临床检验基础实验指导

1、临床检验基础学实验指导血液常规检验一、微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定与使用【实验目的】：掌握微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、构造 与使用。【实验试剂】：红细胞稀释液、75%乙醇、消毒药棉。【实验器材】： 一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。【实验原理】：一次性采血针刺破毛细血管后，用微量吸管吸取一定量的血 液，稀释一定的倍数，冲入计数池计数一定体积内的细胞的数量。【实验方法】：一、微量吸管的使用：用抗凝血训练微量吸管的使用。、毛细血管采血（以红细胞计数为例）：准备：取清洁干燥试管一支，加 2ml红细胞稀释液。采血部位选择、按摩

2、T 75%乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒-待酒精挥发干（否则血流不成滴）-自指尖腹内侧迅速刺针-擦去第一滴血-准确吸 取10ul血液用无菌干棉球压住伤口止血用无菌干棉球擦去管尖外围余 血后将血液释放到稀释液底部回吸上清液 2-3次轻轻混匀。三、计数板构造与应用1 .计数板构造外观构造：每块计数板由“ H'型凹槽分上下两个计数室，在计数室两侧各有一条支柱，比计数室高出 0.1mm将一块平整光滑的血细胞计数专用盖玻片（24.0mnrK 20.0mnt< 0.6mm覆盖其上时，盖玻片与计数室间形成 0.1m m的缝隙。格子构造：计数池长、宽各3mm平均分成9个大格，每个大方格的容 积是0

3、.1 mm3四角的四个大方格分别用单线划分成 16个中方格，是白细胞计数区域；中央的大方格用双线条划分成 25个中方格，每个中方格又用单线划分成16个小方格，其中四角和正中的5个中方格是红细胞计数区域。2. 计数板的使用:用清洁干燥柔软的纱布擦拭计数板及盖玻片-用推盖法从计数板下缘 向前平推盖玻片将其盖在计数室上-充分混匀细胞悬液-充池-静置-观 察细胞分布情况（若严重不匀，应重新充池。）【注意事项】：1. 采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。2. 针刺应迅速，深度适宜（约 2-3mm。待血液自行流出，擦去第滴血。3. 微量吸管取血时应将微量吸管管尖侧着插入血滴中央。若

4、血流不暢,可以左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用力挤压，造 成组织液混入，影响结果准确性。4.计数板在使用中勿让手指接触计数池及盖玻片表面，以访油腻污染, 致使充液时起泡。二、血涂片的制作，瑞氏染色【实验目的】：掌握血片制作方法，瑞氏染色原理及方法。【实验试剂】：瑞吉氏复合染液（I液、n液）【实验器材】：显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球【实验原理】：细胞的着色既有化学的亲和作用，又有物理的吸附作用，不 同的细胞由于其所含化学成分不一样， 化学性质各不相同，所以对染料的亲 和力也不一样，因此将细胞染成不同的颜色。【实验方法】：一、瑞一吉氏复合染液配制I液：取

5、瑞特染粉1g,吉姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液，再加少量甲醇，继续研磨，再吸出 上层染液。如此连续几次，共用甲醇 500ml。收集于棕色瓶中，每天早晚各振摇3'共5天，再存放一周，将染液过滤后即可使用。n液：磷酸盐缓冲液（PH6.5 6.8 ），取磷酸二氧钾（无水）6.64g，磷酸氟二钠（无水）2.56g，加少量蒸馏水溶解，调整PH后，加水至1000ml。二、血片制作、瑞氏染色方法准备：取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。1、制备血涂片：取载玻片f取血1滴于载玻片右端（边缘留1.5cm空隙）f左手持载玻片，右手持推玻片f将推玻片放至

6、血滴前沿逐渐后移至 血滴沿推片散开后，推玻片与载玻片成 30°35°的夹角以平稳的速度将血液向前推进-干燥（手持载玻片末端迅速在空气中挥动干燥）。2、染色：将干透的血涂片放在水平位置加瑞吉氏复合染液I液数滴,以染液覆盖整个血膜为度-静置染 0.5Imin-滴加约2倍于I液量的n液 f用洗耳球吹气混匀f染色 5- 10mi n-平持玻片用流线型水洗干燥镜【注意事项】：1. 严格皮肤消毒。2. 血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。3. 染料放置时间越长，美兰逐渐氧化为天青，染色效果越好。4染液淡，室温低，细胞多则染色时间长，反之减少染色时间。5水洗方法为

