乙肝表面抗原固相放免定量药盒的特性

1、第10卷第3期1997年8月同位素JournalofIsotopes.10No.3VolAug.1997乙肝表面抗原固相放免定量药盒的特性徐哲孔繁信(中国原子能科学研究院同位素研究所,北京102413)研究了乙肝表面抗原固相放免定量药盒的特性,包括HBsA包被条件和标记物比活度对标准线性范围的影响。:,较好16mIU󰃗mL,灵敏度为018mIU󰃗mL,回收率为85%,批间变异系数小于20%。关键词。它的传染性强,转为慢性肝炎后,特别是观察疗效,迫切需要定量的测量手段。由此。该药盒包括6个不同浓度的标准品,做出含6个点的标准曲线,通过标准曲线得到HBsAg的含量。

2、为更简捷、准确地测定人血清中表面抗原的含量,避免标记物衰变、批间差异等诸多不利因素对定量标准曲线的影响,为医务工作者提供便利、有效的测量手段,本文拟就温度、包被和标记物比活度等不同条件对HBsAg标准线性范围的影响进行观察。1实验材料111主要试剂聚苯乙烯珠:北京门头沟淤白塑料厂生产;125I2NaI:放化纯度为9919%,中国原子能科学研究院提供;马Anti2HBs血清:北京生物制品研究所提供;葡聚糖凝胶(SephadexG250):上海化学试剂厂生产;HBsAg标准品:中国药品生物制品检定所提供。112主要仪器FT2630G计数仪:北京261厂生产;SephadexG250分离柱:b

3、3201;10mm×300mm,自制。2实验方法211标准品的制备将HBsAg强阳性血清按倍数稀释,按操作方法说明绘制标准曲线,然后进行刻度,配制具有一定浓度的HBsAg标准品。收稿日期:1997201227修改稿收到日期:1997205204164同位素第10卷212HBsAg标准品的稳定性将HBsAg标准品分别在4、37、45的温度下放置1周,然后测其计数率,绘制HBsAg标准品计数率与含量的关系曲线。213包被条件对线性范围的影响用物理吸附原理制备包被珠1。分别用由低到高的三种包被浓度包被塑料珠进行实验,以观察包被浓度对HBsAg标准品线性范围的影响。214125I-Anti-

4、HBs标记物比活度对线性范围的影响此处标记物比活度是以每个反应管加入125I2Anti2HBs的总放射性活度来表示。选用依次由低到高的5种标记物比活度,观察标准品的含量与标记物比活度之间的线性变化。215药盒的批内、批间变异系数、回收率及灵敏度用同一生产批号的药盒测量3个不同浓度的HBsAg样品,分别测量3,系数;分别用3个不同生产批号的药盒测量同一种HBsAg,;3个不同含量的HBsAg样品,分别加入微量高浓度的HBg,;用药盒测量HBsAg灵敏度标准,3结果与讨论311HBsAgHBsAg含量的依据,标准品的稳定是保证标准曲sAg含量与计数率的线性关系的重要因素。药盒要求适宜的存放温度和适

5、。为了模拟运输的条件,将配制好的标准品置于37图1HBsAg标准品在不同温度条件下放置1周后HBsAg含量C与计数率N的关系曲线4起始;41周后;+371周后;451周后第3期徐哲等:乙肝表面抗原固相放免定量药盒的特性165和45的温度条件下,观察1周后计数率的变化及线性的稳定性。结果示于图1。从图1可以看出,HBsAg标准品计数率虽然略有下降,但是差异不太大。同时HBsAg含量与计数率的直线关系保持不变。这说明HBsAg标准品在高温下即37或45,1周内是比较稳定的。312包被条件与线性范围的关系用浓度依次倍增的表面抗体包被固相塑料珠,做HBsAg含量与计数率比(NS󰃗N0)

6、的关系曲线,观察线性范围,结果示于图2。图2中NS为HBsAg标准品含量的计数率;N0为零标准的计数率。其中零标准指不含HBsAg的原血清。从图2发现,随着包被浓度的增加,药盒可测定的HBsAg含量增大了,但其灵敏度下降。包被浓度1对应的曲线1的线性范围是0160mIU󰃗mL,灵敏度为018mIU󰃗mL;与包被浓度2和3分别对应的曲线2和曲线3表明,HBsAg含量大于mIU󰃗mL时,计数率仍然随样品HBsA增大而增加,图2固相塑料珠的不同包被浓度下NS󰃗N0与度分别是116mIU2IU,HBsAg含量线性范围的关系,1包被浓度1;

