HPLC法测定白土茯苓中β-谷甾醇的含量3700字

1、HPLC法测定白土茯苓中-谷甾醇的含量3700字                  作者：支文星,程玉钏,李先荣 李先荣,【摘要】 目的 建立白土茯苓中-谷甾醇的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为sinachrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm,5 m),甲醇-0.1%磷酸(982)为流动相,检测波长为210 nm,流速为1.0 mL/min。结果 -谷甾醇在0.228.8 g范围内线性关系良好,r1

2、.000 0；平均回收率为96.5%,RSD1.15%。结论 本方法简便准确,重复性好,可作为白土茯苓药材质量控制的有效方法。 【关键词】 -谷甾醇；白土茯苓；高效液相色谱法；含量测定 Abstract：Objective To establish the method to determine the content of -sitosterol in Rhizoma Heterosmilacis Japonicae. Method -sitosterol in Rhizoma Heterosmilacis Japonicae was determined by HPLC. Chromato

3、graphic column was sinachrom ODS-BP 5 m column (4.6 mm×250 mm). Mobile phase was methanol-0.1% H3PO4 liquor. Detection wavelength was 210 nm. Flow rate was 1.0 mL/min. Result -sitosterol showed a good linear curve in the range of 0.228.8 g (r1.000 0). The average recovery was 96.5% with RSD of

4、1.15%. Conclusion The method was accurate and reproducible, and can be used to control the quality of Rhizoma Heterosmilacis Japonicae. Key words：-sitosterol；Rhizoma Heterosmilacis Japonicae；HPLC；content determination 白土茯苓为百合科肖菝葜属植物肖菝葜、短柱肖菝葜、华肖菝葜的干燥块茎。春、秋二季采挖,除去须根及泥沙,洗净,趁鲜切片,晒干。其主要分布于湖南、四川、云南和贵州等地。白

5、土茯苓味甘、淡,性平,主治小便淋涩、白浊、带下、痈肿疮毒。临床多用于治疗筋骨挛痛、瘰疬痈肿、梅毒、钩端螺旋体病。 国内外有关白土茯苓的研究较少。20世纪70年代,曾从白土茯苓中分离得到-谷甾醇(-sitosterol)、棕榈酸(palmaiticacid)和硬脂酸(stearic acid)等1-4。药理实验表明,-谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作用5。目前报道的分析方法有薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-ELSD法等6-8。本试验对白土茯苓中-谷甾醇含量进行测定。在选定的色谱条件下,供试溶液中-谷甾醇与相邻组分分离度良好。经方法学考察,方法的重

6、复性、稳定性、精密度、加样回收率均符合有关规定,可用于该药材的质量控制。 1 仪器与试药 Aglient 1100高效液相色谱仪：AglientG四元泵(Quatpump), Aglient G1322A真空在线脱气机(Degrasser),Aglient G1313A自动进样器(ALS),Aglient G1315 DAD二极管阵列检测器, Aglient chimstation system(安捷伦化学工作站)；电子天平(德国赛多利斯,BP-211D型)；超声波清洗器(KQ3200DB型,昆山市超声仪器有限公司)。 三氯甲烷(天津市申泰化学试剂有限公司)；无水乙醇(北京化工厂)；甲醇(色谱

7、纯,天津科密欧公司)；磷酸(北京红星化工厂)。-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号11085-200504)；白土茯苓(山西振东药业提供,来源为贵州省安顺市多个县区,经本院李先荣教授鉴定为百合科肖菝葜属植物短柱肖菝葜)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：sinachrom ODS-BP(5 m,4.6 mm×250 mm)；检测波长210 nm；流动相：甲醇-0.1%磷酸(982)；流速：1.0 mL/min。理论塔板数均大于3 000。色谱图见图1。注：A.-谷甾醇对照品；B.白土茯苓供试品 图1白土茯苓HPLC图谱 2.2 对照品溶液的制备 精密称取-谷甾醇对照

8、品4.4 mg,置10 mL容量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取白土茯苓粉末约5 g,精密称定,置于锥形瓶中,加三氯甲烷100 mL,浸泡1 h,超声处理(功率150 W,频率40 Hz)1 h,滤过,蒸干,残渣加无水乙醇使溶解并转移置25 mL量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 m)滤过,即得供试品溶液。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取0.5、1、2、5、10、20 L的对照品溶液,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定色谱峰面积。以峰面积为纵坐标,对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为：Y29.621X2.18

9、0 7,r1.000 0。结果显示,进样量在0.228.8 g范围内线性关系良好。 2.5 精密度试验 取对照品溶液10 L,在上述色谱条件下重复进样5次,分别测得-谷甾醇峰面积,结果-谷甾醇峰面积RSD1.03%,表明仪器精密度良好。 2.6 稳定性试验 取同一份样品供试液,分别于配置后0、2、5、9、12 h进样测定,测得-谷甾醇含量的RSD1.80%,表明供试品溶液在12 h内稳定。      2.7 重复性试验 取同一批样品粉末约5 g,共5份,精密称定,分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液,各取20 L分别进样测定,结果-谷甾醇含量平均值为0

10、.073%,RSD0.91%。 2.8 加样回收率试验 取样品5份,每份取粉末约2.         2.7 重复性试验取同一批样品粉末约5 g,共5份,精密称定,分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液,各取20 L分别进样测定,结果-谷甾醇含量平均值为0.073%,RSD0.91%。 2.8 加样回收率试验 取样品5份,每份取粉末约2.5 g,精密称定,准确加入-谷甾醇对照品一定量,按“2.3”项下方法制备,测定含量,计算回收率,结果见表1。表1加样回收率试验结果 2.9 样品含量测定 取3批白土茯苓药材样品,按

11、“2.3”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取10 L,按上述色谱条件测定,结果见表2。表2样品含量测定结果 3 讨论 本试验采用HPLC法测定白土茯苓中-谷甾醇的含量,操作在常温下进行,方法灵敏度高,操作简便、快速,为白土茯苓中-谷甾醇的含量测定提供了可靠的依据。 在选择提取溶剂时,对氯仿、甲醇、乙醇进行了比较,结果表明,氯仿不仅提取效率高,而且杂质少。 在选择提取方法时,对索氏提取法9和超声提取法进行了比较,结果表明,超声提取法时间短、效率高、成本低,优于索氏提取法。 流动相采用甲醇-水(982)时,峰的对称性不好,经改用甲醇-0.1%磷酸流动相系统后峰形状得到了改善,而且分离效果得到了提

12、高。 【参考文献】1 M Luz Cardona. Synthesis of natural polydroxystilbenessJ. Tetrahedron,1986,42(10)：27252730.2 乔 蕾,袁久志,程海燕,等.白土茯苓的化学成分研究J.中药材,2007, 30(10)：12421244.3 阮金兰,邹 健,蔡亚玲,等.菝葜化学成分研究J.中药材,2005,28(1)：2426.4 秦文杰,王钢力,林瑞超.短柱肖菝葜化学成分的研究J.中药材,2007, 30(8)：959960.5 王 莉,杨永杰,陈松华,等.-谷甾醇对子宫颈癌细胞微管系统的影响J.中华医学杂志,2006,86(39)：27712775.6 李英霞,谷颜杰,马承严.HPLC同时测定大豆甾醇提取物中-谷甾醇和豆甾醇的含量J.中成药,