7、平持血涂片流线型水缓缓冲洗干净，不要先倒掉染液。三、白细胞计数（WBC【实验目的】：掌握白细胞计数的原理、操作方法与结果报告。【实验原理】：用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞， 充入血细胞计数池,显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量。【实验试剂】白细胞稀释液【实验器材】【实验方法】显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒准备：取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。采血部位按摩T 75%乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒-待酒精挥发干（否则血流不成滴）-自指尖腹内侧迅速刺针-擦去第一滴血-准确吸取20ul血液7用无菌干棉球压住伤口止血

8、7用无菌干棉球擦去管尖外围余血后7将血液轻轻释放到稀释液底部7回吸上清液2-3次7混匀7室温静置至液体变为棕褐色即红细胞破坏完全7清洁计数板、盖玻片7充池7静置23min待细胞下沉7低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数7计算7报告。计算：WBC四个大方格内的白细胞数（N /4 X 10X 20X 1O6=N/2OX 1O9/L【注意事项】：1. 采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。2. 针刺应迅速，深度适宜（约 2 3mm。待血液自行流出，擦去第一滴血。3.稀释液要过滤使用，试管、计数板均须清洁，以免混入杂质被误认为白细胞。4.加稀释液、血液量应精确,以保证稀释倍数。5

9、.计数池内细胞分布要均匀,每个大方格间白细胞数差异不得超过均值的± 10%，否则要重新充液计数。6.严格掌握计数原则，以免人为扩大或缩小计数区域。7.白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，反之白细胞过低时可计数8个大方格内白细胞数或加大取血量。四、白细胞分类计数（DC【实验目的】:掌握显微镜法外周血分类计数的方法、 各种白细胞的镜下形 态。【实验原理】:将血液制备成涂片，经瑞-吉氏染色后显微镜下根据白细胞 的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。【实验试剂】瑞-吉氏复合染液【实验器材】显微镜、外周血标本片、香柏油、擦镜纸、清洁剂【实验方法】准备：血涂

10、片制备及瑞-吉氏染色待干低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的区域-转油镜按一定的规律 移动视野，依次进行分类计够100个白细胞7算出各种白细胞的百分比7报【注意事项】：1.涂片制备要厚薄适中、均匀、头体尾分明。2. 分类时要有程序地连续进行，避免主观选择视野。3. 分类中如见幼红细胞，不计入 100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应注明其所属阶段,4. 分类中应注意观察成熟红细胞、血小板的形态染色及其分布情况,注意有无寄生虫（如疟原虫）及其他异常所见。五、白细胞计数（WBC及分类计数（DC）【实验目的】：掌握白细胞计数及分类计数原理、方法与结果报告【实验原理】

11、：白细胞计数原理：用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞，充入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每 升血液中的白细胞数量。白细胞分类计数原理：将血液制备成涂片，经瑞-吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。 通常分类100个白细胞，计算得出 各种白细胞所占百分比。【实验试剂】：白细胞稀释液、瑞-吉氏复合染液【实验器材】：显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒、 载玻片、推玻片、香柏油、擦镜纸、清洁剂【实验方法】：准备：1.取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。2.取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。采血部位按摩T

12、75%乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒-待酒精挥发干（否则血流不成滴）-自指尖腹内侧迅速刺针-擦去第一滴血-准确吸取20ul血液-用无菌干棉球擦去管尖外围余血后-将血液轻轻释放到稀释液底部-回吸上清液2-3次-混匀-另取血一滴于载玻片的右端-立即推制 血膜f用无菌干棉球压住伤口止血f清洁计数板、盖玻片f充池（静置 2 3min待细胞下沉）-低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数-将干透的血膜进行瑞-吉氏染色-油镜下分类计数T计算-报告。六、红细胞计数（RBC、Hb测定【实验目的】：掌握红细胞计数，Hb测定原理、操作方法，规范的报告结【实验原理】：红细胞计数原理：用等滲稀释液将血液稀释一滴倍数，充入计

