阴道海绵栓_羊乐_中醋酸氟孕酮体外释放规律研究

1、阴道海绵栓 “ 羊乐”中醋酸氟孕酮体外释放规律研究何晓红 , 杨利国 3(南京农业大学动物繁育研究所 , 江苏 南京 210095摘要 :根据 Martindale 药典中的体外释放方法 , 研究分别含醋酸氟孕酮 (FG A 30, 40和 50mg 的 “羊乐”和法国产品Synchropart 在 12d 内释放 FG A 的规律 。 结果发现 , 3种规格的 “羊乐”和 Synchropart 中 FG A 每天释放量均呈下降趋势 , 12d 内各剂量组释放量的平均值分别为 2101±1103, 2120±1122, 3121±0188和 2109±

2、0140mg d -1。 在第 3和第 4天 , 各剂量组 FG A 释放量达到高峰 , 以后释放量逐渐降低 , 至第 12天各剂量组的释放量最低 。回收实验中 , 各剂量组的回收 率分别为 88123%, 86148%, 99140%和 90100%。 运用 SPSS 软件分析 FG A 海绵栓的释放模型 , 发现释放量 y 1、 y 2、 y 3和y 法国 (分别表示 3种规格的 “ 羊乐”和 Synchropart 的 FG A 释放量 与释放时间 (d 关系如下 :y 1=316436-012517d ; y 2=316718-012260d ; y 3=319390-011129d

3、和 y 法国 =215505-010705d 。关键词 :阴道海绵栓 ; 氟孕酮 ; 释放规律中图分类号 :R96512 文献标识码 :A 文章编号 :1000(0204The acetate (FGAsponges Yangle in vitroHE X iao 2hong , Y ANGLi 2guo 3(Institute of Animal Reproduction and Breeding , Nanjing Agric Univ , Nanjing 210095, China Abstract :According to the description of Martindale

4、pharmacopoeia , the release dynamic of fluorogestone acetate (FG A in intravaginal sponges containing 30, 40or 50mg of FG A and Synchropart (from France individually was studied in vitro for 12days. The results showed that there was no differences am ong four types of sponges and decreased gradually

5、 day by day for the release am ount of FG A. The average release am ount of four types of sponges was 2101±1103, 2120±1122, 3121±0188and 2109±0140mg d -1, respectively. The release am ount of FG A reached the top on day 3and 4, and then lowed gradually and reached the bottom on d

6、ay 12. In the recycling trials , the recycling rates for four types of sponges were 88123%, 86148%, 99140%and 90100%, respectively. The formulas of FG A release am ount for type 1, 2, 3and Synchropart of sponges (presented in y 1, y 2, y 3and y (France were y 1=316436-012517d , y 2=316718-012260d ,

7、y 3=319390-011129d , and y France =215505-010705d (where d represented the day observed .K ey w ords :intravaginal sponges ; fluorogestone acetate (FG A ; release“ 羊乐”是由南京农业大学动物繁育研究所研制 、 浙江台州永安兽药有限公司生产的孕激素阴道海绵栓商品名 , 有效成分为醋酸氟孕酮 (FG A 。 FG A 又名氟孕酮乙酸酯 , 是人工合成的高效孕激素类似 物 , 广泛应用于诱导发情 、 同期发情 、 超数排卵 、 胚胎移植和

8、繁殖疾病的治疗 。 1965年 , R obins on 首先 报道运用 SC 9980(一种醋酸氟孕酮阴道海绵栓的商品名 诱导母羊同期发情排卵成功 1。用 FG A 阴道海绵栓诱导发情 , 其效果受很多因素的影响 , 如 FG A 剂量 、海绵栓放置时间 、处理羊 品种 2、 年龄 3,4以及处理季节 5等 。 尤其是 FG A 剂量起很重要的作用 , 不仅影响作用效果 , 还与放置 时间长短有关 。 据国外文献资料报道 , 用含 FG A 30, 40或 50mg 的阴道海绵栓处理母羊 , 均能诱导发 情和同期发情 6,7, 但作用效果差异很大 。本研究根据 Martindale 药典介绍

9、的方法 , 研究 12d 内不同剂 量 组 “羊乐” 中 FG A 在体外的释放规律 , 旨在为合理选择阴道海绵栓中 FG A 剂量和确定海绵栓放置时 收稿日期 :20011121 基金项目 :国家农业科技跨跃计划 (200114 ; 江苏省农业三项工程 SX (2001 047 作者简介 :何晓红 (1979 , 硕士。 3通讯作者 C orresponding author :杨利国 (1962 , 教授 , 从事动物繁育和生物技术研究。Email :animrep mail. njau. edu. cn南京农业大学学报 2002, 25(2 :7578Journal o f Nanjin