7、2包被浓度2;3包被浓度3升,。,包被浓度1是较为合适的,药盒灵敏度符合国家卫生部要求2,线性范围较好。313标记物比活度与线性范围的关系选5种依次递增、比活度分别为A1、A2、A3、A4、A5的标记物,观察其对标准品线性范围的影响。结果示于图3。由图3可知,标记物比活度过高或过低时,曲线灵敏度略有下降,但相关系数不变(皆为0199),曲线相关性一致,在比活度为A3时,标记物表现较好的活性和较宽的线性范围。314药盒的批内、批间变异系数、回收率及灵敏度为了保证定量药盒测定样品的准确性和精密度,用人血清做样品进行定量测定与计算。结果列于表1、表2和表3。由表13可知,药盒的批内变异系数小于15%

8、,批间变异系数小于20%,回收率为85%110%,灵敏度为018mIU󰃗mL。表1药盒的批内变异系数(药盒批号:9506)样品编号123HBsAg含量󰃗mIUmL-3103±013822130±210551197±31061批内变异系数󰃗%1064166同位素第10卷图HBsAg标准品线性范围的关系11A2时;3比活度为A3时;4比活度为A4时;5比活度为A5时表2药盒的批间变异系数药盒批号950695079508样品编号123HBsAg含量󰃗mIUmL-2163±014921193

9、7;214047110±71691批内变异系数󰃗%14714表3药盒的回收率和灵敏度(药盒批号:9507)样品编号样品1样品2样品3灵敏度标准品HBsAg含量加入微量高浓度标准后的HBsAg含量󰃗mIUmL111033145910-1HBsAg含量测定值󰃗mIUmL31225165112018-1󰃗mIUmL111329166414-1回收率󰃗%10310881710910N󰃗N01)不加标准5102)注:1)N󰃗N0是指灵敏度标准与零标准的计数率之比;2)国家卫生部要求灵

10、敏度标准2.14结论乙肝表面抗原固相放免定量药盒可以利用计算机程序直接得出血清中HBsAg的定量值,避免了一些烦琐的计算和实验操作。一系列的实验研究表明:该药盒在常温条件下运输不影响标准线性范围,而且药盒的灵敏度符合国家卫生部的要求。同时,药盒的批内和批间的变异较小,说明该药盒可以比较准确地测量血清的HBsAg含量。第3期徐哲等:乙肝表面抗原固相放免定量药盒的特性167参考文献1RobertAR,ShmuelHK,SidneyU.Solid2phaseRadioimmunoassayonPolystyreneBeadsandItsApplica22tiontoDopamine2Hydroxyl

11、ase.ClinicalChemistry,1975,21(1):148-150.2卫生部药品生物制品鉴定所1甲、乙型肝炎诊断试剂检定要求1199011213HollingerFB,AdamE,HeibergD,etal.ResponsetoHepatitisBVaccineinaYoungAdultPopulation.n.,1981.454-456.InternationalSymposium1HollingerFB.s.11:s4RobertCB.SimplifiedApproachtoConfidenceLimitsinRadioimmunoassay.ClinicalChemistr

12、y,1980,26(6):763-765.PROPERTIESOFHEPATITISBSURFACEANTIGENSID-PHASERADIOIMMUNOASSAYXuZhe(DepartmentofIsotope,ChteAto,Beijing102413)STRACTThepBsurfaceantigenHBsAgsolid2phaseradioimmunoassaykit,thestabilityofHBsAgstandardandtheinfluencesofsolid2phasebeadsandspecificactivtyofthetracerontheclassiclinearrange,areinvestigated.Theresultsshowthatthekitisstableathightemperatureinshorttime,andgoodcoatingconditionandspecificactivitycanimprovetheclassiclinearrange.Thelinearrangeofthekitis077.6mIU󰃗mL,thesensitivityis0.8mIU󰃗mL,rateofrecoveryis85%