临床检验基础实验指导

1、临床检验基础学实验指导血液常规检验一、微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定与使用【实验目的】：掌握微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、构造与使用。【实验试剂】：红细胞稀释液、75乙醇、消毒药棉。【实验器材】： 一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。【实验原理】：一次性采血针刺破毛细血管后，用微量吸管吸取一定量的血液，稀释一定的倍数，冲入计数池计数一定体积内的细胞的数量。【实验方法】：一、微量吸管的使用：用抗凝血训练微量吸管的使用。二、毛细血管采血（以红细胞计数为例）：准备：取清洁干燥试管一支，加2ml红细胞稀释液。 采血部位选择、按摩75

2、乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒待酒精挥发干（否则血流不成滴）自指尖腹内侧迅速刺针擦去第一滴血准确吸取10ul血液用无菌干棉球压住伤口止血用无菌干棉球擦去管尖外围余血后将血液释放到稀释液底部回吸上清液2-3次轻轻混匀。三、计数板构造与应用1计数板构造外观构造：每块计数板由“H”型凹槽分上下两个计数室，在计数室两侧各有一条支柱，比计数室高出0.1mm，将一块平整光滑的血细胞计数专用盖玻片（24.0mm×20.0mm×0.6mm）覆盖其上时，盖玻片与计数室间形成0.1mm的缝隙。格子构造：计数池长、宽各3mm，平均分成9个大格，每个大方格的容积是0.1 mm3四角的四个大方格分别用

3、单线划分成16个中方格，是白细胞计数区域；中央的大方格用双线条划分成25个中方格，每个中方格又用单线划分成16个小方格，其中四角和正中的5个中方格是红细胞计数区域。2计数板的使用： 用清洁干燥柔软的纱布擦拭计数板及盖玻片用推盖法从计数板下缘向前平推盖玻片将其盖在计数室上充分混匀细胞悬液充池静置观察细胞分布情况（若严重不匀，应重新充池。）【注意事项】：1采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。2针刺应迅速，深度适宜（约23mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。3微量吸管取血时应将微量吸管管尖侧着插入血滴中央。若血流不暢，可以左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用

4、力挤压，造成组织液混入，影响结果准确性。4计数板在使用中勿让手指接触计数池及盖玻片表面，以访油腻污染，致使充液时起泡。二、血涂片的制作,瑞氏染色【实验目的】：掌握血片制作方法，瑞氏染色原理及方法。【实验试剂】：瑞吉氏复合染液 （液、液）【实验器材】：显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球【实验原理】：细胞的着色既有化学的亲和作用，又有物理的吸附作用，不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，所以对染料的亲和力也不一样，因此将细胞染成不同的颜色。【实验方法】：一、瑞一吉氏复合染液配制液：取瑞特染粉1g，吉姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸

5、出上层染液，再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上层染液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色瓶中，每天早晚各振摇3共5天，再存放一周，将染液过滤后即可使用。液：磷酸盐缓冲液（PH6.56.8），取磷酸二氧钾（无水）6.64g，磷酸氟二钠（无水）2.56g，加少量蒸馏水溶解，调整PH后，加水至1000ml。二、血片制作、瑞氏染色方法准备：取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。1、制备血涂片：取载玻片取血1滴于载玻片右端（边缘留1.5cm空隙）左手持载玻片，右手持推玻片将推玻片放至血滴前沿逐渐后移至血滴沿推片散开后，推玻片与载玻片成30°35°的夹角以平稳的速度将血液

6、向前推进干燥（手持载玻片末端迅速在空气中挥动干燥）。2、染色：将干透的血涂片放在水平位置加瑞吉氏复合染液液数滴，以染液覆盖整个血膜为度静置染0.51min滴加约2倍于液量的液用洗耳球吹气混匀染色510min平持玻片用流线型水洗干燥镜检【注意事项】：1严格皮肤消毒。2.血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。3.染料放置时间越长，美兰逐渐氧化为天青，染色效果越好。4染液淡，室温低，细胞多则染色时间长，反之减少染色时间。5水洗方法为平持血涂片流线型水缓缓冲洗干净，不要先倒掉染液。三、白细胞计数（WBC）【实验目的】：掌握白细胞计数的原理、操作方法与结果报告。【实验原理】：用白细