13、数池,在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求得内升血液中的红细胞 数。Hb测定（HiCN法）原理：血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白,后者再与氰离子结合形成稳定地氰化搞铁血红蛋白（HiCN），HiCN在规定波长（540nm和液层厚度（1cm的条件下具有一定的毫摩尔消光系数。可用标准的高精度分光光度计进行直接定量测定，或用HiCN标准液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。【实验试剂】：红细胞稀释液（甲醛枸木缘酸盐稀释液），HiCN转化液【实验器材】：改良Neubauer计数板、显微镜、分光光度计、玻璃试管、【实验方法】：RBC:取清洁干燥试管一支-加红细胞稀释液1.9

14、9ml -加未梢血10ul 于稀释液底部f吸取上清液嗽洗 34次f颠倒混匀f清洁计数板，盖玻片-充液-静置2' 3'f计数（中央大格中四角及正中 5个方各细胞数） f计算RBC=5个中方格细胞数X 5X 10X 200X 106=5个中方格细胞数X 1012儿。Hb测定:1. 直接定量测定法：取中号试管一支f加HiCN转化液5mlf加未梢血 20ul f混匀静置5'f 721比色，波长540nm以转化液为空白对照管f测其吸光度“ A”f计算（“ A”X 367.7 ）f报告2. 标准曲线法:将血红蛋白标准液稀释成不同的三种浓度（150g/L、100g/L、50g/L）

15、分别测其吸光度“ A”，以“A”为纵坐标，血红蛋白标准液参考值（g/L ） 为横坐标，绘制标准曲线。通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度。【注意事项】：1. 取血应顺利、准确，采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症,不得过渡挤压，红细胞数量明显增高者可适当加大稀释倍数。2. HiCN转化液应置棕色瓶于 4C冰箱中，不能储存于白色瓶、塑料瓶及强光下，否则会使CN丢失，结果偏低。3. HiCN转化液中有氧化钾剧毒，防止污染。测定后的比色液不能与酸性溶液混合，否则可产生剧毒的氢氰酸气体。4. 所用分光光度计的波长、吸光度需要校正，带宽应小于1nm比色杯光径1.000cm时，测定温度为20C25

16、C。七、血液常规检验【实验目的】：掌握血常规的连续操作规程并规范的报告结果。【实验原理】：见实验二、三、四、六【实验试剂】：红细胞稀释液、白细胞稀释液、瑞-吉氏复合染液、HiCN转化液【实验器材】：改良Neubauer计数板、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、【实验方法】：取大、中、小号试管各一支-分别加 HiCN转化液5ml、红细胞稀释液 2ml、白细胞稀释液0.38ml -手指消毒针刺-分别取未梢血10ul于红细胞 稀释液中、20ul于白细胞稀释液中、20ul于HiCN转化液中-并及时混匀- 取清洁干燥玻片粘取1滴血液于玻片一端-推制血片-待干-721比色-瑞 氏染色-白细胞及红细胞计数-D

17、C-计算-报告（血常规结果报告）成人儿童新生儿1.WBC: (4 10)X 109/L(5 12)X 109/L(15 20)X 109/L成年男性成年女性儿童正常值:2.RBC:(4 5.5 )X 1012/L(3.5-5)X 1012/L(6-7)X 1012/L3.HB:120-165g/L110-150 g/L170-200 g/L4.DC:N:杆状1 5%分叶50 70%L: 20 40%M : 38%E : 0.5 5%B : 01%【注意事项】：1.取血应顺利、准确,采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症,不得过度挤压。2. HiCN转化液中有氧化钾巨毒，防止污染。测定后的比

18、色液不能与酸性溶液混合，否则可产生剧毒的氢氰酸气体。3. 细胞计数混合不易过分震摇。4. 瑞氏染色时加染液与缓冲液的比例为1： 1或1： 2。5. 采取标本的顺序：红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血片制八、血小板计数（BPC或PLT）【实验目的】：掌握血小板的计数原理、方法、镜下形态及结果报告。【实验原理】：用稀释液将血液稀释一定倍数后混匀，充入计数池中，于显 微镜下计数一定体积的血小板数，经换算求得每升血液内的血小板数。【实验试剂】：10g/L草酸铵液【实验器材】：显微镜、：改良 Neubauer计数板【实验方法】：准备：取清洁干燥的小试管一支，加10g/L草酸铵液0.38ml准确取自

