BJS201705食品中香兰素甲基香兰素和乙基香兰素的测定

1、附件1食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定BJS 2017051范围本方法规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的高效液相色谱-串联质谱的测定方法。 本方法适用于液体乳、稀奶油、婴幼儿配方乳粉（不包描特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉）、婴 幼儿谷类辅助食品、眷物61（磨加工品、植物油脂等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测 定。2原理样品经乙睛捉取后，再以正己烷除脂净化，高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB T6682规定的级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CHO）:色谱纯。4乙睛（C3.1.2HN）:色谱纯。32甲酸CC

2、HO3.1.3：色谱纯。22 正己烷（CH3.1.4 ）:色谱纯。w<s氯化钠（NaCl）: 3.1.5在5509灼烧后备用。0.1%甲酸水溶液：量取lOmL 3.1.6甲酸并加入水定容至lOOOniLo3.2标准品香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素标准品纯度>98.0%.中文名称、英文名称、CAS登录号、分 了式、相对分了质量和结构式等信息详见附录A表A.1。3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液Cl.00mg.mL）：分别称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素O.lg（精确至O.OOOlg）标准物质于lOOniL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度。避光于-ISC下 保存，保存期为6个月

3、。332混合标准储备溶液：分别吸战上述三种标准储备液l.OOinL于同一 lOOiuL容量瓶中，用乙稀释到刻度配制成浓度为lOyg'mL的混合标准储备溶液，避光于-18°C保存，保存期为1个月。333空白基质溶液：按照6.1规定的前处理方法操作制备空白基质溶液。基质混合标准系列工作液：分别准确吸取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准334储备 液适量（332）,用空口基质提取液（333）将其稀释为5ngmL、lOngJmL、2Ong/niL. 40ngmL、 SOnginL. leOnginL标准系列工作溶液，临用时配制。液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离了源。 涡旋混合器。

4、超声波清洗器。离心机；转速55000r/mui.分析天平；感虽：0.1mg和O.Olg。4仪器和设备4142434445 5试样制备婴幼儿谷类辅助食品、谷物碾磨加工品需粉碎混匀，使其全部可以通过425 U m的标准网筛：其 它样品无需特殊制备。6分析步骤6.1样品的制备与提取6丄1婴幼儿配方乳粉、婴幼儿谷类辅助食骷：称取Ig样品（精确至001g）宜于5OinL聚丙烯离心管中， 加入3mL水，涡旋振荡30s.加入7mL乙睹（3.12）-涡旋振荡30s超声处理25nim lOOOOr/mm离心5min 后，取上层清液2mL于lOmL玻璃离心管中，加入ImL正己烷（3丄4）,涡旋混合30s, 500

5、0r/min离心3mm 后，取下层清液，过滤膜（0.22 um,有机相），待分析。6.1.2液体乳（巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳等）、稀奶油：称取2g样品（蒂确至O.Olg）.置于 50mL聚丙烯离心管中，加入20mL乙睛（3丄2）,涡旋振荡30s,超声处理25mim加入Ig氯化 钠（3.1.5）, lOOOOr/min离心511血后取上层淸液2mL于lOmL玻璃离心管中，加入ImL正己 烷（3丄4）,涡旋混合30s, 5000rmin离心3mm后.取下层清液，过滤膜（022 urn.有机相）， 待分析。6.13谷物碾磨加工品（人米等）：称取Ig样品（蒂确至O.Olg）,置于501UL聚丙烯离心

6、管中， 加入3mL水，涡旋振荡30$,加入7mL乙猜（3丄2人涡旋摭荡30$,超声处理25min. lOOOOr/min 离心5min后，取上层淸液过0.22uin滤膜（4.&）,待分析：6丄4苗物油脂：称取Ig样品（精确至0.01g）置于50mL聚丙烯离心管中，加入ImL水和lOmL乙B （3.1.2）.涡旋振荡30$,超声处理25min,加入Ig氯化钠（3丄5，lOOOOr/min 心5mm后，取上层清液2mL于lOmL玻璃离心管中，加入ImL正己烷（3丄4，涡旋混合30s, 5000r/mni离心3miii后，取下层淸液，过滤膜（0.22 um,有机相），待分析。6.2仪器参考条

7、件色谱条件 621a）色谱柱：XDBC18柱，46mmX50mm, 1.8?m,或性能相当者。b)c)d)e)流动相：A： 0.1%甲酸水溶液，B：甲醇，梯度洗脱条件见农1。 流速：03mL hiiiio柱温：30oC.进样量：2uLq表1梯度洗脱条件时间nil相相2575025750.5502505065090 7 1090 10 9257512质谱条件622离子源：电喷雾离了源。f)g) 扫描方式：正离了扫描(ESI+) =h) 检测方式：多反应监测(XIRil).1)离了化电压、雾化气、辅助气、气帘气压力、雾化温度应优化至最佳灵敏度，监测离子对和 定量离了对及其他质谱参数见附录B中表B.