10、g Agricultural Univer sity间提供理论依据 。1 材料与方法111 材料FG A 及其标准品由浙江永安兽药有限公司提供 。 “羊乐”由南京农业大学动物繁育研究所研制 , 有 3种规格 , 分别含 FG A 30, 40和 50mg 。 Synchropart 由法国 Searle 公司提供 (FG A 含量 40mg , 用于对照 。112 释放方法参考文献介绍的方法 3, 先自制不锈钢支架 , 用超声波清洗机清洗 30min , 再用清水洗净 , 放入干 燥箱内干燥 , 防止表面污物影响实验结果 。然后取每种规格的 “羊乐”和不含 FG A 的海绵栓各 3个 , 将每

11、个栓固定在自制的不锈钢支架上 , 分别放入 250m L 锥形瓶中 , 加入预热至 (60±011 的去离子 水 230m L , 用自制塞子塞好 (防止实验过程中的水分蒸发 , 再用胶布固定好不锈钢支架 , 使海绵栓全 部浸入去离子水中 , 且不接触锥形瓶塞 。将锥形瓶置于预热至 (60±011 的恒温震荡器中 , 1r -2315h 后取出海绵 栓 , 置入另一 250m L 锥形瓶中 , 加入预热至 (60±011 溶液加入 15m L 甲醇 , , , FG A 含 量 。 每天重复以上步骤 , 113 回收试验、 法国产品和不含 FG A 的阴道海绵栓

12、(即阴性对照 各 3个 , 将每个海 绵栓用 10m L 甲醇溶液洗涤 5次 , 收集溶解液 , 用甲醇定溶至 50m L , 摇匀 。 取 3m L 加去离子水定溶至 50m L , 震荡摇匀 , 待测 。 114 FGA 含量测定FG A 标准品用去离子水 甲醇 (去离子水与甲醇的体积比为 47 3 溶液溶解 , 配制成浓度为 5, 7, 10和 15g m L -1的标准液 , 常温遮光保存 。用 UV 751型紫外吸收分光光度计于 238nm 波长测定标准液和待测液的吸光值 , 然后参考标准品浓 度计算待测样中的 FG A 含量 。 115 数据分析用 SPSS 计算机软件分析 FG

13、A 每天释放量 ( x ±S E , 并进行差异显著性检验和回归分析 。回收率 为实测值与理论值的百分比 。2 结 果211 回收率 测定 3种规格 “羊乐”和法国产品的 FG A 含 量 , 计 算 回 收 率 分 别 为 88123%, 86148%, 99140%和 90100%。 各组的重复性都较好 , 组内差 异较小 (表 1 。 212 FGA 每日释放量由表 2可见 , 各剂量组在实验开始的第 3或第4天 FG A 释放量达到高峰 , 从释放高峰到第 7天各 剂量组一直保持较高的 FG A 释放量 , 第 812天 FG A 的释放量逐渐降低 。各剂量组 12d 中的释

14、放 量总体都呈下降趋势 , 但仍有起伏 。 30mg 剂量组 起伏最大 , 40mg 次之 , 50mg 组第 3, 法国产品最 小 。表 1 3种规格 “ 羊乐”和 Synchrop art 中 FG A 的回收率T able 1 The fluorgestone acetate (FG A recycling resultin Synchrop art and three types of intravaginal sponges 剂量 /mgFG A content per sponge观察值FG A content observed回收率 /%Recycling rate35198&#

15、177;311290100 3Synchropart (France 67 南 京 农 业 大 学 学 报 第 25卷 到达释放峰后 , 50mg 剂量组释放量从 4121mg d -1下降到 2113mg d -1, 变化幅度为 2108mg ; 30mg 剂量组从 3126mg d -1下降到 0143mg d -1, 下降幅度 2183mg ; 40mg 剂量组从 3162mg d -1下降到 0154mg d -1, 下降幅度 3108mg ; 法国产品由 2167mg d -1下降至 1153mg d -1, 下降幅度 1114mg 。 在第 3, 7, 8, 9和 10天 , 50

16、mg 剂量组的 FG A 释放量大于 30mg 剂量组释放量 (P <0105 。 但在 12d 的实验 时期内 , 3个剂量组释放量的差异并不显著 。比较同一天内 3个剂量组 FG A 释放量的平均值 , 发现实验刚开始时 , 各剂量组释放量差异较大 , 随着实验的进程 , 各组差异逐渐减小 , 到第 5天各组差异最小 , 第 5天 3个剂量组释放量的平均值为 (3136±0161 mg , 第 612天各组释放量的差异又逐渐增大 , 第 12天各剂量组释放量的平均值为 (1103±0193 mg d -1。213 氟孕酮释放模型运用 SPSS 软件分析 FG A

17、释 放规律 , 得出释放规律模型 , 并 将释放量延续至 15d 。y 1=316436-012517d y 2=316718-012260d y 3=319390-011129d y 法国 =215505-0y 为 FG A ;时间 (天 。由图 1可 知 , 3种 规 格 的 “ 羊乐”中 FG A 的释放模型为斜 率小于 0的线性模型 , 30mg 剂 量组 的 斜 率 绝 对 值 (012517 大于 40mg 剂量组 (012260 , 更大于 50mg 剂量组 (011129 和法国产品 (010705 。据模型 推测 , 在第 15天 , 30mg 剂量组 的 FG A 理论释放

