项目实训手册-项目9-方便面菌落总数快速检验-3M试纸片

1、食品微生物检验技术课程实训指导手册项目九 方便面菌落总数快速检验-3M试纸片（依据 SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片操作说明书）一、实训目的以3M试纸片进行样品中菌落总数计数，熟练使用各类3M试纸片进行检验操作，明确常用微生物快速检验方法的原理与优缺点与注意事项。二、实训原理PetrifilmTM是3M公司专利发明，将传统的琼脂平板或试管的培养方法浓缩在小小的一张测试片上，现阶段共有十余种测试片，比较常用的有：菌落总数测试片、大肠菌群计数测试片 、快速大肠菌群计数测试片、高灵敏度大肠菌群计数测试片、大肠杆菌/大肠菌群计数测试片 、肠杆菌科测试片、霉菌和酵母菌

2、计数测试片、快速金黄色葡萄球菌计数测试片、环境李斯特菌测试片三、实训要求本项目3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片说明书进行检验操作，标准与操作说明书规定了3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验的基本要求、操作程序和结果判定。本项目全面考察学生依据标准与操作说明进行微生物快速检验的能力。本项目实施过程可分为样品准备、接种、培养、计数4个步骤。本项目按2人/组为单位进行操作，要求在实验室完整使用3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验。四、实验材料和设备 1 试剂和溶液无菌生理盐水、75%乙醇。2 仪器和设备除微生物实

3、验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料包括冰箱、天平、剪刀、镊子、移液管、锥形瓶、试管、恒温培养箱、均质器及耗材、达到精度要求的pH计，超净工作台或百级洁净实验室。五、实训任务（包含结果计算）1、样品制备以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。a） 固体和半固体样品：无菌操作，称取25 g样品置盛225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成 1:10 的样品匀液。如样品均质时间超过2 min，应

4、在均质杯外加冰水冷却。b） 干粉：无菌操作，称取25 g样品，置盛225 mL生理盐水和适量玻璃珠的无菌均质杯内，迅速振摇，将样品混匀，制成 1:10 的样品匀液。振摇时，幅度为30 cm，7 s内振摇25次，也可以极其振摇15 s。c） 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5 cm。吸管内液体要在24 s内完全排入稀释剂。不要在稀释剂中吹洗吸管。无菌制备样品，制备10-1、10-2、10-3适宜的稀释度，并均质。在操作手册中，首先介绍了3M试

5、纸片的合理存放，3M试纸片需要冷藏，并需注意保质期，且需在开包前将包装物恢复至室温；对于已开封的包装，继续存放时则需用胶带封禁封口；并不在冷藏，同时注意需要在1个月内使用完。2、接种a） 选择合适的连续3个稀释度，揭开试纸片上层膜，接种1 mL样液垂直滴加在试纸片中央处，做两个平行重复，小心盖上上层莫，注意不要有气泡。b） 用包装中适配的压板凹面朝下，对准后，轻压30秒后，静置试纸片至少1 min待培养基凝固。3、培养3M试纸片透明面朝上，堆叠不超过20片，放入培养箱中培养，36±1，培养48±2 h。4、计数到培养时间后立即计数，如果不能立即进行计数，可以将试纸片放在-1

6、5条件下，不超过7 d.计算结果只保留两位有效数字，见表1表1对所有成对的平板都要计数，并将计数的结果按规定的计算后报告。25250 CFU为正常计数范围。不足25 CFU或者超过250 CFU计数结果可能不是实际菌落数的真实反映。因为菌落数过少的试纸片（少于25 CFU），稀释因子可能会夸大计数结果；二菌落数过多的试纸片（超过250 CFU），一反面因为难以计数，另一方面因为会抑制某些细菌的生长，可能会导致计数结果低于实际菌数。报告时，将少于25 CFU或者多于250 CFU的试纸片计数结果报告为试纸片菌落计数的估计值（EAPC）。a） 菌落数在25250 CFU正常范围内的试纸片：选择无蔓

7、延菌落的平板，技术所有菌落，包括那些极微小的菌落，记录下计数的每个试纸片的菌落数和稀释倍数。计算公式：如表2表2结果修约后为2.4×104或者24000 CFU/mL(g)b） 超过250 CFU的试纸片：所有稀释度试纸片上菌落数都超过250 CFU，对于接近250 CFU的试纸片，先划出分布具有代表性的区域进行计数，再计算出整块的菌落数，用EAPC来报告计算出的需氧菌落数，以表明该数值是从25250 CFU范围外试纸片得出的估计值。其余试纸片都记录为“多不可计”（TNTC）。如表3。c） 小于25 CFU的试纸片：所有测试片上菌落数都小于25 CFU，记录测试片实际的菌落数，但报告

8、结果为小于25×（1/d），d为该计数的样品的最低稀释度的稀释因子。如表4。表4d） 无菌落生长的试纸片。如果所有稀释度的试纸片都没有菌落生长，则APC报告为小于1乘以样品的最低稀释倍数，报告时将计算出的APC值标上星号，以表明该数值是从25250 CFU范围外试纸片得出的估计值。六、原始数据记录表菌落总数原始记录样品编号样品名称样品状态固态，无异常 液态，无异常 其他：样品数量温 度湿 度%检验方法检测地点4 主要检测仪器名称及编号JM023 DHG-9140A型电热鼓风干燥箱 JM049 GHP-9160型隔水式恒温培养箱JM010 TD型电子天平 设备状态正常 其他：检验项目测试数据记录计算公式检验结果菌落总数CFU/ml(g)培养基、培养时间及温度平板计数琼脂、36±