7、胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞，充入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量。【实验试剂】：白细胞稀释液 【实验器材】： 显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒【实验方法】：准备：取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。采血部位按摩75乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒待酒精挥发干（否则血流不成滴）自指尖腹内侧迅速刺针擦去第一滴血准确吸取20ul血液用无菌干棉球压住伤口止血用无菌干棉球擦去管尖外围余血后将血液轻轻释放到稀释液底部回吸上清液2-3次混匀室温静置至液体变为棕褐色即红细胞破坏完全清洁计数板、盖玻片充池静置23min

8、待细胞下沉低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数计算报告。计算：WBC=四个大方格内的白细胞数（N）/4×10×20×106=N/20×109/L【注意事项】：1采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。2针刺应迅速，深度适宜（约23mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。3.稀释液要过滤使用，试管、计数板均须清洁，以免混入杂质被误认为白细胞。4.加稀释液、血液量应精确，以保证稀释倍数。5.计数池内细胞分布要均匀，每个大方格间白细胞数差异不得超过均值的±10，否则要重新充液计数。6.严格掌握计数原则，以免人为扩大或缩小计数区域。

9、7.白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，反之白细胞过低时可计数8个大方格内白细胞数或加大取血量。四、白细胞分类计数（DC）【实验目的】：掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种白细胞的镜下形态。【实验原理】：将血液制备成涂片，经瑞吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。【实验试剂】：瑞吉氏复合染液 【实验器材】：显微镜、外周血标本片、香柏油、擦镜纸、清洁剂【实验方法】：准备：血涂片制备及瑞吉氏染色待干低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的区域转油镜按一定的规律移动视野，依次进行分类计够100个白细胞算出各种白细胞的百分比报告【注意事项

10、】：1.涂片制备要厚薄适中、均匀、头体尾分明。2.分类时要有程序地连续进行，避免主观选择视野。3.分类中如见幼红细胞，不计入100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应注明其所属阶段，4.分类中应注意观察成熟红细胞、血小板的形态染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及其他异常所见。五、白细胞计数（WBC）及分类计数(DC)【实验目的】：掌握白细胞计数及分类计数原理、方法与结果报告【实验原理】：白细胞计数原理：用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞，充入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量。 白细胞分类计数原理

11、：将血液制备成涂片，经瑞吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。【实验试剂】：白细胞稀释液、瑞吉氏复合染液【实验器材】：显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒、载玻片、推玻片、香柏油、擦镜纸、清洁剂【实验方法】：准备：1.取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。2.取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。采血部位按摩75乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒待酒精挥发干（否则血流不成滴）自指尖腹内侧迅速刺针擦去第一滴血准确吸取20ul血液用无菌干棉球擦去管尖外围余血后将血液轻轻释放到稀释液底部回吸上清液2-

12、3次混匀另取血一滴于载玻片的右端立即推制血膜用无菌干棉球压住伤口止血清洁计数板、盖玻片充池（静置23min待细胞下沉）低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数将干透的血膜进行瑞吉氏染色油镜下分类计数计算报告。六、红细胞计数（RBC）、Hb测定【实验目的】：掌握红细胞计数，Hb测定原理、操作方法，规范的报告结果【实验原理】：红细胞计数原理：用等滲稀释液将血液稀释一滴倍数，充入计数池，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求得内升血液中的红细胞数。Hb测定（HiCN法）原理：血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，后者再与氰离子结合形成稳定地氰化搞铁血红蛋白（HiCN），HiCN在规定波长（540

13、nm）和液层厚度（1cm）的条件下具有一定的毫摩尔消光系数。可用标准的高精度分光光度计进行直接定量测定，或用HiCN标准液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。【实验试剂】：红细胞稀释液（甲醛枸木缘酸盐稀释液）， HiCN转化液【实验器材】：改良Neubauer计数板、显微镜、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、玻璃棒、【实验方法】：RBC：取清洁干燥试管一支加红细胞稀释液1.99ml加未梢血10ul于稀释液底部吸取上清液嗽洗34次颠倒混匀清洁计数板，盖玻片充液静置23计数（中央大格中四角及正中5个方各细胞数）计算RBC=5个中方格细胞数×5×10×2

