直肠粘膜下注射重组白细胞介素-2治疗直肠癌的临床研究

1、直肠粘膜下注射重组白细胞介素-2治疗直肠癌的临床研究目的观察不同途径应用重组白细胞介素-2(rIL-2)对患者全身及肿瘤局部免疫的影响。方法对45例直肠癌患者给予肌肉或直肠粘膜下注射rIL-2。结果直肠粘膜下应用rIL-2不仅提高患者全身免疫功能，而且能激活肿瘤区域淋巴结天然杀伤细胞(natural killer,NK)和淋巴因子激活杀伤细胞(lymphokine-activated killer,LAK)活性，促进淋巴结生发中心增生、浆细胞反应和窦组织细胞增生增强。结论直肠粘膜下注射rIL-2是治疗直肠癌的一种安全有效的新方法。关键词直肠肿瘤白细胞介素-2淋巴结免疫，细胞 Clinical

2、study on treatment of rectal carcinoma by systemic or regional administration of rIL-2 Liu lianjie,Li Jieming,Tu Yue,et al.Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433.ObjectiveTo observe the effect of rIL-2 by different administration on the systemic cellular immunity and tu

3、mor regional lymph nodes(RLN) immunity in patients with rectal carcinoma.MethodrIL-2 was administered via instramuscular injection or rectal-submucosal injection in 45 cases.ResultIt was showed that systemic administration of rIL-2 can improve NK and LAK activity of patients peripheral blood lymphcy

4、tes. However,regional administration of rIL-2 can not only enhance systemic immunity but also increase NK activity and LAk activity of tumor regional lymph nodes(RLN),and promote the germinal center hypertrophy,plasma cell reaction and sinus histocytosis.ConclusionSubmucosal administration of rIL-2

5、is a new and effective modality in the treatment of rectal carcinoma.Key wordsRectal neoplasmsInterleukin-2Lymph nodesImmunity,cellular免疫治疗已成为消化道恶性肿瘤辅助治疗的主要方法之一，白细胞介素-2 (Interleukin-2,IL-2) 是机体肿瘤免疫网络中起调节作用的最重要的淋巴因子。大剂量全身应用重组白细胞介素-2(recombinant interleukin-2，rIL-2)虽有一定抗肿瘤作用，但副作用较大，局部应用小剂量rIL-2 可在肿瘤区域

6、达到较高浓度，激活局部免疫参与细胞、免疫效应细胞反应1,2。本实验通过对直肠癌患者肌肉和直肠粘膜下注射rIL-2，观察rIL-2 对机体全身及直肠肿瘤区域淋巴结（regional lymph nodes，RLN）免疫功能及结构的影响。材料与方法1.临床资料：经纤维结肠镜及病理证实直肠腺癌患者45 例，年龄50.410.7岁。入院前均未经手术、放疗、化疗或免疫治疗。按病情和一般情况较为接近的原则分为3组，每组15例。A 组(全身治疗组)：术前10日开始每日肌肉注射rIL-2 50万U，连续10日。B组(局部治疗组)：术前10日开始经肛门镜在齿状线上4cm 直肠粘膜下每日注射rIL-250万U连续

7、10日。C组(对照组)：术前10日开始每日粘膜下注射生理盐水5ml，连续10日。2.外周血及RLN淋巴细胞NK 活性、LAK活性 测定：患者均于手术前10日及手术当日晨分别取外周静脉血3ml，用淋巴细胞分离液制取淋巴细胞悬液。所有患者手术中均取肠系膜下动脉附近淋巴结12枚，经机械解聚、酶消化、梯度离心制取淋巴细胞悬液。取对数生长期的 K562 细胞和Raji细胞分别作为检测NK 活性、LAK活性的靶细胞。效靶比例为 501，以3HTdR 释放法3测定NK及LAK活性。3.直肠肿瘤RLN组织病理学检查：淋巴结依全国大肠癌病理研究统一规范4判断生发中心增生、皮质旁区增生、浆细胞反应、窦组织细胞增生