19、然流出的外周血20ul T轻轻放入到上述稀释液底部-回吸上清液漱洗吸管2-3次-混匀-室温静置10 min-清洁计数板、盖玻片-混匀细胞悬液后充池-静置10 mi n- 15mi n-于高倍镜下计数中央大方格内四角和中央5个中方格内血小板总数计算报告计算：血小板数/L = 5个中方格内血小板总数X 109/L【注意事项】：1. 所用试剂、器材应10g/L草酸铵液稀释液中无尘埃、细菌等污染。2. 毛细血管采血时，针刺深度应达 3mm采血要快避免血液凝固.若遇血小板成簇分布时，应重采标本计数.3.细胞悬液充入计数池中静置时，应注意保持湿度，避免水分蒸发。4.计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小

20、板与尘埃的鉴别。血小板为轻度折光性的园形、椭园形。5.血小板计数应在1h内完成，否则结果可降低。九、网织红细胞计数（RQ【实验目的】：掌握网织红细胞计数原理、测定方法、镜下形态、结果报告。【实验原理】：网织红细胞为晚幼红细胞脱核后，但尙未完全成熟的红细胞。其胞质中尙残存核糖体、核糖核酸等碱性物质，经活体染色后于胞质中可见蓝绿色网点状或点粒状结构。【实验试剂】【实验器材】10g/L黄焦油篮生理盐水溶液显微镜、试管、载玻片、推玻片【实验方法】溶液2-3滴准备：取清洁干燥小试管一支，加 10g/L黄焦油篮生理盐水取外周血2-3滴于上述试管中-立即混匀-37r下染色15- 20mh取试管里的混合血液一

21、滴于载玻片一端-推制成薄血膜-待干燥-油镜下计数（于目镜筒中放一缩小视野的硬纸片）至少1000个红细胞中的网织红 细胞数-计算-报告计算：网织红细胞百分比=计数的网织红细胞数/100【注意事项】：1. 网织红细胞必须在活体染色下才能显示。2. 染色时血液与染料的比例约为1:1,贫血时适当增加血量，室温较低时适当延长染色时间或置 37C温箱.3. 涂片应厚薄适宜，以红细胞不重叠为度，涂片后应及时计数，否则网状结构消失。4. 计数区域一般选择血膜的体部，自体部向尾部迂回检查。、嗜酸性粒细胞计数【实验目的】：掌握嗜酸性粒细胞直接计数的原理、操作方法、镜下形态及 结果报告。【实验原理】：用嗜酸性粒细胞

22、稀释液将血液稀释一定的倍数， 破坏红细胞 和其他大部分白细胞并使嗜酸性粒细胞着色， 滴入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积内的嗜酸性粒细胞，经换算得出每升血液中嗜酸性粒细胞数。【实验试剂】：2%伊红-丙酮嗜酸性粒细胞稀释液【实验器材】：【实验方法】：显微镜、改良 Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒准备：取清洁干燥试管一支，加0.38ml嗜酸性粒细胞稀释、亠 液。精确吸取外周血20ul -轻轻放入到上述稀释液底部-回吸上清液漱 洗吸管2-3次-混匀-室温静置-清洁计数板、盖玻片-混匀细胞悬液后 充池静置3 min - Smin于低倍镜下计数两侧计数池中10大方格（每侧计数池的四角和中

23、央大方格）内的嗜酸性粒细胞数-计算-报告计算：嗜酸性粒细胞数/L = 10个大方格内嗜酸性粒细胞数X 2OX1O6/L【注意事项】：1. 计数应在30min内完成，因时间过长嗜酸性粒细胞可被溶解，结果偏低。2. 血液加入稀释液后应及时混匀，否则易致血液凝固和细胞聚集，但不易用力振摇以免嗜酸性粒细胞破碎。3. 震摇与残留的中性粒细胞区别， 中性粒细胞一般不受色或受色极浅，且其颗粒较小。4. 做嗜酸性粒细胞计数最好固定时间，以免受日间生理变化影响十一、血细胞分析仪使用、LEC血沉【实验目的】：熟悉血细胞分析仪的检测原理及方法；掌握LEC的镜下形态、血沉检测方法及结果观察报告。【实验原理】见仪器说明