14、00×106=5个中方格细胞数×1012/L。Hb测定:1.直接定量测定法：取中号试管一支加HiCN转化液5ml加未梢血20ul混匀静置5721比色，波长540nm，以转化液为空白对照管测其吸光度“A”计算（“A”×367.7）报告2.标准曲线法：将血红蛋白标准液稀释成不同的三种浓度（150g/L、100g/L、50g/L）分别测其吸光度“A”，以“A”为纵坐标，血红蛋白标准液参考值（g/L）为横坐标，绘制标准曲线。通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度。【注意事项】：1.取血应顺利、准确，采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症，不得过渡挤压，红细胞数量明显增

15、高者可适当加大稀释倍数。2. HiCN转化液应置棕色瓶于4冰箱中，不能储存于白色瓶、塑料瓶及强光下，否则会使CN丢失，结果偏低。3HiCN转化液中有氧化钾剧毒，防止污染。测定后的比色液不能与酸性溶液混合，否则可产生剧毒的氢氰酸气体。4.所用分光光度计的波长、吸光度需要校正，带宽应小于1nm，比色杯光径1.000cm时，测定温度为2025。七、血液常规检验【实验目的】：掌握血常规的连续操作规程并规范的报告结果。【实验原理】：见实验二、三、四、六【实验试剂】：红细胞稀释液、白细胞稀释液、瑞吉氏复合染液、HiCN转化液【实验器材】：改良Neubauer计数板、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、显微镜、

16、玻棒。【实验方法】：取大、中、小号试管各一支分别加HiCN转化液5ml、红细胞稀释液2ml、白细胞稀释液0.38ml手指消毒针刺分别取未梢血10ul于红细胞稀释液中、20ul于白细胞稀释液中、20ul于HiCN转化液中并及时混匀取清洁干燥玻片粘取1滴血液于玻片一端推制血片待干721比色瑞氏染色白细胞及红细胞计数DC计算报告（血常规结果报告）正常值： 成人 儿童 新生儿1.WBC:（410）×109/L （512）×109/L （1520）×109/L 成年男性 成年女性 儿童2.RBC:（45.5）×1012/L (3.5-5) ×1012/L

17、 (6-7) ×1012/L3.HB: 120-165g/L 110-150 g/L 170-200 g/L4.DC: N: 杆状15分叶5070L：2040 M：38 E：0.55 B：01【注意事项】：1.取血应顺利、准确，采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症，不得过度挤压。2HiCN转化液中有氧化钾巨毒，防止污染。测定后的比色液不能与酸性溶液混合，否则可产生剧毒的氢氰酸气体。3细胞计数混合不易过分震摇。4. 瑞氏染色时加染液与缓冲液的比例为1：1或1：2。 5.采取标本的顺序：红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血片制作八、血小板计数（BPC或PLT）【实验目的】：掌握

18、血小板的计数原理、方法、镜下形态及结果报告。【实验原理】：用稀释液将血液稀释一定倍数后混匀，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积的血小板数，经换算求得每升血液内的血小板数。【实验试剂】：10g/L草酸铵液 【实验器材】：显微镜、：改良Neubauer计数板【实验方法】：准备：取清洁干燥的小试管一支，加10g/L草酸铵液0.38ml 准确取自然流出的外周血20ul轻轻放入到上述稀释液底部回吸上清液漱洗吸管23次混匀室温静置10 min清洁计数板、盖玻片混匀细胞悬液后充池静置10 min15min于高倍镜下计数中央大方格内四角和中央5个中方格内血小板总数计算报告 计算：血小板数/L5个中方格内血小

