石蜡切片的制作

1、石蜡切片的制作1、取材根据实验要求从标本中切取适当位置和大小的组织块，大小以 1.5cmx 1.5cmx( 0.2-0.3 ) cm为宜。2、固定标本从活体取下后应及时固定，根据组织块大小确定固定时 间。固定液为 10%中性福尔马林，一般固定时间为 24 小时内。其 作用主要有一、能防止细菌的腐蚀和组织的自溶；二、保存细胞固有的物质， 能凝固或沉淀细胞内或组织液， 糖元等；三、使组织硬化，便于切块。3、脱水 把含于组织内或细胞内的水份用脱水剂把其置换出来的过程称 组织脱水。 现在大多数用的是酒精来脱水， 但是酒精容易使组织硬化 和变脆。因此在使用时，通常是从低浓度至高浓度，浓度系列一般是 70

2、%、80%、 90%、 95%和 100%。水与二甲苯不互溶，因此水未脱完全 进入二甲苯会出现白雾状现象。操作步骤如下： 75%乙醇：1h。 85%乙醇： 1h。 95%乙 醇I: 1h。 95%乙醇1h。 无水乙醇I: 1.5h。 无水乙醇H: 1.5h。4、透明组织经过一系列酒精的处理后， 虽然组织里所含有的水分已基本 上被脱去， 但是组织脱水时机里可残留着许多酒精， 酒精不能溶解石 蜡，必须寻找一种既能与酒精混合，又能溶解石蜡的试剂，方能使石 蜡浸入到组织中去， 这类物质被称为透明剂。 二甲苯是目前最常用的 透明剂。二甲苯对组织的硬化程度特强，如果在其放置过长，就会引 起组织的硬脆，难切

3、片。操作步骤如下: 二甲苯I: 20mi n。 二甲苯H： 30min。5、浸蜡组织经过透明剂的完全透明后，被放于 65 c 左右熔化的石蜡中 浸渍的过程称为浸蜡。操作步骤如下:石蜡I: 30min石蜡H: 1h。石蜡皿：1h。6、 包埋包埋前必须确定包埋机中的石蜡已融化，并打开冷冻台。 将待包埋的标本至于包埋机两侧的槽内 （避免标本石蜡凝固） ， 仔细看清号码，从最前面的号码开始包。 将包埋模具放于包埋机出蜡口。 用镊子将包埋盒从脱水篮中拿出 用手将包埋盒盖子打开。 更换镊子。 将组织放入包埋模、压平。（仔细观察包埋面，如有线结、钢 针等必须去除）。 将包埋盒放于包埋模上，注蜡，不能有气泡。

4、 将包好的包埋模放于冷台上。 用此镊子将下一个包埋盒从脱水篮中拿出。 严禁将包埋盒拿出后放在台子上，包另一个组织。? 待冷台上的蜡块冷却后，除去模具，修掉边缘多余的蜡，按顺 序放在冰盒上置于-20 C冰箱待切。7、切片 先将蜡块在一20 C冻20min左右。 提前开启摊片机并设定温度为45C左右（比石蜡熔点低10C -12 C为宜）。 将石蜡块固定在标本架上。 选择粗调修片至标本的最大面。（可用旧刀口修） 选择细调及切片厚度，切片。（换成新刀口切） 切片时先切下几刀，用左手的毛笔托起，然后右手边转左手边 轻拉，有时也可轻吹切片使其展平。 用镊子夹起切片摊于水面，展平后捞片。 写上编号，竖着玻片

5、将水沥干。8、HE 染色操作步骤1) 烤片石蜡切片染色前置65C烤片45min-1h。(使蜡溶解并能让组织与 玻片贴的更牢。)2) 脱蜡 二甲苯I: 10mi n。 二甲苯10mi n。3) 返水 无水乙醇I: 1mi n。 无水乙醇1min。 95%乙 醇I: 1mi n。 95%乙醇 H: 1min。 85%乙醇: 1min。 75%乙醇: 1min。 自然水: 2min。4) 染色 苏木素: 1-5min 。 水洗: 1-8min 。 ( 返蓝) 伊红； 20S-5min。 水洗: 30S。5) 脱水 由于伊红是醇溶的，在低浓度酒精中易褪色，故不宜太长时间。 75%乙醇: 20S。 85%乙醇: 30S。 95%乙 醇I: 1mi n。 95%乙醇 H: 1min。 无水乙醇I: 1mi n。 无水乙