24、书【实验试剂】血细胞分析仪、显微镜、血沉架、血沉管【实验器材】【实验方法】红细胞沉降率（ESR :取抗凝血约2m|T灌制血沉管“ 0”刻度-垂直竖立在血沉架上-室温静置1小时-观察红细胞沉降毫米数-报告（红细胞 沉降率： mm/h、凝血酶原时间测定（PT）【实验目的】：目的掌握PT测定方法、原理及结果观察报告【实验原理】：在受检血浆中加入足量的凝血活酶和钙离子，测定血浆凝固所需的时间，即为血浆凝血酶原时间。本试验是外原性凝血系统常用的筛检试验。【实验试剂】：1.血浆2. 组织凝血活酶3. 氯化钙溶液【实验器材】：恒温水浴箱、离心机、试管、微量加样器、秒表【实验方法】：准备：将123.试剂分别置

25、37C水溶预热，小试管预热。取已预热清洁干燥小试管-加血浆 0.1ml，同时加组织凝血活酶液0.1ml、caci 20.1ml -混匀、开动秒表计时-在 37E水溶中不断轻轻摇动小试管8-取出观察，来回倾斜试管，混合物不再流动时（出现胶冻状）立即停表，读取时间即为凝血酶原时间，作 3次取均值报告。【注意事项】：1. 采血应“一针见血”，抗凝剂与血液比例（1： 9）应准确。取血后4h 内完成测定。2. 试剂在用前先预温到测定温度，且不能超过 30分钟。3. 标本测定前应先测定正常人混合血浆，其PT值在允许范围内才能测定样本。4. 必须在36.5 37.5C温度下操作。输血技术、ABO血型鉴定（正

26、、反定型）【实验目的】：掌握血型鉴定（正定、反定）原理、测定方法及结果观察、分析、报告。【实验原理】：根据红细胞表面 A、B抗原与相应的抗体特异性结合，可使红细胞出现凝集反应这一原理，通过正、反定型来判断型别。正定型：用已知抗A抗B型血清来测定红细胞上有无相应的 A、B抗原；反定型：用已知A抗原和B抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗 A、抗B抗体。【实验试剂】：标准抗A抗B血清；5% A B型标准红细胞生理盐水悬液;生理盐水【实验器材】：试管、离心机、记号笔、滴管、显微镜【实验方法】：准备：1、分离血清，并做好标记。2、洗涤红细胞，制备5%红细胞悬液，做好标记。、正定（用已知标准血清鉴定血型）

27、。取试管2支分别标明抗A、抗B字样加5方红C晨液各1滴离离心（1000转/min 1分钟）观察结果。、反定（已知标准红细胞鉴定血型）取标准红细胞A B型各1-2滴-分别装在大小相等并表明A B字样的两支试管中7分别加被检者血清1-2滴7混匀离心7观察结果结果判断【注：（+）示凝集（）示不凝集】正定反定抗A（ B型）抗 B（ A型）被检者血型B型标准红细A型标准红细+一A胞胞一+B+一一一O一+AB+【注意事项】：1. 格查对，切不可将姓名、标本、血型等搞错，要求正、反定型结果致。2.观察结果、登记、出报告均应仔细查对3. 滴管、试管应清洁干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染、交叉配血实验（

28、同型、异型配血）【实验目的】：掌握盐水介质配血法的原理、操作方法及结果观察、分析、报告。【实验原理】：天然抗体IgM因其分子链较长，在盐水介质中，可以克服红细胞表面电荷的排斥力，与含有相对应抗原的红细胞结合并出现肉眼可见的凝集。【实验试剂】：生理盐水【实验器材】：试管、滴管、离心机、记号笔【实验方法】：1分离血清，并做好标记。2、洗涤红细胞，制备2%红细胞悬液，做好标记、同型交叉取试管2支分别注明主侧、次侧:主侧：受血得血清1滴+献血者2%红细胞悬液1滴。次侧：受血者2 %红细胞悬液1滴+献血者血清1滴。(3)充分混匀-离心1分钟（1000转/min ）-观察结果。结果观察：在白色背景下，先观

29、察上清液呈正常血清状即无溶血 现象，再轻摇试管，试管内血球呈现均匀混浊也无凝集。 为叉配血试验相合, 若有溶血或凝集均不可输。、异型交叉：“ O'型作为献血者献给“ A”或“B”或“AB'型，其结果是：主侧不凝，次侧凝。【注意事项】：1.严格查对，切不可将受血者、献血者姓名、标本、血型等搞错。2.观察结果、登记、出报告均应仔细查对。3. 吸管、试管应清洁干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染。4. 交叉配血时主侧、次侧一定要分清。尿液检验一、尿液理学及化学检验（尿液外观、SG PRO GLU KET URO【实验目的】：掌握尿液的一般理学检验及常用化学检验原理、 操作方法及

