移定容于10 mL容量瓶中备用。取槐米粉1 g ，精称，置索氏提取器中加乙醚120 mL回流提取至无色。放冷，弃去乙醚液，挥去样品上乙醚后再用甲醇90 mL回流提取至提取液无色。回收甲醇至小体积，转移定容至10 mL容量瓶中备用。精密吸取复方银黄口服液6 mL，无水乙醇定容于10 mL容量瓶中备用。2.3空白液的制备及药典法的考察(1) 取自制硅胶G

7、F254板（15cm×5cm）3块，刮制成楔形板，在板1的狭部点士的宁10L成条状，板2狭部点马钱子液100 L成条状，板3不点样。分别用S1：乙醚-甲醇（91）上行展开10 cm ，取出凉干，再用S2：乙醚-甲醇-氨水( 740.2 ) 2次展开，见1。在荧光灯下刮取板2的士的宁部分硅胶作阳性a ，板3与士的宁相同位置相同面积的硅胶作阳性参比 a'。刮取板2前沿以下的剩余硅胶作空白 b ，板3前沿以下剩余硅胶作空白参比 b'。用氯仿分别将四部分硅胶洗脱4次，每次1015 mL，过滤，滤液浓缩至约5 mL，按药典法用0.5 mol/L硫酸萃取定容至10 mL容量瓶中。

8、     1马钱子粉的TLC在UV-2000上测出阳性a与空白b在230340 nm的紫外吸收光谱，见2所示，空白液与阳性液的吸收曲线几乎重合，在药典的双波长262 nm，300 nm处测阳性液与空白液的吸收度差值，空白液约占阳性的50%，所以药典法要比实际值偏高4。     2马钱子粉中士的宁与空白的UV     3槐米的TLC     4槐米中芦丁与空白的吸收光谱（3） 按(1)法在板1点黄芩甙10 L，板2点复方银黄口服液150

9、L，乙酸乙酯-甲酸-水（710.9）展开，见5。按(1)法刮取四部分硅胶，乙醇洗脱，过滤，浓缩干后按药典加0.2 mol/L HCL溶解定容至10 mL。测阳性与空白液在200340 nm的紫外吸收光谱，见6，在药典的双波长278 nm，318 nm处测吸收度，空白占阳性的16%，所以药典法结果偏高5。     5复方银黄口服液的TLC     6复方银黄口服液阳性与空白的UV3讨论本实验表明由于空白液制备中没有考虑被测药材所含的干扰成分，使分光光度法测定中药及中药制剂成分含量时结果偏高。用薄层洗脱法除去被测成分得到的空白液，不仅可以消除被测药本身所含的干扰成分，还可以减少用除去被测药的群药所制备的阴性液与制剂用药不同带来的误差，使测定结果更接近真实值。张兰珍，女，36岁，医学硕士，副教授张兰珍（北京中医药大学北京100029 ）张辉（北京中医药大