19、板总数×109/L【注意事项】：1. 所用试剂、器材应10g/L草酸铵液稀释液中无尘埃、细菌等污染。2.毛细血管采血时，针刺深度应达3mm。采血要快避免血液凝固. 若遇血小板成簇分布时，应重采标本计数.3.细胞悬液充入计数池中静置时，应注意保持湿度，避免水分蒸发。4.计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃的鉴别。血小板为轻度折光性的园形、椭园形。5血小板计数应在1h内完成，否则结果可降低。九、网织红细胞计数（RC）【实验目的】：掌握网织红细胞计数原理、测定方法、镜下形态、结果报告。【实验原理】：网织红细胞为晚幼红细胞脱核后，但尙未完全成熟的红细胞。其胞质中尙残存核糖体、核糖

20、核酸等碱性物质，经活体染色后于胞质中可见蓝绿色网点状或点粒状结构。【实验试剂】：10g/L黄焦油篮生理盐水溶液【实验器材】：显微镜、试管、载玻片、推玻片【实验方法】：准备：取清洁干燥小试管一支，加10g/L黄焦油篮生理盐水溶液23滴 取外周血23滴于上述试管中立即混匀37下染色1520min取试管里的混合血液一滴于载玻片一端推制成薄血膜待干燥油镜下计数（于目镜筒中放一缩小视野的硬纸片）至少1000个红细胞中的网织红细胞数计算报告计算：网织红细胞百分比计数的网织红细胞数/100【注意事项】：1.网织红细胞必须在活体染色下才能显示。2.染色时血液与染料的比例约为1：1，贫血时适当增加血量，室温较低

21、时适当延长染色时间或置37温箱.3.涂片应厚薄适宜，以红细胞不重叠为度，涂片后应及时计数，否则网状结构消失。4.计数区域一般选择血膜的体部，自体部向尾部迂回检查。十、嗜酸性粒细胞计数【实验目的】：掌握嗜酸性粒细胞直接计数的原理、操作方法、镜下形态及结果报告。【实验原理】：用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，破坏红细胞和其他大部分白细胞并使嗜酸性粒细胞着色，滴入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积内的嗜酸性粒细胞，经换算得出每升血液中嗜酸性粒细胞数。【实验试剂】：2伊红丙酮嗜酸性粒细胞稀释液 【实验器材】：显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒【实验方法】：准备：取清洁干

22、燥试管一支，加0.38ml嗜酸性粒细胞稀释液。 精确吸取外周血20ul轻轻放入到上述稀释液底部回吸上清液漱洗吸管23次混匀室温静置清洁计数板、盖玻片混匀细胞悬液后充池静置3 min5min于低倍镜下计数两侧计数池中10大方格（每侧计数池的四角和中央大方格）内的嗜酸性粒细胞数计算报告 计算：嗜酸性粒细胞数/L10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×106/L【注意事项】：1.计数应在30min内完成，因时间过长嗜酸性粒细胞可被溶解，结果偏低。 2.血液加入稀释液后应及时混匀，否则易致血液凝固和细胞聚集，但不易用力振摇以免嗜酸性粒细胞破碎。3.震摇与残留的中性粒细胞区别，中性粒细胞

23、一般不受色或受色极浅，且其颗粒较小。4.做嗜酸性粒细胞计数最好固定时间，以免受日间生理变化影响十一、血细胞分析仪使用、LEC、血沉【实验目的】：熟悉血细胞分析仪的检测原理及方法；掌握LEC的镜下形态、血沉检测方法及结果观察报告。【实验原理】：见仪器说明书【实验试剂】：溶血素、清洗液【实验器材】：血细胞分析仪、显微镜、血沉架、血沉管【实验方法】：红细胞沉降率（ESR）:取抗凝血约2ml灌制血沉管“0”刻度垂直竖立在血沉架上室温静置1小时观察红细胞沉降毫米数报告（红细胞沉降率：mm/h）十二、凝血酶原时间测定（PT）【实验目的】：目的掌握PT测定方法、原理及结果观察报告【实验原理】：在受检血浆中加