30、结果观察、报告。【实验原理】：1.PRO原理：磺基水杨酸发：在酸性条件下，磺基水杨酸的磺酸根阴离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀。加热醋酸法: 加热煮沸使蛋白质变性凝固，加乙酸使尿 pH接近等电点（pH5左右）而加速蛋白质沉淀。2.GLU（班氏法）原理：葡萄糖在碱性溶液中加热后，由环状结构变为带醛基的链状结构而具有还原性，可将硫酸铜还原为黄或红色的氧化亚铜（CnQ而沉淀。3. KET （朗格氏环状法）原理：尿中的酮体（丙酮和已酰乙酸）与亚硝基铁氰化钠和硫酸铵作用，可生成异硝基、异硝基胺，后者与（CN 53生成紫红色复合物。生成樱4. URO原理：在酸性溶液中，尿胆原与对二氨基本

31、甲醛反应,红色化合物。【实验试剂】：氰化钠、氨水、5%冰乙酸液、200g/L磺基水杨酸液、班氏试剂、Ehrlich 试剂亚硝基铁【实验器材】：试管、PH试纸、滴管、酒精灯、试管夹、尿比重计【实验方法】：1、尿色，透明度：正常人黄色透明，若遇混浊尿，采取加热加酸法鉴别；深黄色（黄胆病人）。2、尿PH值：正常尿液一般为弱酸必（PH6.5 ）。3、尿比重（SG）:成人为1.015 1.025 （多积尿），若受饮水、出汗影响比重波动于1.003 1.030之间（随机尿）。尿比重测定方法:斜持比重筒（量筒），将尿液沿管壁缓慢倒入量筒中以将比重计浮起为度,避免激起泡沫，如有泡沫，可用滤纸吸去，将比重计轻轻

32、放入并加以捻转,使其悬浮在尿液中，待比重计稍停稳后，读取液面的比重测度。4、尿蛋白定性试验（PRO）（两种方法）（1）加热醋酸法（参考方法）：取试管加尿至试管2/3处用试管夹夹持试管下1/3处-加热上1/3处的尿液（注意：不断转动试管均匀加热, 防止尿液沸溅）-加冰醋酸23滴-再加热煮沸-观察结果-报告。（2） 200g/L磺基水杨酸法（首选方法）：取试管加尿约1ml于试管内加磺柳酸数滴观察结果报告。5、尿糖定性试验（GLU）（班氏法）：取试管加班氏试剂 1ml于试管内加热煮沸试剂仍呈清亮蓝色滴加尿液23滴再次煮沸2min冷却观察结果-报告。6、尿酮体检验（KET）（即格氏环状法）：取试管一支

33、加尿液约 2ml 加冰乙酸数滴混匀加亚硝基铁氰化钠 （粉少许）震荡混匀沿管壁轻轻 加入氨水作环状试验报告。7、尿胆原检验（URO（欧氏法）：取试管加新鲜尿1ml加欧立区试剂0.1ml混匀静置10分钟在白色背景下，从管口向管底观察结果 报告。【注意事项】：1、认真观察尿色、量、测 PH。2、加热煮沸时，切忌管口对人，应不时振动试管，以防止溢出。3、尿胆原检验时尿液应新鲜，否则尿胆原在空气中氧化为尿胆素而致假阴性结果。4、在测尿比重时应注意校正温度及尿量不足时的校正方法。、尿液沉渣镜检【实验目的】：掌握尿沉渣标本制作方法及尿沉渣显微镜下检查的内容。【实验原理】：用显微镜检查方法，依据尿液细胞、管型

34、等有形成分的形态 特征，识别并记录其在一定显微镜视野内的数目。【实验器材】：玻片、离心机、试管、显微镜【实验方法】：取中号试管一支7加混合均匀尿液约至试管2/3处7离心（5500转/分钟）5分钟-一次性倾去上清液留取尿沉渣液约0.2ml -混匀7在载玻片上涂成薄片7镜检7报告报告方式:“少许”少数视野可见（1 4个）“+”占视野面积1/4或每个视野都有少量敬在（514个）“+”占视野面积的一半（15 29）“+”占视野面积的3/4 （3050）“+”满视野（50个以上）注：低倍镜下计数20个视野所见管型数，高倍镜下计数至少10个视野各类 细胞数。【注意事项】：1.尿在离心前和涂片前必须混匀2.