18、量近似于 0mg , 40mg 剂量组小于 013mg d -1, 而 50mg 剂量组大于 013mg d -1。表 2 3种规格 “ 羊乐”和 Synchrop art 中 FG A 的每日释放量T able 2 R elease amount of fluorgestone acetate (FG A per d ay in Synchrop art and three types of intravaginal sponges ( x ±S E 观察时间 /d氟孕酮释放量 /mg d -1 FG A release am ount30mg 40mg 40mg (Synchro

19、part 12164±01951±012151±0197 102195±11401175±0183 1a 3126±0160ab 4121±0130bc 2128±0163 43111±01633159±01534115±01192162±0162 52176±01593141±01313193±01082126±0161 62157±01463162±11383171±01262135±0192

20、 72111±0150a 2141±0145ab 3149±0114bc 2167±0172 81167±0141a 1171±0159ab 3102±0139bc 1193±0178 91124±0112a 1139±0168ab 2183±0155bc 1182±0188 100185±0102a 1120±0159ab 2146±0 161bc 1175±0188 110174±01140188±0172217

21、0±01681164±1107 120143±01150154±01 442113±01731153±0193平均值M ean2101±11032120±11223121±01882109±0140 注 :同行比较 , 小写字母不同的两组统计差异显著 (P <0105 。N ote :Values with different superscript letters between tw o groups in the same row were significantly differe

22、nt (P <0105 .3 讨 论本试验从规格为 50mg 的“羊乐”和法国产品Synchropart 中分别回收得到 99140%和 90100%的FG A , 说明用紫外分光法测定 FG A 含量的结果是可靠的 。 而从规格为 30和 40mg 的 “羊乐”中回收得到的 FG A 分别为 88123%和 86148%, 可能与紫外分光测定过程中样本量偏离标准曲线较多有关 。据报道 , 抑制发情所需 FG A 量只要达到 013014mg d -1即可 8。本研究发现 , 30mg 剂量组和40mg 剂量组在第 12天的释放量分别为 (0143±0115 mg d -1和

23、(0154±0144 mg d -1, 说明其放置时间不能超过 12d , 否则不能很好发挥诱导发情和同期发情作用 。 50mg 剂量组在第 12天的释放量图 1 FG A 释放模拟曲线Fig. 1 The release model of flurogestone acetate (FG A in Synchrop art and three types of intravaginal sponges (containing 30, 40and 50mg of FG A 7 7第 2期 何晓红等 :阴道海棉栓 “ 羊乐”中醋酸氟孕酮体外释放规律研究为 (2113±0173

24、 mg d -1, 根据释放模型推测 , 第 15天的释放量大于 014mg d -1, 说明应用这种规格的“ 羊乐”可在阴道内放置至少 15d 。从图 1模拟曲线可知 , 法国产品的每日 FG A 释放量曲线比较平稳 , 说明其海绵的缓释效果优于国 产海绵 。 因此 , 为了提高国产制剂的缓释效果 , 有必要寻找新的海绵制品 。本实验主要参考国外药典介绍的方法 3进行试验 , 所用温度为 60 , 与海绵栓在动物阴道内所处 的内环境不一致 , 但与产品加工工艺一致 。据国外资料报道 , 阴道海绵栓中 FG A 的释放量与其含量 、加工方法及释放时期等有关 。例如 , 用 烘干方法制备 , F

25、G A 含量分别为 10, 20和 30mg 的海绵栓 , 置于阴道中 16d 的平均每天释放量分别为 810%, 515%和 419%; 而用自然干燥方法制备 , FG A 含量分别为 10, 20和 30mg 的海绵栓 , 置于阴道 中 16d 的平均每天释放量分别为 415%, 413%和 217%9。参考文献 :1 R obins on T J. Use of progestagen 2im pregnated sponges inserted intravaginally or subcutaneously for the control of the oestrous cycle

26、in sheep J.Nature , 1965, 206:39.2 Cunningham J M N , Deas D W , Fitzsim ons J. Synchronisation of oestrus in J., 80(20 :590591. 3 Reynolds James E F. M artindale (the Extra Pharmacopoeia oyal , 13061307.4 M ohan B K, Y ie W C. Intravaginal of an in vitro system for studying the intravagi 2nal relea

27、se and permeation of Sciences , 1984, 73(10 :14641468.5 K illian D B , K , W J corpora lutea induced in eatrous 2synchronized cycling and anestrous ewes J.J Anim Sci ,1985, 61(1 :2116 Quinlivan T D. The relationship between numbers of spermatoz oa inseminated and fertilization rate of ova in ewes treated