24、入足量的凝血活酶和钙离子，测定血浆凝固所需的时间，即为血浆凝血酶原时间。本试验是外原性凝血系统常用的筛检试验。【实验试剂】：1.血浆2.组织凝血活酶3.氯化钙溶液【实验器材】：恒温水浴箱、离心机、试管、微量加样器、秒表【实验方法】：准备：将1.2.3.试剂分别置37水溶预热，小试管预热。取已预热清洁干燥小试管加血浆0.1ml，同时加组织凝血活酶液0.1ml、cacl20.1ml混匀、开动秒表计时在37水溶中不断轻轻摇动小试管8取出观察，来回倾斜试管，混合物不再流动时(出现胶冻状)立即停表，读取时间即为凝血酶原时间，作3次取均值报告。【注意事项】：1.采血应“一针见血”，抗凝剂与血液比例（1：9

25、）应准确。取血后4h内完成测定。2.试剂在用前先预温到测定温度，且不能超过30分钟。3.标本测定前应先测定正常人混合血浆，其PT值在允许范围内才能测定样本。4.必须在36.537.5温度下操作。输血技术一、ABO血型鉴定（正、反定型）【实验目的】：掌握血型鉴定（正定、反定）原理、测定方法及结果观察、分析、报告。【实验原理】：根据红细胞表面A、B抗原与相应的抗体特异性结合，可使红细胞出现凝集反应这一原理，通过正、反定型来判断型别。正定型：用已知抗A、抗B型血清来测定红细胞上有无相应的A、B抗原；反定型：用已知A抗原和B抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗A、抗B抗体。【实验试剂】：标准抗A、抗B血

26、清；5A、B 型标准红细胞生理盐水悬液；生理盐水【实验器材】：试管、离心机、记号笔、滴管、显微镜【实验方法】：准备：1、分离血清，并做好标记。2、洗涤红细胞，制备5红细胞悬液，做好标记。一、正定（用已知标准血清鉴定血型）。取试管2支分别标明抗A、抗B字样加5方红C晨液各1滴离离心（1000转/min 1分钟）观察结果。二、反定（已知标准红细胞鉴定血型）取标准红细胞A、B型各1-2滴分别装在大小相等并表明A、B字样的两支试管中分别加被检者血清1-2滴混匀离心观察结果 结果判断【注：（）示凝集（）示不凝集】正定反定抗A（B型）抗B（A型）被检者血型B型标准红细胞A 型标准红细胞【注意事项

27、】：1.格查对，切不可将姓名、标本、血型等搞错，要求正、反定型结果一致。2.观察结果、登记、出报告均应仔细查对3.滴管、试管应清洁干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染二、交叉配血实验（同型、异型配血）【实验目的】：掌握盐水介质配血法的原理、操作方法及结果观察、分析、报告。【实验原理】：天然抗体IgM因其分子链较长，在盐水介质中，可以克服红细胞表面电荷的排斥力，与含有相对应抗原的红细胞结合并出现肉眼可见的凝集。【实验试剂】：生理盐水【实验器材】：试管、滴管、离心机、记号笔【实验方法】：准备：1、分离血清，并做好标记。2、洗涤红细胞，制备2红细胞悬液，做好标记一、同型交叉（1）取试管2支分别注

28、明主侧、次侧： 主侧：受血得血清1滴+献血者2红细胞悬液1滴。 次侧：受血者2红细胞悬液1滴+献血者血清1滴。（2）充分混匀离心1分钟（1000转/min）观察结果。（3）结果观察：在白色背景下，先观察上清液呈正常血清状即无溶血现象，再轻摇试管，试管内血球呈现均匀混浊也无凝集。为叉配血试验相合，若有溶血或凝集均不可输。二、异型交叉：“O”型作为献血者献给“A”或“B”或“AB”型，其结果是：主侧不凝，次侧凝。【注意事项】：1.严格查对，切不可将受血者、献血者姓名、标本、血型等搞错。2.观察结果、登记、出报告均应仔细查对。3.吸管、试管应清洁干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染。4.交叉配血