35、弃去上清液应一次性倾去勿来回颠倒。3.报告方式规范。三、1小时细胞排泄率测定【实验目的】：掌握尿液1小时细胞排泄率检验原理、方法及结果观察、报 告。【实验原理】：在日常生活不受限制的情况下，准确留取3小时的全部尿液。取混匀后的部分尿液离心，留沉淀液，混匀充入细胞计数池，计数一定体积 沉淀液中的红细胞、白细胞和管型，然后换算成 1小时尿中相应的数量。【实验器材】：量筒、细胞计数板、刻度离心管、离心机【实验方法】：1.准确测量尿量，并记录.2.将尿液充分混匀-取10ml尿于刻度离心内-离心1500r/min5分钟-准确吸取上清液9m|T轻轻混匀管底沉淀-取1滴充入计数板两侧的计 数池中T低倍镜下计

36、数18个大方格里的管型数，高倍镜下计数10个大方格 里的红细胞.白细胞包括肾小管上皮细胞-计算-报告计算:N=CX 10/D X 1000XC V/(10 X 3)式中：N为1小时尿中细胞或管型数D为计数的大格数C为计数D个大格所见的细胞或管型数V为3小时尿量毫升数【注意事项】：1.尿液标本留取时可不限制饮食，但勿过量饮水。2.尿在离心前和充池前必须混匀3. 尿液应新鲜检查，PH应在6以下，若为碱性尿，则细胞和管型易溶解。四、尿液分析仪的使用、 HCG佥测【实验目的】：掌握尿液分析仪的使用方法及 HCG检测原理、操作方法及结果观察、报告。【实验原理】：HCG佥测（胶乳凝集抑制试验）原理：将尿液

37、与抗 HCG血清混合，待反应后加入被HC®敏的胶乳悬液，若尿中含有 HCG则先于胶乳与血清结合，故胶乳仍呈均匀状，不出现凝集，反之，非孕妇尿液因不含HCG抗血清中的抗体则胶乳抗原发生反应，出现凝集。【实验试剂】：妊娠诊断血清、妊娠诊断抗原【实验器材】：尿液分析仪、显微镜、玻片、试管、尿液试纸条【实验方法】：1、尿液分析仪结构、原理见教材;尿液分析仪的使用：每2个实验台为一小组；由老师示教操作方法，注 意事项，然后每组抽人操作，认真操作，熟练操作程序，为以后的临床工作 打下坚实基础，并学会在使用仪器过程中爱护仪器，保养仪器。2. HCG检测：取玻片一张7于玻片的一端加被检尿液另一端加生

38、理盐水（阴性对照）各一滴-两端同时加HC蹴血清各一滴-混匀1分钟-再同时 加胶乳抗原各一滴-充分混匀-放置 5分钟后观察结果-报告阳性：不凝集阴性:凝集1.【注意事项】：尿液、抗血清和胶乳抗原必须按规定顺序滴加，滴量大小应一致。2.不同批号的试剂不能互相搭配使用。4.标本浑浊有沉淀时，应离心取上清液测定。3.室温低于20r，反应缓慢，应适当加温或延长反应时间。5. 试剂在2C8C冰箱保存，特别注意不能冰冻，否则胶乳上 HCG抗原释放，不能再凝集。五、尿常规（RT）检验【实验目的】掌握尿常规检验规程，熟悉使用尿液分析仪。【实验原理】见实验十三、十四【实验试剂】200g/L磺基本杨酸、5%冰乙酰【

39、实验器材】精灯【实验方法】：尿液分析仪、显微镜、玻片、试管、PH试纸、离心机、酒、理学检验尿色尿量透明度PH、尿蛋白定性（两种方法任选一种）1.法：取试管-加尿约1ml于试管内-加磺柳酸数滴-观察结果-报告。2.5%冰乙酰法：取试管-加尿至试管2/3处-用试管夹夹持试管下1/3处加热上1/3处的尿液（注意：不断转动试管均匀加热，防止尿液沸溅） 加冰醋酸23滴再加热煮沸观察结果报告。三、尿液沉渣镜检取中号试管一支加混合均匀尿液约至试管2/3处离心（5500转/分钟）5分钟一一次性倾去上清液留取尿沉渣液约 0.2ml 一混匀一在载玻片上 涂成薄片一镜检一报告报告方式f细胞成分：用最低值最高值/HP

