白细胞介素1B基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性

1、白细胞介素1B基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性         08-05-15 11:18:00     编辑：studa20              作者：廖爱军，苏琦，田锋，姚育红，曾斌【摘要】  目的 探讨湖南衡阳地区白细胞介素1B（IL1B）基因多态性与胃癌的关系以及幽门螺杆菌（Helicobacter pylor

2、i,HP）感染后胃癌发生的易感基因型。方法 52例胃癌患者癌旁正常胃粘膜组织和55例慢性胃炎患者胃粘膜组织，均经快速尿素酶和PCR检测HP，应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）分析技术，进行基因型检测，并对C/C、T/T进行测序，比较各基因型在胃癌组和胃炎组中的分布差异。结果 IL1B31T、IL1B511T等位基因和IL1B31T/T、IL1B511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P<0.05)，OR值分别为1.97(95%CI=1.153.59)、2.52(95%CI=1.454.39)和2.71(95%CI=1.106.66)、3.33(95%CI=1.

3、149.73)。在伴有HP感染的群体中进行比较，IL1B31位点各基因型未见明显差异；但IL1B511T等位基因和IL1B511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P<0.05)，OR值分别为2.16(95%CI=1.104.23)和3.43(95%CI=1.0111.62)。结论 在湖南衡阳地区IL1B31T/T、IL1B511T/T基因型与胃癌发病风险相关，在HP被感染后IL1B511T/T基因型可能为湖南衡阳地区胃癌易感基因型。 【关键词】  白细胞介素1B；基因多态性；胃癌；幽门螺杆菌    胃癌是由环境因素和遗传因素共同引发的恶性肿

4、瘤。在环境因素中，HP感染是主要因素，被认为是胃癌发生的启动因素和促进因素。目前世界上已有半数以上的人被HP感染，但其中大多数为无症状感染者，只有极少数发展成胃癌，因而认为存在这些差别的原因既有HP本身的因素，也有宿主本身的因素。    为此，本实验在湖南衡阳地区以慢性胃炎患者作为对照，探讨该地区患者被HP感染后IL1B31和IL1B511基因多态性与胃癌发生的关系。    1  材料和方法    1.1  材料    实验组：72例胃癌标本均来自2005

5、年3月2005年12月南华大学附一医院，经病理确诊(贲门癌除外)，所有病例术前均未行放疗或化疗，术前2周未口服抗生素治疗。取胃窦部约0.5g癌旁正常粘膜组织(距癌灶>5cm)分为2块，1块行快速尿素酶检测HP,1块切成米粒大小置于-80冰箱冻存。实验组及对照组患者均来自于湖南衡阳地区。    对照组：70例标本来自本院胃镜室活检组织，无系统性红斑狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎和胃癌家族史，术前2周未口服抗生素治疗,病理确诊为慢性浅表性胃炎。取胃窦粘膜组织2块，1块行快速尿素酶检测HP，1块置于-80冰箱冻存。    1.2

6、60; 实验方法    1.2.1  基因组DNA的提取    实验组胃窦部癌旁正常粘膜组织和对照组胃窦部粘膜组织，各取米粒大小一块，分别放入无菌EP管中用无菌眼科剪剪碎，按照上海生工DNA抽提试剂盒要求操作，DNA提取后于-20冰箱中保存。    1.2.2  HP的检测    （1）快速尿素酶法检测HP  试剂盒由福建三强公司提供，按试剂盒要求操作，加入组织样本后5min内颜色逐渐变红为阳性，不变色则为阴性。   

7、; （2）PCR检测幽门螺杆菌(HP) UreA基因  试剂盒由上海生工提供，引物参照文献1由上海生工合成，上游：5GCCAATGGTAAATTAGTT3；下游：5CTCCTTAATTGTTTTTAC3；扩增出的UreA基因片段长度为411bp。反应体系为25l，包括PCR Master 12.5l，上、下游引物各1l，模板DNA1l,去离子水9.5l。反应条件为94 5min 1个循环；94 1min，47 1min，72 1min，35个循环；72延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶（溴化乙锭染色）电泳，100V恒压30min，紫外灯下观察结果。出现411bp橙色条带的为HP阳

8、性，无条带则为阴性，见图1。    (3)诊断标准及检测结果  所有标本经两种方法检测HP，两种方法同为阳性则为HP阳性，同为阴性则为HP阴性，一阳一阴者剔除。最后测出实验组标本52例，对照组标本55例。    1.2.3  基因多态性检测    (1)IL1B31和IL1B511位点PCR扩增  引物由上海生工合成，序列为：IL1B31上游：5    M：100bpDNA marker；14：HP阳性结果；5：阴性结果  &

9、#160; 图1  HPUeaA基因检测结果照片    AGAAGCTTCCACCAATACTC3下游：5AGCACCTAGTTGTAAGGAAG 3。IL1B511 上游：5TGGCATTGATCTGGTTCATC 3下游：5GTTTAGGAATCTTCCCACTT 3。扩增体系均为25l，包括PCR Master 12.5l，上、下游引物各1l，模板DNA 1l,去离子水9.5l。反应条件为94 5min 1个循环；94 30s，57 40s ，72 45s，35个循环；72延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶（溴化乙锭染色）电泳，100V恒压30

10、min，紫外灯下观察结果。    (2)PCR扩增产物的限制性内切酶消化  酶切体系为20l，其中内切酶0.5l，PCR产物5l，缓冲液2l ，去离子水12.5l，37水浴4h。琼脂糖凝胶电泳及结果判定：3%的琼脂糖凝胶（溴化乙锭染色）电泳，100V恒压50min，紫外灯下观察结果。IL1B31位点存在CT的基因多态性现象，为Alu I 酶切位点，基因型31C/C不被切开，只有239个为一个片段；31C/T产生239bp、137bp和102bp三个片段；31T/T产生137bp和102bp两个片段，见图2。IL1B511位点也存在CT的基因多态性现象，为Ava I 酶切位点，基因511C/C酶切后产生190bp和115bp两个片段；511C/T产生305bp、190bp和115bp三个片段；511T/T产生305bp一个片段，见图3。    1.2.4  CT突变和RFLP分析的可靠性证实    随机挑选电泳图上显示的两种不同纯合子基因型的PCR产物送上海生工进行直接测序，见图47。&#