29、时主侧、次侧一定要分清。尿液检验一、尿液理学及化学检验（尿液外观、SG、PRO、GLU、KET、URO）【实验目的】：掌握尿液的一般理学检验及常用化学检验原理、操作方法及结果观察、报告。【实验原理】：1.PRO原理：磺基水杨酸发：在酸性条件下，磺基水杨酸的磺酸根阴离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀。加热醋酸法：加热煮沸使蛋白质变性凝固，加乙酸使尿pH接近等电点（pH5左右）而加速蛋白质沉淀。2.GLU（班氏法）原理：葡萄糖在碱性溶液中加热后，由环状结构变为带醛基的链状结构而具有还原性，可将硫酸铜还原为黄或红色的氧化亚铜（Cu2O）而沉淀。3.KET（朗格氏环状法）原理：尿中的酮

30、体（丙酮和已酰乙酸）与亚硝基铁氰化钠和硫酸铵作用，可生成异硝基、异硝基胺，后者与（CN）53生成紫红色复合物。4.URO原理：在酸性溶液中，尿胆原与对二氨基本甲醛反应，生成樱红色化合物。【实验试剂】：5冰乙酸液、200g/L磺基水杨酸液、班氏试剂、亚硝基铁氰化钠、氨水、Ehrlich试剂【实验器材】：试管、PH试纸、滴管、酒精灯、试管夹、尿比重计【实验方法】：1、尿色，透明度：正常人黄色透明，若遇混浊尿，采取加热加酸法鉴别；深黄色（黄胆病人）。2、尿PH值：正常尿液一般为弱酸必（PH6.5 ）。3、尿比重(SG)：成人为1.0151.025（多积尿），若受饮水、出汗影响比重波动于1.0031.

31、030之间（随机尿）。尿比重测定方法：斜持比重筒（量筒），将尿液沿管壁缓慢倒入量筒中以将比重计浮起为度，避免激起泡沫，如有泡沫，可用滤纸吸去，将比重计轻轻放入并加以捻转，使其悬浮在尿液中，待比重计稍停稳后，读取液面的比重测度。4、尿蛋白定性试验(PRO)（两种方法）（1）加热醋酸法（参考方法）：取试管加尿至试管2/3处用试管夹夹持试管下1/3处加热上1/3处的尿液（注意：不断转动试管均匀加热，防止尿液沸溅）加冰醋酸23滴再加热煮沸观察结果报告。（2）200g/L磺基水杨酸法（首选方法）：取试管加尿约1ml于试管内加磺柳酸数滴观察结果报告。5、尿糖定性试验(GLU)（班氏法）：取试管加班氏试剂1

32、ml于试管内加热煮沸试剂仍呈清亮蓝色滴加尿液23滴再次煮沸2min冷却观察结果报告。6、尿酮体检验(KET)（即格氏环状法）：取试管一支加尿液约2ml加冰乙酸数滴混匀加亚硝基铁氰化钠（粉少许）震荡混匀沿管壁轻轻加入氨水作环状试验报告。 7、尿胆原检验（URO）（欧氏法）：取试管加新鲜尿1ml加欧立区试剂0.1ml混匀静置10分钟在白色背景下，从管口向管底观察结果报告。【注意事项】：1、认真观察尿色、量、测PH。 2、加热煮沸时，切忌管口对人，应不时振动试管，以防止溢出。3、尿胆原检验时尿液应新鲜，否则尿胆原在空气中氧化为尿胆素而致假阴性结果。4、在测尿比重时应注意校正温度及尿量不足时的校正方法

33、。二、尿液沉渣镜检【实验目的】：掌握尿沉渣标本制作方法及尿沉渣显微镜下检查的内容。【实验原理】：用显微镜检查方法，依据尿液细胞、管型等有形成分的形态特征，识别并记录其在一定显微镜视野内的数目。【实验器材】：玻片、离心机、试管、显微镜【实验方法】：取中号试管一支加混合均匀尿液约至试管2/3处离心（5500转/分钟）5分钟一次性倾去上清液留取尿沉渣液约0.2ml混匀在载玻片上涂成薄片镜检报告报告方式：“少许”少数视野可见（14个）“+”占视野面积1/4或每个视野都有少量敬在（514个）“+”占视野面积的一半（1529）“+”占视野面积的3/4（3050）“+”满视野（50个以上）注：低倍镜下计数2