8、1,6.3测定631标准曲线的制作用混合标准系列工作溶液(334)分别按仪器参考条件(6.2)进行测定，得到相应的标准溶液的色 谱峰面积，以混合标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标.绘制标准曲线。632定性测定在相同试验条件下测定样品和基质混合标准工作溶液,记录样品和标准工作溶液中目标物的保留 时间。若样品中检出与基质混合标准溶液(334)中待测物保留时间一致的色谱峰，且其定性离了与浓度相当的标准溶液中相应的定性离了的相对丰度相比偏差不超过衣2规定的 范围，则可以确定样品中检出相应的待测物。农2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离了丰度/% >50 2050 1020

9、 W10±±2050±25±30/%允许的相对偏差定量测定633将样品溶液（&.1）按仪器参考条件（6.2）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积，根据 标准曲线査得待测液中各组分的浓度。样品中各待测组分的响应值应在标准曲线的线性响应范禺 内，如果含量超出线性范圉，则重新取样分析，用乙脂稀释到适当浓度后测定。混合标准工作溶 液的高效液相色谱-串联质谱MRM色谱图参见图C.lo7结果计算按下式（1计算样品中单种目标化合物的含量：c?V?1000?X（1）m?1000式中：X一一样品中待测组分的含量，单位为微克每千克（ugHg；C一一从标准曲线中读

10、ib的测定液中各待测组分的浓度，单位为微克每升（ugi）：m 样品称取的质量单位为克（g）；V-样品溶液定容体积，单位为亳升（mL）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值衣示，结果保留至小数点后一位。 8检测方法的灵敏度、准确度、精密度8.1灵敏度当液体乳称样量为2g”植物油脂、稀奶油、谷物碾磨加工品、婴幼儿配方乳粉、婴幼儿谷类辅 助食品称样量Ig时，香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的捡出限为30.0ug/kg.定量限为100.0M 0kg Q&2准确度本方法婴幼儿配方乳粉、液体乳、植物油脂、稀奶油、眷物磔磨加工品、婴幼儿谷类辅助食品在 100.01000.0 ug/

11、kg添加浓度范围内回收率为78.6%118.4%.83精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差不得超过算数平均值的10%。附录香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素三种化合物 相关信息CAS登录号、分了式、相对分了质量和结构式A.1农中文名称、英文名称.名称英文名CAS分了式相对分了质量结构式香兰素anillm121-33-5CHOjss152.14HOOHO甲基香兰 素Methyhanillin120-14-90 CHjxo166.17HOOO乙基香兰 素Ethykanillin121-32-4CHOhw166.17HOOHOCH 3附录参考质谱条件质谱参数：a）离了源li喷雾离了源：（E

12、SI+）： b）扫描方式：正离了扫描（MRM）： c）检测方式：多反应监测55OOV：离子化电圧(IS)=d)(Gasl):5Opsi e)雾化气(Gas2):50psi f)辅助气:(CUR)： 35psig)气帘气压力C： (TEM)： 500h)雾化温度。i)定性离子对、定量离了对及其他质谱参数见 农BJ三种化合物的定性离了对、定量离了对和质谱分析参数B1衣序号分析物离了对m/z去簇电压V碰撞能量eV入口电压V出口电压V1香兰素153.1/934*90191013153.1Z125.0901410139甲基香兰 素167.2/139.0*100171013167.2/124.010025

13、10133乙基香兰 素167.2/111.0*90171013167.2/93 090231013:定S离子测定前砲将质谱参B：附录注所列参考质谱条件仅供参考当釆用不同质谱仪器时.仪器参数可能存在差异数优化到附录香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的标准色谱5MS.9d100iCO "M r、' «« tl1SJJn25X)iS3.1/911%OOft2UlOO%OimOstoiznmeiimn)167.2/n9J%0i2tOQ246TMe(miflZ411O0 H 乙慕希 ” *««« f167,111,0%0024162124,1i2i06eo24Bmef ff A4e