8、程度。4.统计方法：自身对照t检验和配对t检验。结果1.rIL-2治疗前后外周血 NK活性、LAK活性变化：治疗组与对照组治疗前差异无显著意义(P0.05);全身应用rIL-2 和局部应用rIL-2 治疗后患者外周血淋巴细胞NK活性、LAK活性较治疗前都明显提高 (P0.01或P0.05)，见表 1。表1组别例数NK活性LAK活性治疗前治疗后差值治疗前治疗后差值A组1520726106721728779*B组1520727107921727767C组151972071221822814 2.rIL-2对直肠癌患者RLN淋巴细胞NK活性、LAK活性的影响:全身应用rIL-2治疗组同对照组比较差异

9、无显著意义(P0.05)。局部应用rIL-2治疗后直肠肿瘤RLN淋巴细胞NK活性、LAK活性较全身应用rIL-2 组和对照组NK活性、LAK活性都明显提高(P0.05)。见表2。表2组别例数NK活性LAK活性A组15145288B组15196*348*C组15146287 注:*P0.05 同其它组相比 3.rIL-2对直肠癌患者RLN组织结构的影响：3组患者直肠肿瘤RLN组织学检查结果见表 3。局部治疗组生发中心增生较全身治疗组及对照组明显（P0.05)，皮质旁区增生无明显差别。局部治疗组浆细胞反应明显增强（P0.05)，窦组织增生也明显增强(P0.05)见表3。表3全身或局部应用rIL-2

10、对直肠癌区域淋巴结增殖的影响(每组分别15例)组别生发中心皮质旁区浆细胞窦组织(+)(+)(-)(+)(+)(-)(+)(+)(-)(+)(+)(-)A组16825812122211B组744276285285C组15906904111311 注：+反应明显，有反应，反应不明显讨论直肠癌最主要的转移途径是淋巴路转移，直肠的淋巴网主要位于粘膜下层和浆膜下层，肌层较少5。直肠粘膜下注射rIL-2 可使rIL-2 按肿瘤淋巴流向达到转移、未转移的RLN。肿瘤RLN在肿瘤免疫的启动、肿瘤免疫维持、抑制肿瘤细胞的生长中均发挥重要作用，是阻止肿瘤扩散的重要屏障。许多研究表明，RNL增生情况同大肠癌Duke

11、s分期、肿瘤分化程度有关，生发中心增生反应、窦组织增生反应同5年生存率呈正相关6。 Bier等2予荷瘤豚鼠RLN周围应用低剂量rIL-2 ，发现可明显减少镜下微小转移灶。Cortesina等7给31例头颈部复发鳞状细胞癌患者RLN周围注射低剂量rIL-2 ，取得良好临床效果。局部应用rIL-2 的优点是1：可减少rIL-2用量，费用低；避免全身用药时所出现的严重副作用；在肿瘤部位RLN浓度较高，显著增强局部免疫状态。局部注射方法:直肠镜下消毒，于齿状线上约4 cm处的粘膜下注射,肿瘤位置低时可注射于肿瘤周围或对侧粘膜,除直肠炎症明显者适用于各期病人,梗阻病人亦可。本组2例出现中度发热,1例有轻

12、度下坠感,对症处理后继续应用。如何进一步提高肿瘤病人全身和局部免疫功能，以配合手术治疗，减少肿瘤复发和转移，提高病人生存率，是目前免疫治疗的重要课题。参考文献 1Maas RA,Dullens HF,Den Otter W. Interleukin-2 in cancer treatment:disappointing or (still) promising?A review.Cancer Immunol Immunother,1993,36:141. 2Bier H,Haas I,Koldowski P. Regional low-dose interleukin-2 immunother

13、apy of lymph node micrometastasis in a guinea pig tumor model. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec,1994,56:96.3HTdR 释放法 测量细胞介导的细胞毒功能.上海免疫学杂志，1987，7:230. 4大肠癌病理研究协作组.全国大肠癌病理研究统一规范.中华肿瘤杂志，1986，8:156. 5戴勇,胡继康.直肠癌淋巴引流显影定位及初步临床应用.实用外科杂志，1993，13:89. 6大肠癌病理与预后关系研究协作组.大肠癌区域淋巴结免疫反应的预后意义 附2502 例分析.中华肿瘤杂志，1986，8:140. 7Cortesina G , Stefani AD,Galeazzi E ,et al.Temporary regression of recur