去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元电活动的影响

1、去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元电活动的影响                 作者：关艳中，金秀东，张书捷，刘桂莲，徐满英  【摘要】  目的：去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元电活动的 影响 . 方法 ：以串刺激刺激右侧坐骨神经为伤害性刺激，用玻璃微电极细胞外记录大鼠束旁核痛反应神经元电活动. 结果：去甲肾上腺素使吗啡成瘾大鼠束旁核痛兴奋神经元诱发放电潜伏期延长，诱发放电频率降低，抑制痛兴奋神

2、经元电活动. 同时使痛抑制神经元抑制时程缩短，诱发放电频率增加，促进痛抑制神经元活动. 结论：去甲肾上腺素抑制吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元诱发放电，具有镇痛作用. 【关键词】  去甲肾上腺素；吗啡依赖；大鼠；束旁核；痛反应神经元       0引言     近年来的 研究 认为束旁核（Pf）是皮层下一个主要的调制痛觉的中枢结构. 1973年张香桐等发现在大鼠Pf内存在一些对伤害性刺激起兴奋反应的痛敏神经元，称为痛兴奋神经元（PEN）. 1976年孙明智等发现，大鼠Pf内还存在着对伤害性刺激起抑制反应的神

3、经元，称为痛抑制神经元(PIN),并且PEN和PIN两者相互配合活动，共同调制痛觉. 疼痛症状群是吗啡成瘾常见的急性戒断症状. 是一种让人难以忍受的极其痛苦的戒断反应，至今仍无理想的 治疗 药物. 本室以往的工作已经证明去甲肾上腺素明显减轻吗啡成瘾大鼠的大部分戒断症状1. 本实验我们探讨去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛兴奋神经元电活动的影响.     1材料和方法     1.1材料Wistar大鼠（哈尔滨医科大学实验动物中心提供），盐酸吗啡（沈阳第一制药厂），重酒石酸去甲肾上腺素（天津市氨基酸公司人民制药厂），自动抽注机(ZCZ5

4、0,原浙江医科大学医学仪器厂)，微电极操纵器(SM11和SM21,Narishige)，放电信号经放大器(JSD731F,广东师院无线电厂)，双道磁带录音器(STCH707X,Panasonic)，Powerlab / 8 s(ADInstruments)数据处理器， 电子 刺激器(SEN3301,Nihon Kohden).     1.2方法     1.2.1吗啡成瘾大鼠模型制备参照Koob吗啡成瘾大鼠模型制备方法. Wistar大鼠，体质量240280 g. 自然 光下，大鼠自由饮水、摄食. 模型制备：实验组大鼠按剂量逐日递增

5、的原则，背部皮下注射盐酸吗啡：连续注6 d，药量逐天分别为5，10，20，40，50，60 mg/kg， 3次/d（08：00，12：00，16：00点）.     1.2.2实验动物及分组40只成瘾大鼠, 随机分为实验组和对照组，以氨基甲酸乙酯(500 mg/kg)和氯醛糖(50 mg/kg)混合液麻醉下施行常规手术. 动物清醒后,腹腔注射氯化箭毒碱(1 mg/kg)制动,施行人工呼吸(8次/min). 用自动抽注机向脑室内匀速注入10 L重酒石酸去甲肾上腺素(1 g/L),2 min内注射完毕，对照组注射同等剂量生理盐水.    

6、 1.2.3Pf核立体定位大鼠头部固定在脑立体定位仪(SN2,Narishige)上,按照Pellegrino图谱B坐标系统定位(mm),束旁核(A:-2.2 -2.6;L /R:1.01.4; H:5.56.5);在侧脑室(A:0.1;R:1.5;H:3.0)插入外径0.8 mm的不锈钢套管供注药用.     1.2.4微电极记录将内充KCl（3 mol/L）、直流电阻为1030 M的两根玻璃微电极分别固定于微电极操纵器上,同时插入两侧束旁核引导放电,放电信号经放大器显示于示波器上,由双道磁带录音器记录. 经Powerlab/8 s (ADInstruments

7、)数据处理器处理后输入 计算 机,用Chart v4.1.2软件 分析 . 用电子刺激器发出的串脉冲(参数为电压强度28 V,波宽0.3 ms,间隔5 ms,每串脉冲5个)刺激右侧坐骨神经作为伤害性刺激,以移动关节和触毛作为非伤害性刺激,鉴别痛反应神经元. 实验结束后,将充灌有20g/L滂胺天蓝的记录微电极通直流电(25 A阴极,30 s),标记微电极尖端位置.     统计学处理: 实验数据以x±s表示. 组内前后比较用配对t检验，组间样本均数的比较用成组t检验. P<0.05表示有统计学意义.     2结果 &#

8、160;   2.1脑室注射NE对吗啡成瘾大鼠Pf PEN电活动的 影响 在实验组8只吗啡成瘾大鼠共记录到18个PEN. PEN在注射NE后诱发放电潜伏期延长，净增值减小（图1）. 18个PEN在脑室注射NE 后，诱发放电潜伏期开始延长，注药后412 min PEN诱发放电潜伏期的增加量与注药前及生理盐水同期对照组相比有统计学差异（P<0.05，P<0.01）. 在注药后30 min PEN诱发放电潜伏期逐渐恢复至正常（图2）. 在注射NE后，PEN诱发放电的净增值开始减少，注药后012 min， PEN诱发放电净增值的增加量与注药前及生理盐水对照组同期相比具有

