细菌DNA提取试剂盒

1、细菌DNA提取试剂盒Bacterial DNAout货号: M090073产品及特点 本产品可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。1. DNA纯净，OD260/280一般都在左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。2. DNA产量一般在5-20 ug/mL饱和菌液（108-109个细胞）。3. 操作简单，整个过程约15分钟，容易放量操作。4. 每次提取可以处理 mL的细菌，也可以使用菌落。5. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。6. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。规格及成分 成份50 次包装溶菌酶600 mg溶液A30 mL溶液B m

2、LRNase A溶液750 uL使用手册1份运输及保存常温运输，4保存。使用方法注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B比较粘稠，用前均需要放置在65预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。一: 对革氏阴性细菌样品1. 将 mL过夜培养的菌液转移到1.5 mL塑料离心管中， 12000-15000 g室温离心1分钟沉淀细菌，弃上清。2. 加入600 uL预热的溶液A到细菌沉淀中，充分吹打均匀。3. 再加入150 uL 预热的溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠，可以采取称量方法取用，150 uL 约等于150-160 mg。也可以将1 mL

3、枪头剪去一截再吸取。也可以同时加入15 uL的RNase A溶液。4. 65放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。5. 加入200 uL自备氯仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。6. 12000-15000 g室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5 mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。7. 加入1倍体积(约750 uL)的异丙醇到上清液中，用手上下颠倒30秒混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。8. 12000-15000 g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀，小心弃上清，注意不要丟弃DNA沉淀。9. 在离

4、心管中加1 mL 75%乙醇，短暂震荡，12000-15000 g室温离心3分钟，弃上清。10. 重复上述操作一次。11. 短暂离心，小心吸弃残留的液体（约50 µL）。此步不要省略，否则残留的液体（含乙醇）将会影响DNA电泳、酶切很PCR等反应。12. 立即加入50-100 µL TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。注意：由于基因组DNA较长并在沉淀时形成紧密复合物，充分溶解的时间远长于质粒DNA或PCR片段，有时需要长达数小时。如果在第3步没有加RNase A溶液，或虽然加了但还担心有残留的RNA污染，可以在此时补加5-10 uL 的RNase A溶液，保温30分钟。13.

5、直接取5-10 uL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。二: 对革氏阳性细菌样品1. 将 mL过夜培养的革氏阳性细菌12000-15000 g室温离心1分钟后, 重悬于 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL超纯水+600 mg溶菌酶，配制后最好分装成小管并放-20长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10次后放37保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。2. 12000-15000 g室温离心10分钟，小心弃上清。3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。三: 其他注意事项1. 可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中，后续操作同上。2. 从单个菌落中提取到的DNA较少，所以只用10-30 uL TE溶解。背景资料G+和G-细菌细胞壁比较细胞壁特性革氏阴性菌革氏阳性菌 厚度 10 nm20-80 nm细胞膜层数 21肽聚糖（Peptidoglycan）含量 10-20%>50%磷壁酸（Teichoic acid