40、F（或平均值/HPF）报管型成分：用最低值最高值/LPF（或平均值/LPF）报告。占视野1/4为+,占视野I结晶成分：用高倍视野观察，1/2为+，占视野3/4为+，满视野为+。四、尿液分析仪使用每2个实验台为一小组；由老师示教操作方法，注意事项，然后每组抽人操 作，认真操作，熟练操作程序，为以后的临床工作打下坚实基础，并学会在 使用仪器过程中爱护仪器，保养仪器。排泄物及分泌物检验一、粪常规（Rt）检验及粪隐血（0B【实验目的】：掌握粪便外观、显微镜检查的方法及粪便隐血试验的方法,熟悉镜检时粪便中各物质的形态和估计方式。【实验原理】：粪隐血（0B试验原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过 氧化物酶

41、的活性，能催化过氧化氢分解释放新生态氧，将受体邻联甲苯胺氧 化成邻甲偶氮苯而显蓝色。【实验试剂】【实验器材】【实验方法】生理盐水、10g/L邻联甲苯胺冰乙酸溶液、3%过氧化氢 显微镜、竹签、载玻片、滤纸、粪便外观检查1 .颜色2.粘稠度二、显微镜检验取玻片-加生理盐水1 2滴-用竹签自粪便多处取材(特别是脓、血、粘液等异常部分)-与盐水混合涂成薄片(以能透过字迹为度)-低倍 镜观察有无虫卵、原虫-转高倍镜检验细胞情况并对其数量进行估计-报告报告方式：细胞数报告1020个视野的最低值至最高值或报告平均值。低倍镜直接报告见到XX虫卵及食物残渣的多或少。三、粪便潜血试验(OB试验)用竹签挑取少许粪便

42、于滤纸片上，滴加邻联甲苯胺冰乙酸液23滴,再加 HQ (1mol/L )23滴，于标本上立即观察结果，报告。(-)2后仍不显色 (+) 10S后由浅兰渐变深兰 (+)初显浅兰褐色渐变成明显兰褐色 (+)立即呈现兰褐色 (+)立即呈现黑兰色【注意事项】：1. 镜检时至少每张涂片观察10个视野。2. 因3%过氧化氢不稳定，长时间放置可使反应减弱，所以试验前应检查试剂是否有效，可将过氧化氢滴于未染色的血片上， 如产生泡沫表示过氧 化氢有效。、阴道分泌物检验【实验目的】掌握阴道清洁度的内容、判定标准及常见阴道菌的形态。【实验器材】阴道分泌物标本片、显微镜、擦镜纸、清洁液、镜油【实验方法】.阴道分泌物清

43、洁度检查：先用低倍镜观察，再用高倍镜检查，根据上皮细胞、白细胞(或脓细胞)、杆菌、球菌的多少分度。(清洁度I , n,阴道清洁度的分级判断清洁度阴道杆菌杂菌（球菌）上皮细胞白细胞（或脓细胞）I+-+0-5/H PFn+-+5-15/H PFrn-+-15-30/H PFIV-+-> 30/HPF二.展片：阴道杆菌、霉菌、淋病双球菌、阴道线索细胞等。（要求绘出镜下形态）【注意事项】：【实验目的】看展片时不可动粗调更不要移动视野，看不清只可动微调体液检验、潘氏试验、李凡他试验、精子镜检:掌握潘氏试验、李凡他试验的检测原理、操作方法及结果观察、报告，熟悉镜下异常及正常的精子形态。【实验原理】潘氏试验原理：脑积液中球蛋白与苯酚结合，形成不溶性蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。李凡他试验原理：浆膜上皮细胞在炎症反应的刺激下分泌粘蛋白量增加。粘蛋白是一种酸性糖蛋白，等电点为 PHA5,因此在稀乙酸中出现白色沉淀。【实验试剂】：饱和苯酚溶液、冰乙酸【实验器材】：试管、吸管、量筒、滴管【实验方法】：一、潘氏法或潘迪试验取饱和石碳酸（苯酚）约2ml于试管中，用滴管加入标本1滴，置黑色 背景处观察，如显白色混浊