34、0个视野所见管型数，高倍镜下计数至少10个视野各类细胞数。【注意事项】：1尿在离心前和涂片前必须混匀2弃去上清液应一次性倾去勿来回颠倒。3报告方式规范。三、1小时细胞排泄率测定【实验目的】：掌握尿液1小时细胞排泄率检验原理、方法及结果观察、报告。【实验原理】：在日常生活不受限制的情况下，准确留取3小时的全部尿液。取混匀后的部分尿液离心，留沉淀液，混匀充入细胞计数池，计数一定体积沉淀液中的红细胞、白细胞和管型，然后换算成1小时尿中相应的数量。【实验器材】：量筒、细胞计数板、刻度离心管、离心机【实验方法】：1.准确测量尿量,并记录.2.将尿液充分混匀取10ml尿于刻度离心内离心1500r/min5

35、分钟准确吸取上清液9ml轻轻混匀管底沉淀取1滴充入计数板两侧的计数池中低倍镜下计数18个大方格里的管型数,高倍镜下计数10个大方格里的红细胞.白细胞包括肾小管上皮细胞计算报告计算:N=C×10/D×1000×V/(10×3)式中：N为1小时尿中细胞或管型数D为计数的大格数C为计数D个大格所见的细胞或管型数V为3小时尿量毫升数【注意事项】：1.尿液标本留取时可不限制饮食，但勿过量饮水。2尿在离心前和充池前必须混匀3尿液应新鲜检查，PH应在6以下，若为碱性尿，则细胞和管型易溶解。四、尿液分析仪的使用、HCG检测【实验目的】：掌握尿液分析仪的使用方法及 HCG

36、检测原理、操作方法及结果观察、报告。【实验原理】：HCG检测（胶乳凝集抑制试验）原理：将尿液与抗HCG 血清混合，待反应后加入被HCG致敏的胶乳悬液，若尿中含有HCG，则先于胶乳与血清结合，故胶乳仍呈均匀状，不出现凝集，反之，非孕妇尿液因不含HCG，抗血清中的抗体则胶乳抗原发生反应，出现凝集。【实验试剂】：妊娠诊断血清、妊娠诊断抗原【实验器材】：尿液分析仪、显微镜、玻片、试管、尿液试纸条【实验方法】：1、尿液分析仪结构、原理见教材；尿液分析仪的使用：每2个实验台为一小组；由老师示教操作方法，注意事项，然后每组抽人操作，认真操作，熟练操作程序，为以后的临床工作打下坚实基础，并学会在使用仪器过程中

37、爱护仪器，保养仪器。2. HCG检测：取玻片一张于玻片的一端加被检尿液另一端加生理盐水(阴性对照)各一滴两端同时加HCG抗血清各一滴混匀1分钟再同时加胶乳抗原各一滴充分混匀放置5分钟后观察结果报告阳性:不凝集阴性:凝集【注意事项】：1.     尿液、抗血清和胶乳抗原必须按规定顺序滴加，滴量大小应一致。2.     不同批号的试剂不能互相搭配使用。3.     室温低于20，反应缓慢，应适当加温或延长反应时间。4.     标本浑浊有沉

38、淀时，应离心取上清液测定。5.试剂在28冰箱保存，特别注意不能冰冻，否则胶乳上HCG抗原释放，不能再凝集。五、尿常规（RT）检验【实验目的】：掌握尿常规检验规程，熟悉使用尿液分析仪。【实验原理】：见实验十三、十四【实验试剂】：200g/L磺基本杨酸、5%冰乙酰【实验器材】：尿液分析仪、显微镜、玻片、试管、PH试纸、离心机、酒精灯【实验方法】：一、理学检验尿色 尿量 透明度 PH二、尿蛋白定性（两种方法任选一种）1法：取试管加尿约1ml于试管内加磺柳酸数滴观察结果报告。2.5%冰乙酰法：取试管加尿至试管2/3处用试管夹夹持试管下1/3处加热上1/3处的尿液（注意：不断转动试管均匀加热，防止尿液沸

