输血后乙型肝炎病毒感染的前瞻性研究

1、    输血后乙型肝炎病毒感染的前瞻性研究        【摘要】目的了解输血后所致乙型肝炎病毒(HBV)感染现状，以及通过检测乙型肝炎病毒表面抗原筛选献血员的效果。方法用酶联免疫吸附测定(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)分别检测了受血者和供血者血清中HBV-M和HBV DNA。结果在583份供血者血中HBV-M阳性326份，HBV DNA阳性57份。136份受血者输血后39份血清HBV-M阳转，阳转率为28.68%；23份HBV DNA阳性，阳性率为16.9%。结论经检

2、测乙型肝炎病毒表面抗原筛选献血员后仍有输血后乙型肝炎病毒感染的可能。【主题词】输血； 肝炎，乙型； 肝炎表面抗原，乙型； 酶联免疫吸附测定； 聚合酶链反应 A prospective study of posttransfusion hepatitis B virus infectionWANG Duchu,TAN Deming, CAO Xijuan.（Department of Transfusion, Xiangya Hospital of Hunan Medical University,Changsha 410008, China）【Abstract】ObjectiveTo unde

3、rstand the status of HBV posttransfusion infection after blood HBsAg screening of the blood donors.MethodsSerum samples of blood recipients and donors were detected for HBV-M and HBV DNA by ELISA technigue and polymerase chain reaction respectively.ResultsThere were 326 sera positive for HBV-M and 5

4、7 for HBV DNA in 583 blood donors sera. 39 sera were positive for HBV-M and 23 positive for HBV-DNA in 136 sera of blood recipients, the positive seroconversion rates were 28.68% and 16.9% respectively.ConclusionThere is high incidence of HBV infection in blood donors though they have been screened

5、for HBsAg. The posttransfusion HBV infections are still occurring, therefore, the blood donors should be strictly tested for HBV-M.If conditions are possible, the HBV DNA had better been screened.【Key words】Blood transfusion; Hepatitis B; Hepatitis B surface antigen; Polymerase chain reaction(PCR);

6、Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)为了解输血后所致乙型肝炎病毒感染的现状和通过检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)筛选献血员的效果，我们用酶联免疫法和聚合酶链反应分别检测献血员和受血者血清中乙型肝炎病毒标志物(HBC-M)和HBV DNA，对乙型肝炎病毒输血后感染的发生进行了前瞻性研究。1材料和方法1.1研究对象1996年7月至1997年5月在湘雅医院接受输血治疗的住院患者，符合下列条件者为研究对象：既往无输血及使用血液制品史；无肝炎病史，肝功能正常；乙型肝炎病毒标志物(HBC-M)均为阴性，HBV DNA为阴性；在住院期间无肝炎接触史；研究对

7、象于输血前，输血后1，3，6个月随访采血。共收集187例受血者血清，6例于随访期间因原发病死亡，45例在随访期间不能配合或失访。最后136例完成200天的随访。其中男性94例，女性42例，年龄272岁。输血量4005 000 ml。1.2供血本组共583份合格血，由湖南省某血站提供。其中男性198人，女性385人。年龄在18岁至55岁。所提供的合格血液均经过乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV，)，梅毒不加热反应(USR)的初检和复查，血红蛋白(Hb)和丙氨酸转氨酶(ALT)均在正常值范围。所收集的标本及时分离血清，-30冷冻保存

8、待用。1.3HBV-M的检测HBV-M的检测用ELISA，试剂盒由上海实业科华生物工程公司提供，批号950410-950427。按说明书严格操作，用伯乐550型酶标仪判定吸光度A值(旧称光密度OD值)。1.4HBV DNA的检测用PCR法取血清20 l加等量标本变性液，混匀，置9710 min，15 000 r/min离心5 min，取上清10 l加入PCR缓冲液中，最后反应体积为50 l，其中含50 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0),1.5 mmol/L MgCl2,1%gelation,200 mmol/L dNTP,25 mmol/L HBV DNA特异性引物1和引物2(引

9、物1位于前C区1 740-1 759碱基片段，序列为5-CTGGGGGGGAGATTAGGTT-3；引物2位于前C区1 940-1 959碱基片段，序列为5-GGCAA AAACGAAAGTAACTC-3)，TaqDNA聚合酶3 U，反应液上复盖石腊油后，置PerKin-Elmer自动PCR仪上94 30 s,55 30 s,72 30 s,共35个循环，然后72延伸10 min。PCR产物经1%琼酯糖电泳，0.5 g/ml溴化乙啶染色，紫外光下观察结果。HBV DNA特异性引物由上海肿瘤研究所提供，其余试剂购自洛阳华美生物工程公司。1.5血清ALT的检测采用改良赖式法。1.6统计方法采用x2

10、检验。2结果2.1合格血中HBV的检测结果从583例合格血标本中检出326份HBC-M阳性，阳性率为55.9%(326/583)；HBV DNA阳性57份，阳性率为9.78%(57/583)。HBV DNA阳性与HBV-M检出的关系见表1。在326份HBV-M阳性血中有55份HBV DNA阳性，阳性率为16.87%(55/326)；257份HBV-M全部阴性组，其中只有2份HBV DNA阳性，阳性率为0.78%(2/25)；两组经统计学处理P<0.01。表1583份HBsAg阴性血清中HBV DNA的检出与HBV-M的关系Tab.1The relation between HBV DNA