9、统计学差异（P<0.05，P<0.01）. 注药后30 min PEN诱发放电净增值逐渐恢复至正常（图3）. 生理盐水对照组PEN诱发放电潜伏期及净增值的变化在注药前、后无统计学差异（P>0.05）.     2.2脑室注射NE对吗啡成瘾大鼠Pf PIN电活动的影响在8只吗啡成瘾大鼠记录到8个PIN，在注射NE后诱发放电抑制时程缩短，净增值增加（图4）. 注NE后即刻PIN诱发放电抑制时程开始缩短，注NE后018 min，PIN诱发放电抑制时程减少量与注NE前及生理盐水同期对照组相比有统计学差异（P<0.05，P<0.01），至注NE

10、后30 min，PIN诱发放电抑制时程逐渐恢复至正常（图5）. 注NE后即刻，PIN诱发放电净增值开始增加，注NE后418 min，PIN诱发放电净增值与注NE前及生理盐水对照组同期相比有显著差异（P<0.05，P<0.01），注NE后30 min，PIN诱发放电净增值逐渐恢复至正常（图6）. 生理盐水对照组PIN诱发放电抑制时程及净增值的变化在注药前、后无统计学差异（P>0.05）.     A: 脑室注生理盐水；B:脑室注NE；X：注NE或生理盐水前；4，12，30：注生理盐水或NE后时间（min）； :刺激伪迹； :注生理盐水(A)或NE(

11、B).     3讨论     本实验结果表明，去甲肾上腺素使吗啡成瘾大鼠束旁核痛兴奋神经元诱发放电潜伏期延长，诱发放电频率减小，抑制痛兴奋神经元电活动. 同时使痛抑制神经元抑制时程缩短，诱发放电频率增加，促进痛抑制神经元活动.     临床常用损毁丘脑中央中核、束旁核 治疗 恶痛，该 方法 无感觉缺失等并发症，对缓解各种恶痛，特别是丘脑痛、中枢性疼痛有效2. 以脑干中线结构为中心的许多脑结构，组成调制脊髓痛觉信息传递的下行抑制系统， NE和5羟色胺等多种化学物质在下行抑制系统中起重要作用. NE抑制C类

12、纤维将外周伤害性刺激传入脊髓侧角3，并且NE重摄取抑制剂减轻伤害性刺激引起的早期疼痛4.  永久性减少NE脊神经纤维对痛阈影响不大，NE的镇痛作用可能与调控阿片类神经递质系统的活动有关5. 阿片依赖和耐受时，蓝斑NE能神经元的电活动被抑制，NE释放减少. 用微量NE作脑室注射能延长热板法测痛的阈值，其镇痛作用能为脑室注射受体阻断剂酚妥拉明所抵消. 脑室注射NE 4080g时表现痛觉过敏6. 然而NE重摄取抑制剂明显减轻周围病理性疼痛，提示中枢和周围可能有着不同的疼痛及镇痛机制7. 在脊髓以上的中枢，NE对疼痛的影响是复杂的，和某中枢的具体位点、肾上腺素受体亚型的分布、疼痛的时间及当时

13、病理状况有关. 在基础条件下，NE几乎不调节疼痛，但持续疼痛可导致NE负反馈抑制疼痛8.     结果表明，去甲肾上腺素使吗啡成瘾大鼠束旁核痛兴奋神经元诱发放电潜伏期延长，诱发放电频率减小，抑制痛兴奋神经元电活动，同时促进痛抑制神经元活动. 提示去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠可能具有良好的镇痛作用. 又因其抑制吗啡成瘾大鼠戒断症状的作用显著，故进一步探讨去甲肾上腺素的详细作用机制为临床脱瘾药物的研制提供新的靶点，为脱瘾治疗提供新的思路.   【 参考 文献 】  1 关艳中，徐满英，阎彬彬，等. 去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠戒断症状的影响J. 哈尔滨

14、医科大学学报, 2003，37（5）：376-378.2 Saadé NE, Al Amin H, Abdel Baki S, et al. Reversible attenuation of neuropathiclike manifestations in rats by lesions or local blocks of the intralaminar or the medial thalamic nucleiJ.Exp Neurol, 2007, 204(1):205-219.3 Lu Y, Perl ER. Selective action of noradrenali

15、ne and serotonin on neurones of the spinal superficial dorsal horn in the ratJ. J Physiol, 2007, 582(Pt 1):127-136.4 Gilron I, Watson CP, Cahill CM, et al. Neuropathic pain: a practical guide for the clinicianJ. CMAJ, 2006, 175(3):265-275.5 Jasmin L, Boudah A, Ohara PT. Longterm effects of decreased noradrenergic central nervous system innervation on pain behavior and opioid antinociceptionJ. J Comp Neurol, 2003, 460(1):38-55.6 Jrum E, rstavik K, Schmidt R. Catecholamineinduced excitation of nociceptors in sympathetically maintained painJ. Pain, 2007,127(3):296-30