39、溅）加冰醋酸23滴再加热煮沸观察结果报告。三、尿液沉渣镜检取中号试管一支加混合均匀尿液约至试管2/3处离心（5500转/分钟）5分钟一次性倾去上清液留取尿沉渣液约0.2ml混匀在载玻片上涂成薄片镜检报告细胞成分：用最低值最高值/HPF(或平均值/HPF)报报告方式 管型成分：用最低值最高值/LPF(或平均值/LPF)报告。结晶成分：用高倍视野观察，占视野1/4为+，占视野1/2为+，占视野3/4为+，满视野为+。四、尿液分析仪使用 每2个实验台为一小组；由老师示教操作方法，注意事项，然后每组抽人操作，认真操作，熟练操作程序，为以后的临床工作打下坚实基础，并学会在使用仪器过程中爱护仪器，保养仪器

40、。排泄物及分泌物检验一、粪常规（Rt）检验及粪隐血（OB）【实验目的】：掌握粪便外观、显微镜检查的方法及粪便隐血试验的方法，熟悉镜检时粪便中各物质的形态和估计方式。【实验原理】：粪隐血（OB）试验原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢分解释放新生态氧，将受体邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。【实验试剂】：生理盐水、10g/L邻联甲苯胺冰乙酸溶液、3过氧化氢【实验器材】：显微镜、竹签、载玻片、滤纸【实验方法】：一、粪便外观检查1颜色 2.粘稠度二、显微镜检验取玻片加生理盐水12滴用竹签自粪便多处取材（特别是脓、血、粘液等异常部分）与盐水混合涂成薄片（以能透过字迹为度

41、）低倍镜观察有无虫卵、原虫转高倍镜检验细胞情况并对其数量进行估计报告报告方式：细胞数报告1020个视野的最低值至最高值或报告平均值。低倍镜直接报告见到XX虫卵及食物残渣的多或少。三、粪便潜血试验（OB试验）用竹签挑取少许粪便于滤纸片上，滴加邻联甲苯胺冰乙酸液23滴，再加H2O2（1mol/L）23滴，于标本上立即观察结果，报告。（-）2后仍不显色（+）10S后由浅兰渐变深兰结果观察 （+）初显浅兰褐色渐变成明显兰褐色（+）立即呈现兰褐色 （+）立即呈现黑兰色【注意事项】：1.镜检时至少每张涂片观察10个视野。2.因3过氧化氢不稳定，长时间放置可使反应减弱，所以试验前应检查试剂是否有效，可将过氧

42、化氢滴于未染色的血片上，如产生泡沫表示过氧化氢有效。二、阴道分泌物检验【实验目的】：掌握阴道清洁度的内容、判定标准及常见阴道菌的形态。【实验器材】：阴道分泌物标本片、显微镜、擦镜纸、清洁液、镜油【实验方法】：一.阴道分泌物清洁度检查：先用低倍镜观察，再用高倍镜检查，根据上皮细胞、白细胞（或脓细胞）、杆菌、球菌的多少分度。(清洁度,)阴道清洁度的分级判断清洁度阴道杆菌杂菌（球菌）上皮细胞白细胞（或脓细胞）+-+-0-5/HPF5-15/HPF15-30/HPF30/HPF二.展片:阴道杆菌、霉菌、淋病双球菌、阴道线索细胞等。（要求绘出镜下形态）【注意事项】：看展片时不可动粗调更不要移动视野,看不

43、清只可动微调体液检验一、潘氏试验、李凡他试验、精子镜检【实验目的】：掌握潘氏试验、李凡他试验的检测原理、操作方法及结果观察、报告，熟悉镜下异常及正常的精子形态。【实验原理】：潘氏试验原理：脑积液中球蛋白与苯酚结合，形成不溶性蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。李凡他试验原理：浆膜上皮细胞在炎症反应的刺激下分泌粘蛋白量增加。粘蛋白是一种酸性糖蛋白，等电点为PH35，因此在稀乙酸中出现白色沉淀。【实验试剂】：饱和苯酚溶液、冰乙酸【实验器材】：试管、吸管、量筒、滴管【实验方法】：一、潘氏法或潘迪试验取饱和石碳酸（苯酚）约2ml于试管中，用滴管加入标本1滴，置黑色背景处观察，如显白色混浊即为阳性，结果可根据白色浑浊程度