11、 and HBV-M in 583 HBsAg negative donorssera分类typeHBV DNA阳性数(%)HBV DNA positive no.(%)HBV-M阳性Anti-HBs323(9.38)Anti-HBe452(4.44)Anti-HBc9314(15.05)Anti-HBs，HBe，HBc183(16.67)Anti-HBs，HBe337(21.21)Anti-HBs，HBc318(25.81)Anti-HBe，HBc7216(22.22)HBeAg22(100)HBV-M negative2572(0.34)合计Total58357(9.78) &#

12、160;   2.2受血者输血后HBV的感染状况136例受血者输血后HBV-M阳转39例，阳转率为28.68%(39/136)。其中23例HBV DNA阳性。输血后1个月检测到HBV DNA3例，3个月21例，6个月18例。136例受血者无论HBV-M阳转与否，均无明显肝炎症状，血清ALT均正常。受血者输血后HBV的感染与供血中的HBV-M及HBV DNA阳性关系见表2。表2输血后HBV感染与供血者HBV的感染状况Tab.2Posttransfusion HBV infection and the status of donors HBV infection分类供血者HBV

13、感染的状况Status of donorsHBV infection输血后HBV感染的状况Posttransfusion HBV infection of recipientsTypeHBV-M阳性数No HBV-M positiveHBV DNA阳性数No HBV DNA positiveHBV-M阳性数No HBV-M positiveHBV DNA阳性数No HBV DNA positiveAnti-HBs32363Anti-HBe45221Anti-HBc931475Anti-HBs,HBe,HBc18321Anti-HBs,HBe33742Anti-HBs,HBc31864Anti-

14、HBe,HBc7216127HBeAg22HBV-M negative2合计Total326573923     2.3输血后HBV感染与供血HBV DNA的关系136例受血者输血后HBV-M阳转者，39例均输入了HBV DNA阳性的血，输入血量最少400 ml，最多3 000 ml,100%促使受血者HBV-M阳转。 3讨论输血是传播HBV感染的主要途径之一。自1970年初应用HBsAg筛选献血员以来，输血后乙型肝炎病毒感染明显下降。过去的研究表明，以输血后HBsAg阳转为标准的输血后HBV感染率为0%3%1，2。本研究136例受血者观察6个月以上未见

15、HBsAg，但有其它的HBV-M阳转，提示有可能发生输血后HBV感染。在受血者HBV感染中，尽管有的HBV DNA是一过性的，但最早能在输血后一个月检测到HBV DNA。57份HBV DNA阳性血，其中55份来自HBV-M阳性，2份来自HBV-M均阴性者血。本研究结果揭示凡是输入了HBV DNA的受血者，能促使HBV-M 100%阳转。而HBV DNA阴性则未发现HBV-M阳转。提示HBV DNA 是输血后HBV感染源。受血者通过输血能否感染HBV，又能否发病，与输入体内HBV DNA复制的强弱、输入体内HBV DNA的量有关。更重要的与被感染者免疫功能正常与否有关。结合本研究39例输血后HB

16、V感染情况，输血后HBV感染在受血者体内大约有3种转归：受血者免疫功能正常，感染到体内的HBV DNA量较少或者复制能力差，被免疫功能所抑制或灭活。表现为受血者体内检测不到HBV DNA或者HBV-M中某些抗体的阳转；受血者输入了较大剂量的HBV DNA或者其复制活跃，正常的免疫功能处于与之搏斗的相持阶段。肝功能正常，肝脏未遭到伤害。表现为能检测到受血者体内HBV DNA及HBV-M的某些抗体。本文39例输血后HBV感染除上述1种情况外，都应属于此。由于某种或某些原因使受血者免疫功能降低，而输入的HBV DNA复制活跃或数量较大，导致肝功能异常，肝脏受到伤害。表现为受血者HBV DNA与HBV

17、-M中的抗原为阳性。随着时间的推移，病情的恶化，有可能导致肝硬化、肝细胞癌。至于免疫功能与HBV DNA之间的相互变化、转归机制有待我们进一步去探讨。这些都提示我们，凡属免疫功能不全或低下者进行输血治疗时，要选择HBV DNA阴性的血液，以免发生输血后HB、或输血后HBV感染、或病毒性肝炎相关性再生障碍性贫血(HAAA)3。在39例输血后HBV感染中，尽管无肝功能异常，但有23例HBV DNA阳性，阳性率16.91%(33/136)。提示输血后隐匿型HBV DNA感染不可忽视。我们目前筛选献血员HBsAg的方法要进一步完善。因为HBsAg本身只是HBV感染的标志之一。不能完全反映有无病毒的复制

18、、复制程度，传染性的强弱及预后。更何况HBV-M感染后的病毒基因突变可使HBsAg合成水平降低，以致查不出HBsAg4。为确保供血质量和受血者健康，我们认为以HBV-M皆为阴性作为筛选献血员标准较妥。有条件的地方或对某些病种，最好以HBV DNA为阴性作为筛选标准，才能最大限度地杜绝乙型肝炎的血源性传播。本文受湖南省科委资助(97SSY1045)作者单位：王笃初（410008长沙，湖南医科大学湘雅医院输血科）谭德明（410008长沙，湖南医科大学湘雅医院输血科）曹希娟（410008长沙，湖南医科大学湘雅医院输血科）参考文献1，盛端垦，王受霞，许少侠，等.输血后丙型肝炎的前瞻性研究.中国医学论坛报，1995年9月14